缺血再灌注损伤对新生鼠肾小管上皮细胞calpain的影响

calpain是一种钙依赖性半胱氨酸蛋白酶,钙离子浓度升高使其激活。细胞骨架蛋白和膜蛋白都是calpain的水解底物。过去calpain被认为介导了缺氧对心脏、肝脏和大脑所致的损伤。现在的研究发现其在缺血再灌注导致肾小管上皮细胞损伤过程中也起了重要的作用。2002年1月-2003年3月,我们进行实验研究,探讨新生大鼠肾小管上皮细胞在缺血再灌注不同时段calpain变化的特点,calpain对细胞骨架蛋白α-辅肌动蛋白（α-actinin）、F-肌动蛋白（F-actin）和细胞膜黏合分子β1-整合素（β1-integrin）的水解作用以及探讨calpain抑制剂对上述蛋白的保护作用。     

Hydrolysis of soy isoflavone conjugates using enzyme may underestimate isoflavone concentrations in tissue

Objective: To investigate the differences of using enzymatic hydrolysis and acid hydrolysis for identification and quantification of isoflavone aglycones from biomatrices. Methods: β-glucuronidase/sulfatase isolated from Helix pomat/a for routine enzy-matic hydrolysis or 6N HC1 was used to release glucuronide and sulfate conjugates in the serum, urine and tissue samples. Profiles of soy isoflavones after enzymatic hydrolysis or acid hydrolysis in several tissues of rat fed with diets containing soy protein isolate were also com-pared using I.C/MS and HPLC-ECD. Results: Acid hydrolysis released more aglycone than enzymatic digestion (P＜0.05) in liver tissue. The total genistein, daidzein and other metabolites were 20% to 60% lower in samples from enzymatic hydrolysis than in acid hydrolysis. Conclusion: These results indicated that unknown factors in tissues reduced the enzymatic hydrolytic efficiency for releasing isoflavone aglycones even in op optimized condition. This would underestimate isoflavone tissue concentrations up to 60%.     

血小板特异性受体糖蛋白Ⅰb与Ⅳ的研究进展

血小板于机体止凝血过程中发挥至关重要作用.随着对出凝血疾病相关研究的逐步深入,大量相关研究结果证实,血小板特异性受体糖蛋白(GP)Ⅵ与GPⅠb-Ⅸ-Ⅴ复合物中的主要配体结合亚基GPⅠb,在血小板生理功能,如血栓与止凝血过程中起重要调节作用,其表达水平或功能异常与诸多出凝血疾病发生相关.深入研究血小板特异性受体GPⅠ b与GPⅥ的调节机制,有助于评估或预测相关疾病患者出凝血倾向,对指导临床治疗具有重要现实意义.笔者拟就血小板特异性受体GPⅠ b与GPⅥ结构、功能、调节机制及其在出凝血疾病中的临床意义进行综述.     

胃酶酸解法测定肝组织羟脯氨酸含量

目的 建立一种可信度、敏感度高,适合于测定微量组织羟脯氨酸(hydroxyproline, HYP)含量的方法--胃酶酸解法.方法 在组织、重量、氧化时间、显色温度、样品中盐浓度及对二甲氨基苯甲醛(PDAB)一定的条件下,对胃酶酸解法和传统盐酸水解法进行比较.结果 在相同条件下,传统盐酸水解法测得HYP平均含量为(0.7788±0.4745) μg/ml;胃酶酸解法测得HYP平均含量为(3.9274±0.3940)μg/ml,两者比较差异有统计学意义(P＜0 01).结论 胃酶酸解法的可信度、敏感度均优于传统盐酸水解法,更适合于微量组织HYP的测定.     

Effects of fish protein hydrolysate on growth performance and humoral immune response in large yellow croaker （Pseudosciaena crocea R.）

We investigated the effects of fish protein hydrolysate （FPH） on growth performance and humoral immune response of the large yellow croaker （Pseudosciaena crocea R.）. One thousand and two hundred large yellow croakers [initial average weight： （162.75±23.85） g] were divided into four groups and reared in floating sea cages （3 m×3 m×3 m）. The animals were fed with 4 diets： basal diet only （control） or diets supplemented with 5%, 10% and 15% （w/w） FPH. The results show that dietary FPH levels significantly influenced the growth and immunity of the large yellow croaker. Compared with the control group, total weight gain （TWG） in all treatment groups, relative weight gain （RWG） and specific growth rate （SGR） in fish fed with diets supplemented with 10% and 15% FPH were significantly increased （P〈0.05）. Similar results were observed in immune parameters [lysozyme activity, serum complements, immunoglobulin M （IgM）]. Lysozyme activity, complement C4 and IgM were also significantly increased （P〈0.05） in fish fed with diets supplemented with 10% and 15% FPH, while complement C3 level was significantly increased （P〈0.05） in all treatment groups. In general, with the supplementation of FPH, particularly at dose of 10%, the growth performance and immunity of the large yellow croaker can be improved effectively.     

组织因子途径抑制物的酶性水解及期临床意义

在生理性止血和病理性血栓过程中,组织因子(TF)/因子Ⅶa(FⅦa)复合物是凝血的重要启动因子。组织因子途径抑制物(TFPI,TFPI-1)则是目前唯一已知的TF/FⅦa复合物的抑制物,其作用依赖于因子Xa(FXa)。rTFPI对实验性败血症和弥散性血管内凝血(DIC)的治疗非常有效,但临床实验结果与此却并不一致。非常敏感。①中性粒细胞和单核细胞在受到炎症刺激时解放的白细胞弹性蛋白酶,可以在T87-T88、Q90-Q91和G160-T161处分别水解TFPI。②多种基质金最强,它在R83-L84和S174-T179处裂解TFPI。③纤溶酶可以在K86-T87、R107-G108、R199-A200、K249-G250和K256-R257几个位点处水解TFPI。临床资料表明在溶栓治疗后的再闭塞过程中,纤溶酶可能发挥了关键作用。④酸性磷脂存在时,FXa能够解水TFPI的K86-T87、R199-A200和C末端处的肽腱。⑤凝血酶可以水解TFPI的K86-T87、R107-G108、K254-T255和Q173-S174处的位点。在败血症、DIC和溶栓治疗等不同临床情况下,上述多种蛋白酶存在不同程度的升高。DIC病人的截短型TFPI升高,脂蛋白结合的TFPI减,这些都是TFPI受到酶解的反映。游离TFPI升高与纤维蛋白降解产物以及纤溶酶/α2-纤溶酶抑制物复合物呈正相关,提示这与TFPI被水解有关。全身炎症反应综合征存在TFPI的水解,部分解释了为什么临床上用rTFPI治疗严重败血症时疗效有限。多项研究表明血栓性疾病过程也存在TFPI的水解。综上所述,基于TFPI对蛋白酶水解作用的敏感性和它对拮抗TF/FⅦa启动的凝血的重要性,监测体内TFPI的水解情况,可以对全身炎症反应综合征和血栓性疾病的预后提供有价值的信息。同时,寻找使TFPI免受蛋白酶降解的物质,对于全身炎症反应综合征和血栓形成的治疗是非常有意义的。(李邦涛摘)     

过氧化氢酶对梭曼水解的催化作用

本文就过氧化氢酶与梭曼反应的性质进行了研讨，证明过氧化氢酶是催化梭曼水解的反应物，而不是简单的“中和”反应物；过氧化氢酶催化梭曼水解的米氏常数为０．２ｍｍｏｌ·Ｌ－１．叠氮化钠对过氧化氢酶催化梭曼和过氧化氢反应的影响是不同的，这种差别意味着过氧化氢酶分子具有两个分离的活性部位。     

金黄色葡萄球菌肠毒素检测方法的应用及进展

金黄色葡萄球菌引起的食物中毒是一个重大的世界性公共卫生问题[1].传统的检测方法以检测致病菌为主,需要培养,检测时间长,且存在着致病菌在加工过程中致死,因而无法检出,但是在加工以前已经产生毒素,且金黄色葡萄球菌肠毒素可耐受100℃煮沸30 min而不被破坏,并能抵抗胃肠道中蛋白酶的水解作用,结果造成食物中毒.所以为确保食品卫生安全迫切需要建立快速、灵敏的毒素检测方法.目前常见的毒素检测方法主要有以下几种.     

两种方法提取超广谱β-内酰胺酶的比较

目的比较两种方法提取超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的可靠性.方法分别用EDTA/溶菌酶法和超声波粉碎法对10株产ESBLs的大肠埃希菌进行酶的提取,以头孢噻肟为底物,用紫外分光光度计进行酶活性的测定.结论超声波粉碎法是有效的提取ESBLs的方法,其效果明显优于EDTA/溶菌酶法.     

炔诺酮-聚天冬酰胺共价复合体水解动力学的研究及炔诺酮含量测定

本实验采用碱性水解法,研究了炔诺酮及炔诺酮-聚天冬酰胺共价复合体的水解特性,并推导出它们的水解动力学方程,从而计算出炔诺酮在高聚物中的接入量。