黄芩苷对局灶性脑缺血大鼠的保护作用

【目的】观察黄芩苷对局灶性脑缺血模型大鼠的保护作用及可能的机制。【方法】将大鼠随机分为假手术组、模型组及黄芩苷组;采用线栓法复制大鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO),造模前、后及造模后8 h黄芩苷组分别腹腔注射给药1次(剂量为100 mg.kg-1.d-1);造模后24 h记录大鼠神经功能行为得分,并采用分光光度法测定缺血侧脑组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)和过氧化氢酶(CAT)的含量。【结果】黄芩苷能降低MCAO模型大鼠的神经功能缺损评分,升高缺血侧脑组织中SOD、GSH-Px、CAT的含量,降低MDA的含量,与模型组比较具有显著性差异(均P<0.05或P<0.01)。【结论】黄芩苷对局灶性脑缺血大鼠的神经功能具有保护作用,其机制可能与其减少氧化损伤从而保护脑组织有关。     

黄芩苷对梗阻性黄疸幼鼠肠黏膜保护作用的研究

目的 探讨黄芩苷对梗阻性黄疸幼鼠肠黏膜损害的保护作用.方法 40只Wistar幼鼠随机分为假手术组、梗阻性黄疸组(OJ组)、梗阻性黄疸+黄芩苷处理2周组(OJ1组)和梗阻性黄疸+黄芩苷处理3周组(OJ2组),每组10只.假手术组仅游离胆总管,OJ、OJ1、OJ2组幼鼠于近肝门处游离并部分结扎胆总管.OJ1和OJ2组术后1 d开始给予黄芩苷(80 mg·kg-1·d-1)灌胃,其余组相同时间给予生理盐水1.5 ml灌胃.观察实验鼠回肠黏膜结构改变及分级;应用免疫组化技术检测肠黏膜金属基质蛋白酶-9(MMP-9)和核因子-κBp65(NF-κBp65)的表达及TUNEL法检测肠黏膜细胞凋亡,对所得数据进行统计学处理.结果 (1)假手术组、OJ1组和OJ2组较OJ组实验鼠回肠黏膜损伤轻,黏膜损伤分级为0.4±0.3、1.9±0.2、1.5±0.3 vs.3.2±0.5,差异有统计学意义(P<0.01).(2)MMP-9与NF-κBp65表达的平均光密度检测OJ组显著高于假手术组、OJ1组及OJ2组,差异有统计学意义(P<0.01).(3)细胞凋亡指数OJ组(27.6±2.1)明显高于OJ1组(15.1±1.6)、OJ2组(14.3±2.2)及假手术组(7.5±1.6),差异有统计学意义(P<0.01).结论 黄芩苷通过抑制NF-κB的激活,减少MMP-9的表达,减少细胞凋亡,减轻了黏膜损伤,对梗阻性黄疸导致的幼鼠肠黏膜损害起到保护作用.     

黄芩苷对结核分枝杆菌抑菌作用的初步研究

目的:通过体外抑菌试验探讨黄芩苷对结核分枝杆菌的体外抑菌活性.方法:采用改良罗氏培养基绝对浓度法检测黄芩苷对37株结核分枝杆菌的抑菌作用.结果:黄芩苷对37株结核分枝杆菌临床分离株的最低抑菌浓度(MIC)最低为1.5 g/L,最高＞48 g/L,MIC90为12g/L,MIC75和MIC50均为6g/L.全敏感菌株在MIC为6g/L时数量比例最大,随着MIC值向两侧递减;异烟肼(INH)低耐菌株的数量与MIC值无明显关联,乙胺丁醇(EMB)低耐菌株数量随着MIC由低到高的变化而显著增多;利福平(RFP)低耐菌株数量随着MIC由低到高的变化而逐步减少.结论:黄芩苷在体外对结核分枝杆菌具有一定的抑菌作用.     

肺炎衣原体感染对动脉硬化斑块面积的影响及黄芩苷的干预作用

【目的】探讨肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae,CPn)感染对血清炎症因子水平与主动脉粥样硬化斑块面积的影响及黄芩苷的治疗作用。【方法】C57BL/6J小鼠随机分为黄芩苷高剂量组(剂量为50 mg.kg-1.d-1)、黄芩苷低剂量组(剂量为25 mg.kg-1.d-1)、阿奇霉毒组(剂量为5 mg.kg-1.d-1)、模型组和正常对照组。除正常对照组外,其他组均在喂饲高胆固醇饲料1周后,经一侧鼻腔吸入含CPn的培养液,每周1次,共3次;最后1次接种5 d后开始给药至实验结束,第1次接种后至第18周时处死全部动物,采用酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL-6、IL-10)的水平,及主动脉斑块面积指数(IPA)。【结果】模型组的血清TNF-α、IL-6、IL-10水平和IPA均高于正常对照组(P<0.01)。黄芩苷高剂量组和黄芩苷低剂量组的以上4个指标均比模型组低(均P<0.01),其中血清IL-10接近正常对照组水平(P>0.05);而阿奇霉素组的血清TNF-α、IL-6水平也比模型组低(均P<0.01),但血清IL-10与模型组比较无显著性变化(P>0.05)。3个治疗组均可改善模型动物的主动脉粥样硬化斑块,但黄芩苷2个治疗组的硬化斑块比阿奇霉素组小,黄芩苷低剂量组的IPA与阿奇霉素组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。【结论】早期给予高、低剂量黄芩苷或阿奇霉素治疗可不同程度降低高胆固醇合CPn感染引起的炎症反应,并有助于减轻CPn感染的高胆固醇饮食小鼠主动脉粥样硬化斑块损害程度;而黄芩苷的作用比阿奇霉素略优。     

黄芩素对A431细胞埃兹蛋白表达及侵袭力的影响

目的 探讨黄芩素是否通过抑制埃兹蛋白来实现抑制A431细胞增殖、细胞周期进程及伪足的形成。方法 采用细胞划痕、微孔滤膜法（Transwell）检测黄芩素对A431细胞爬行的影响;RT－PCR检测黄芩素对A431细胞埃兹蛋白mRNA表达量的影响;Western印迹检测黄芩素及siRNA对A431细胞埃兹蛋白表达及其磷酸化的影响;扫描电镜观察黄芩素及siRNA对A431细胞伪足形成的影响。结果 细胞划痕实验显示,培养24 h时,黄芩素 5、10、20 μmol/L组细胞闭合宽度占原宽度的比例分别为13.3% ± 1.7%、7.6% ± 1.6%和5.9% ± 1.3%,黄芩素呈浓度依赖性抑制A431细胞爬行运动,黄芩素各组与阴性对照组（16.3% ± 2.3%）比较,差异均有统计学意义。Transwell实验证实,5、10、20 μmol/L黄芩素处理A431细胞48 h后,穿过人工基底膜的细胞数量分别为（46.5 ± 3.8）、（34.3 ± 3.4）和（25.3 ± 2.3）个/Hp,各处理组与阴性对照组（56.3 ± 3.8个/Hp）经方差分析,P < 0.01;而与siRNA组（28.3 ± 2.1个/Hp）比较,P > 0.05。Western印迹及RT－PCR检测显示,0、5、10、20、40 μmol/L黄芩素处理A431细胞48 h后,黄芩素呈浓度依赖性地抑制A431细胞埃兹蛋白/磷酸化埃兹蛋白及埃兹蛋白mRNA表达,埃兹蛋白mRNA与β-肌动蛋白mRNA灰度值之比值与阴性对照组比较,P值均 < 0.01;而与siRNA组比较,P > 0.05;埃兹蛋白、磷酸化埃兹蛋白在A431细胞中的表达量（与β-肌动蛋白灰度值之比）与阴性对照组比较,P值均 < 0.01;而40 μmol/L黄芩素处理组与siRNA处理组比较,P > 0.05。扫描电镜显示,48 h后20 μmol/L黄芩素组A431细胞伪足数量为（5.3 ± 1.9）个,长度明显缩短,与阴性对照组（22.6 ± 2.8个）比较,P < 0.01;siRNA组为（4.5 ± 2.8）个,与阴性对照组比较,P > 0.05。结论 黄芩素可能通过直接或间接抑制埃兹蛋白表达及其磷酸化而抑制A431细胞的增殖、爬行,从而达到抗肿瘤增殖及浸润转移的目的。     

黄芩茎叶总黄酮对过氧化氢诱导的心肌细胞损伤的保护作用

目的:探讨黄芩茎叶总黄酮(SSTF)对过氧化氢(H2O2)所致大鼠乳鼠心肌细胞损伤的保护作用。方法:用体外细胞培养方法,培养乳鼠心肌细胞,制备过氧化氢损伤模型,测定细胞存活率,上清液乳酸脱氢酶(LDH)的活性,细胞内丙二醛(MDA)的含量、超氧化物歧化酶(SOD)的活性,并采用原位末端标记法(TUNEL)标记细胞,测定细胞凋亡率。结果:H2O2处理心肌细胞后其存活率较正常心肌细胞下降,细胞培养液中LDH活性明显增加;其SOD活性较正常心肌细胞降低,MDA含量和心肌细胞凋亡率明显升高(均P<0.01)。SSTF(50～200mg/L)各剂量都能显著提高H2O2损伤的心肌细胞的存活率,明显抑制心肌细胞的LDH的释放,显著减少心肌细胞的MDA的含量,提高SOD的活性,明显降低心肌细胞凋亡率(均P<0.01)。结论:SSTF能减轻H2O2对心肌细胞的损伤作用,降低H2O2导致的培养心肌细胞的凋亡率。     

黄芩苷对肺炎衣原体诱导的内皮细胞粘附因子表达的影响

【目的】观察黄芩苷对肺炎衣原体诱导的内皮细胞粘附因子表达的影响。【方法】体外培养人脐静脉内皮细胞(ECV-304)。待长成单层后加入肺炎衣原体(CP)为模型组,加入肺炎衣原体和黄芩苷0．4、0．2、0．1g／L分别为黄芩苷高、中、低剂量组,不加任何刺激者为正常组,每组设4个复孔,24孔板培养5d后,检测培养上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和细胞表面细胞间粘附因子(CD54)、血管间粘附因子(CD106)的表达。【结果】经肺炎衣原体刺激的ECV-304分泌TNF-α增加．细胞表面CD54、CD106表达增加;黄芩苷高、中、低剂量组均可下调TNF-α水平;高剂量可抑制CD54、CD106的表达。【结论】黄芩苷对肺炎衣原体感染血管内皮细胞的炎症反应具有一定的阻抑作用。     

从受体角度探讨黄芩苷对肺炎衣原体感染细胞的干预机理

【目的】观察黄芩苷对肺炎衣原体诱导的TOLL受体(TLRs)的影响。【方法】体外培养人脐静脉内皮细胞(ECV-304细胞)，待长成单层后加入肺炎衣原体(CPN)为模型组，不加任何刺激者为正常组，每组设3个复孔，6孔板培养2d后，用单克隆抗体荧光标记和姬姆萨染色检测肺炎衣原体在ECV-304细胞内的生长情况；用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达。另取长成单层的ECV-304细胞，加入CPN为模型组，加入CPN 黄芩苷0．48g／L为黄芩苷高剂量组，加入CPN 0．24g／L为黄芩苷低剂量组，用流式细胞仪检测ECV-304细胞表面TLR2蛋白表达。【结果】CPN能在ECV-304细胞内生长；该细胞检测不出TLR4 mRNA的表达，存在TLR2 mRNA和TLR2蛋白的高表达。中药黄芩苷高剂量可降低TLR2蛋白的表达。【结论】黄芩苷对CPN所刺激的TLR2高表达具有抑制作用。     

黄芩苷抑制长波紫外线诱导的人成纤维细胞氧化损伤和凋亡

目的 探讨黄芩苷对长波紫外线(UVA)诱导的人二倍体成纤维细胞(HDF)氧化损伤和凋亡的抑制作用及其可能机制.方法 CCK-8法检测细胞活性,筛选最佳药物浓度.将成纤维细胞分成对照组、UVA照射组、UVA+ 6.25 mg/L黄芩苷组、UVA+12.5 mg/L黄芩苷组、UVA+ 25 mg/L黄芩苷组.利用荧光显微镜和流式细胞仪检测各组细胞中活性氧、超氧化物阴离子和一氧化氮含量的变化;流式细胞仪检测线粒体膜电位和细胞凋亡率的变化.Western印迹法检测凋亡相关蛋白caspase3含量.以上多组间比较均采用单因素方差分析.结果 UVA照射组的活性氧、超氧化物阴离子和一氧化氮含量分别为813.1±30.29、353.3±19.13、107.1±11.44,较对照组(442.5±29.45、223.4±10.67、42.17±2.59)明显上升,均P＜0.05);同时,UVA照射组较对照组线粒体去极化增强,凋亡率上升.与UVA组比较,各浓度黄芩苷作用组氧化产物包括活性氧、超氧化物阴离子及一氧化氮含量均有明显下降,线粒体去极化减弱,细胞凋亡率也显著下降,均P＜ 0.01.UVA组凋亡相关蛋白caspase3相对含量为1.2680±0.0091,明显高于对照组(0.3675±0.1115),6.25、12.5和25 mg/L黄芩苷组(0.5588±0.1705、0.5365±0.1718、0.5454±0.2083)较UVA组有显著下调(均P＜0.01).结论 黄芩苷可以减轻UVA诱导的人成纤维细胞氧化损伤和细胞凋亡,其机制可能与清除活性基团、抑制线粒体膜去极化、阻止下游凋亡蛋白caspase3的激活和表达有关.