转录因子Tbx18及Wt1在小鼠心脏发育过程中的时空表达

目的:原位观察转录因子Tbx18及Wt1在胚胎心脏中的表达,及心肌细胞本身是否表达Tbx18及Wt1。方法:收集不同发育阶段小鼠胚胎(E)心脏,冰冻切片后,取不同区域的组织进行免疫荧光染色和DAPI染核,检测Tbx18、Wt1及Nkx2.5的表达。结果:小鼠前体心外膜及不同发育阶段的心外膜可明显表达Tbx18及Wt1蛋白,但未检测到心脏转录因子Nkx2.5的表达。从E10.5~至少E14.5d,Tbx18蛋白明显表达于不同区域的心脏组织中。除E14.5 d少许表达Tbx18的细胞不表达Nkx2.5外,这些表达Tbx18的细胞还同时表达Nkx2.5。从E12.5~至少14.5 d,Wt1表达于不同区域心脏组织中,但这些表达Wt1的细胞都不表达NKx2.5。结论:从E10.5~至少14.5 d,Tbx18表达于小鼠心肌细胞中;从E12.5d~至少E14.5d,Wt1表达于小鼠心脏组织中,但不表达于心肌细胞中。     

Wt1基因与Ph~+白血病细胞系K562的生物学特性

Wt1基因是与造血调控、白血病发生及治疗预后密切相关的双功能基因,在急性髓系白血病及慢性粒细胞白血病进展期呈高表达,且与预后呈负相关,已用于临床微量残留病的监测。WT1蛋白不同亚细胞定位发挥不同生物学功能。本研究旨在探讨Ph+白血病细胞系K562中wt1 mRNA及蛋白的表达与定位,wt1抑制剂——姜黄素(curcumin)对K562细胞的增殖及细胞周期的影响及wt1在白血病发生发展中的相关作用机制。采用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术分析细胞周期改变;免疫荧光技术及Western blot观察WT1蛋白的亚细胞定位及药物处理后表达水平的变化;实时定量PCR法观察药物处理后wt1及bcr/ablp210转录本水平的变化。结果表明,wt1 mRNA及蛋白在K562细胞高表达,姜黄素及格列卫均能降低wt1 mRNA及蛋白的表达水平,抑制细胞增殖;姜黄素使K562细胞停滞于G2/M期,而格列卫使其停滞于G0/G1期。结论:wt1基因表达改变可以影响Ph阳性细胞—K562的生长、增殖,调控wt1表达有可能成为Ph阳性白血病的新的治疗策略。