菲立磁标记兔BMSCs自体移植脊髓后的核磁共振活体示踪及形态学研究

目的通过观察菲立磁标记兔骨髓源性神经干细胞(BMSCs)自体移植脊髓后的核磁共振活体示踪及形态,期待找到一种应用非侵袭性方法来识别、跟踪BMSCs的存活状态及与宿主组织整合情况的方法。方法无菌条件下股骨取骨髓,梯度密度离心法分离获取兔骨髓基质细胞;使用“Feridex-多聚赖氨酸复合物(FE-PLL)”标记骨髓基质细胞,采用普鲁士兰染色和台盼蓝排除实验等方法鉴定FE-PLL标记兔骨髓基质细胞的效率和细胞的活力;体外标记的细胞自体脊髓移植,磁共振、免疫组织化学染色和透射电镜检查。结果普鲁士蓝染色显示FE-PLL标记骨髓基质细胞胞质内出现细小的蓝色铁颗粒;与正常未标记的细胞相比较,FE-PLL标记对骨髓基质细胞的活力、增殖和分化等能力没有明显的影响;经菲立磁标记的兔BMSCs自体脊髓移植后,可在核磁共振上活体示踪。结论菲立磁与核磁共振联合可无创性活体标记检测移植的神经干细胞基本的存在部位、存在方式及其一些生物学特性,可以用来活体示踪移植的BMSCs。     

人骨髓间质干细胞的体外菲立磁标记

背景：常规干细胞示踪的检测方法,需取实验动物组织进行检查,缺乏示踪的动态检测和无创性。 目的：通过体外菲立磁标记骨髓间质干细胞并进行磁共振成像扫描,明确不同浓度菲立磁对人骨髓间质干细胞细胞活性的影响和检测菲立磁标记的最佳浓度,并筛选出适合人骨髓间质干细胞磁共振成像扫描的成像序列。 方法：使用不同质量浓度菲立磁(100,50,25,12.5 mg/L)与生长状态良好第3代人骨髓间质干细胞孵育24~48 h,另设未进行标记的第3代细胞为空白对照组。两组细胞进行四甲基偶氮唑蓝法检测增殖生长情况并描绘生长曲线。细胞普鲁士蓝染色鉴定人骨髓间质干细胞的标记情况。进行磁共振成像检测,确定最佳磁共振成像序列。 结果与结论：质量浓度≤25 mg/L的菲立磁标记对人骨髓间质干细胞的增殖能力不会产生影响,并且以25 mg/L的标记效果最佳。而≥50 mg/L的菲立磁标记则明显抑制人骨髓间质干细胞的增殖。磁共振成像扫描显示菲立磁标记24,48 h或子代的人骨髓间质干细胞标本T1WI、T2WI以及T2*WI 3个序列上均可见信号降低,以T2*WI变化最为明显。证实菲立磁可用于体外标记人骨髓间质干细胞连续性研究。菲立磁标记对人骨髓间质干细胞增殖能力的影响存在浓度相关性,25 mg/L为最佳标记浓度。磁共振成像T2*WI序列更适合追踪菲立磁标记的人骨髓间质干细胞。     

Tracking superparamagnetic iron oxide labeled monocytes in brain by high-field magnetic resonance imaging

Inflammatory cells, most notably mononuclear phagocytes (MP; macrophages and microglia), play a critical role in brain homeostasis, repair and disease. One important event in cellular biodynamics is how MP move in and throughout the nervous system. Prior studies have focused principally on cell migration across the blood-brain barrier during neuroinflammatory processes with little work done on cell movement within the brain. During the past decade our laboratories have studied the role of MP in HIV-1-associated dementia (HAD). In HAD MP incite sustained glial inflammatory reactions causing significant neuronal damage. To extend these works we investigated cell movement in brain and its influence for disease in a novel co-registration system integrating neuropathology with high-field magnetic resonance imaging (MRI). Human monocytes labeled with superparamagnetic iron oxide particles were injected into the brain of severe combined immunodeficient (SCID) mice. MRI was recorded 1, 7, and 14 days after cell injection. MRI co-registered with histology verified that the MRI signal modification was due to the labeled cells. MRI showed human monocyte-derived macrophages along the injection site, the corpus callosum, the ventricular system and in other brain sites. These data support the idea that cell migration can be monitored in vivo and provides an opportunity to assess monocyte mobility in brain and its affects on neurodegenerative processes and notably HAD.     

菲立磁标记大鼠骨髓基质干细胞对其生物活性的影响

目的 观察菲立磁(Feridex)标记对大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)的增殖及向肝细胞分化能力的影响,探讨Feridex标记大鼠BMSCs的最佳标记方案.方法 SD大鼠BMSCs按Fefi-dex浓度11.2、14.0、16.8、19.6mg/L分组并进行标记,设空白对照组(无Feridex标记的BMSCs).采用普鲁士兰染色和透射电镜鉴定Feridex标记后各组BMSCs的标记效率.噻唑蓝(MTY)比色法检测Feridex标记后各组BMSCs的增殖水平.逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测Feridex标记后各组BMSCs经肝细胞生长因子(HGF)、表皮细胞生长因子(EGF)共同诱导后ALB和AFP基因的表达水平.结果 11.2、14.0、16.8、19.6 mg/L组的标记率分别为71%、83%、91%、96%.16.8 ms/L和19.6 mg/L组的标记率显著高于11.2 ms/L和14 mg/L组(P<0.05).11.2、14.0、16.8 mg/L组的细胞增殖水平及诱导后ALB、AFP基因表达水平与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),而19.6 mg/L组的细胞增殖水平及诱导后ALB、AFP基因表达水平显著低于空白对照组(P<0.05).结论 Fefidex浓度16.8mg/L可能是Feridex标记BMSCs最适标记浓度,该浓度既能使Fefidex对BMSCs的标记达到较理想效果,同时不影响BMSCs的增殖及向肝细胞分化的能力.     

菲立磁标记胚胎干细胞移植肝损伤小鼠体内示踪研究

目的 观察菲立磁标记胚胎干细胞肝损伤模型移植后在体内迁徙、定居、增殖及与损伤肝脏整合.方法 将129/SvJ小鼠随机分为肝损伤和无肝脏损伤组,将最适菲立磁标记细胞数量经肝脏包膜下途径移植,通过对移植后第1、2、3周行肝脏MRI扫描观察移植细胞受体内定居增殖情况及受体肝内迁徙、定居情况.结果 菲立磁标记胚胎干细胞效率达到91.5%以上,体外有效引发MRI信号改变的最适移植细胞数量为1×105.肝脏MRI扫描,可观察到移植的标记细胞在受体肝内能定居并增殖,且与受体肝板有良好整合.结论 通过MRI活体示踪可以动态连续监测移植菲立磁标记胚胎干细胞体内的分布和增殖.     

磁共振增强扫描应用菲立磁在诊断肝硬化大结节及其癌变中的价值初探

目的　探讨菲立磁肝脏增强扫描在诊断肝硬化大结节及其早期癌变中的诊断价值。方法　肝硬化大结节患者 9例 ,共11个结节 ,行菲立磁肝脏增强扫描 ,其中 4例 1d前注射Gd -DTPA行动态门静脉脉造影 (DCE -MRP)。结果　 6例 8个再生大结节平扫T1WI表现为高信号 ,T2 WI表现为低信号 ,菲立磁增强后肝脏实质T2 WI明显下降 ,再生大结节信号随肝脏实质同步下降表现为等信号。其中 2例行动态门脉造影均未见结节动脉期强化。 2例 2个结节平扫T1WI表现为高信号 ,T2 WI也表现为高信号 ,菲立磁增强后结节信号仍表现为高信号。该 2例均行动态门静脉造影 ,1例可见结节动脉期强化 ,实质期强化减低 ,另 1例未见动脉期强化。 1例 1个结节平扫T2 WI低信号中可见小的结节样高信号 ,呈“结中结”表现 ,菲立磁增强可见病灶中心的T2 WI高信号部分信号无降低 ,而周围的T1WI低信号部分信号降低。结论　菲立磁增强肝脏扫描在诊断肝硬化大结节及其有无早期癌变有其独特的优势     

菲立磁增强MRI对局灶性肝病的检出价值及其病理基础

目的前瞻性评价菲立磁增强扫描对局灶性肝病的检出价值及其病理基础。方法收集经临床、手术病理为诊断金标准证实的26例61个肝局灶性病变,前瞻性对比评价螺旋CT增强扫描、MRI平扫及联合分析MRI平扫+菲立磁增强图像对局灶性肝病的诊断价值。其中20例32个病灶行免疫组化抗CD-68染色,并计数各局灶性病变的Kupffer细胞计数比率。结果螺旋CT增强扫描、MRI平扫及联合分析MRI平扫+菲立磁增强诊断敏感性分别为72%、82%、93%,P<0·05;特异性分别为92%、96%、96%,P>0·05,准确性分别为78%、86%、94%,P<0·05。良性局灶性肝病与恶性病灶包括高分化、中分化、低分化HCC的Kupffer细胞计数比率存在不同,分别为1·54±0·47、0·74±0·30、0·32±0·09、0·28±0·07,差异有显著性(P<0·05)。结论菲立磁增强MRI对肝局灶性病变的检出价值优于螺旋CT增强扫描。局灶性病变与非肿瘤区肝组织内Kupffer细胞含量的差异是菲立磁增强MRI病灶检出的病理基础。     

超低微浓度菲立磁-硫酸鱼精蛋白复合物标记骨髓间充质干细胞的方法

目的 探索简单、无细胞外铁产生的超低微浓度菲立磁-硫酸鱼精蛋白标记骨髓间充质干细胞(MSCs)方法。 方法 贴壁法培养大鼠MSCs。待3代细胞汇合至80%~90%时,更换无血清培养液,根据菲立磁和硫酸鱼精蛋白的不同浓度分为4组:A组[(7.50∶1.00)μg/ml]、B组[(10.00∶1.20)μg/ml];C组[(15.00∶1.80)μl/ml]和空白对照组,加入培养液,混匀,5% CO₂孵育15 min,补加血清后孵育至次日。检测细胞标记率、细胞内外铁、细胞活力和标记细胞MR信号。 结果 B组可有效标记大鼠MSCs,普鲁士蓝染色阳性率100%,无细胞外铁产生,铁颗粒分布于溶酶体内。4组间台盼蓝拒染率差异无统计学意义(P>0.05);体外MR GRE T2^*WI序列可检测到1×10⁴个标记细胞。 结论 使用超低微浓度菲立磁10.00 μg/ml与鱼精蛋白1.20 μg/ml可有效标记大鼠MSCs,体外MR可检测到1×10⁴个标记细胞。     

菲立磁标记骨髓单个核细胞移植犬心肌梗死区的活体MR示踪

目的 探讨MR活体示踪犬心肌梗死区移植的菲立磁(Feridex)标记骨髓单个核细胞(BM-MNCs)的价值.方法 9只杂种雄性犬,手术结扎冠状动脉成功建立8只犬心肌梗死模型,将Feridex体外标记骨髓单个核细胞(BM-MNCs)注射到心肌梗死区.注射后第1、2、4周用1.5T MR行系列扫描.扫描结束后处死动物,细胞移植区组织HE染色及普鲁士蓝染色进行病理分析.结果 第1、2周MR扫描发现Feridex标记BM-MNCs注射点T2低信号区,第4周时消失.组织病理学观察于Feridex标记细胞移植区组织HE染色可见新生血管,普鲁士蓝染色易发现聚集的胞浆蓝染的细胞.结论 MR能够无创地示踪活体心肌梗死区移植的Feridex标记的BM-MNCs.     

超顺磁性氧化铁增强MRI在肝脏局灶性病变诊断中的应用

目的探讨菲立磁增强MRI在肝脏实性占位性病变诊断中的应用价值。方法 对28例经CT、MRI或其他方式检查确诊有肝脏占位性病变者进一步行菲立磁增强 MRI检查,比较增强前后TtWI病灶及肝脏的信号强度及对比信噪比(CNR);根据增强前后病灶数量及形态进行定性诊断。结果 菲立磁强强T2WI肝脏信号强度较平扫明显下降,恶性病灶与肝脏的CNR较平扫明显提高,差异具有显著性。结论 非立磁增强TtWI明显提高肝脏实性占位性病变的检出率。