福辛普利、卡托普利及缬沙坦对人血单核细胞表达组织因子的影响

目的:研究血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)中的福辛普利(fosinopril)、卡托普利(captopril)及I型血管紧张素II受体拮抗剂(ARB)中缬沙坦(valsartan)对人血单核细胞受细菌脂多糖(LPS)刺激表达组织因子(TF)的影响。方法:从健康平产妇脐静脉取得脐血,分离单个核细胞,分组培养,以LPS(0.1 mg/L)刺激作为对照组,其它组分别再加入ACEI类药物fosinopril (20 mg/L)、captopril(20 mg/L)及valsartan(20 mg/L),孵育。冻融法收集细胞裂解液,用一期凝固法分析LPS诱导单核细胞表达的组织因子促凝活性。用RT-PCR技术,观察各组表达TFmRNA,并以GAPDH作为内参照进行半定量分析。结果和结论:Fosinopril,captopril及valsartan可下调人血单核细胞由LPS诱导的TFmRNA的表达,并显著降低促凝活性。     

葡萄籽多酚对糖基化终产物诱导的内皮细胞组织因子表达的影响

目的观察葡萄籽多酚(GSP)对糖基化终产物(AGEs)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)组织因子(TF)蛋白及其mRNA表达的抑制作用。方法牛血清白蛋白(BSA)与葡萄糖在体外共同孵育以制备糖基化终产物(AGE-BSA),将培养的HUVEC与不同浓度的GSP(5、15、25μg/ml)预孵育4 h,再加入200μg/ml AGE-BSA共同培养,分别用流式细胞仪测定TF蛋白表达,用逆转录PCR检测TF mRNA的表达,用激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧簇(ROS)的产生。结果HUVEC未受刺激时,细胞内活性氧簇(ROS)(0.83±0.23)产生较低,TF蛋白[(4.42±0.69)%]及mRNA(0.0020±0.0008)表达亦较低,而AGE-BSA刺激明显增强了细胞内ROS(3.12±0.31)产生和TF蛋白(42.28±5.80)%及其mRNA(0.2964±0.0403)表达,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。不同浓度GSP预孵育则以剂量依赖性的方式显著抑制了AGE-BSA诱导的细胞内ROS[分别为(2.36±0.34)、(1.88±0.43)、(1.23±0.20)]产生,并下调了TF蛋白[分别为(28.45±2.19)%、(17.49±3.84)%、(8.54±1.57)%)]及其mRNA[分别为(0.0994±0.0231)、(0.0382±0.0073)、(0.0065±0.0010)]表达,P<0.01。结论GSP可能通过抑制细胞内氧化应激而影响AGEs诱导的内皮细胞TF生成,改善血管促凝血活性。     

缬沙坦和卡托普利对兔血管平滑肌细胞组织因子和组织因子途径抑制物表达及活性的影响

目的观察氧化修饰低密度脂蛋白（ox-LDL）、血管紧张素转换酶抑制剂和血管紧张素受体拮抗剂对血管平滑肌细胞组织因子（TF）和组织因子途径抑制物（TFPI）表达和活性的影响。方法采用组织贴块法培养兔主动脉平滑肌细胞,进行形态学和α-肌动蛋白（actin）免疫组化鉴定。在细胞水平,采用免疫组化、免疫荧光法检测ox-LDL和缬沙坦对TF、TFPI蛋白表达的影响,激光共聚焦法检测ox-LDL和缬沙坦对TF蛋白表达的影响,ELISA法检测ox-LDL、缬沙坦和卡托普利对TF、TFPI抗原表达的影响,发色底物法检测ox-LDL、缬沙坦和卡托普利对TF活性的影响,RT—PCR检测ox-LDL和缬沙坦对TF mRNA表达的影响。结果ox-LDL可增加兔血管平滑肌细胞TF抗原活性和mRNA的表达,在mRNA水平调节TF的表达。ox-LDL可降低兔血管平滑肌细胞TFPI抗原的表达。不同浓度的缬沙坦和卡托普利可明显减少ox-LDL刺激的平滑肌细胞TF抗原表达及活性,缬沙坦对TF表达的影响呈浓度依赖性,同时缬沙坦还可明显减少ox-LDL刺激的TF mRNA表达,证明缬沙坦在mRNA水平上调节TF的表达。不同浓度的缬沙坦和卡托普利可增加ox-LDL刺激的血管平滑肌细胞TFPI抗原的表达,缬沙坦对TFPI表达的影响呈浓度依赖性,该结果由ELISA法得出。结论本实验在细胞水平观察到ox-LDL对血管平滑肌细胞TF表达和活性有促进作用,血管紧张素转换酶抑制剂和血管紧张素受体拮抗剂对其有抑制作用,但这两种药对TFPI的表达有促进作用。从一个新的角度说明这两种药对动脉粥样硬化斑块特别是斑块促凝性的影响,它们可能是通过部分调节TF和TFPI的表达水平而发挥作用的。     

组织因子在肝细胞癌的发生及侵袭转移中的研究

目的：检测组织因子（TF）在肝细胞癌患者中的表达并探讨其意义。方法:采用酶联免疫法检测肝细胞癌患者50例及对照组30例的血浆TF水平，采用RT-PCR法检测其中27例肝癌、癌旁、正常肝组织TF mRNA表达。结果:①肝细胞癌患者血浆TF显著高于对照组（P<0.05）。血浆TF在分化高低、肿瘤大小及是否合并肝硬化组间表达有显著差异（P<0.05），在有淋巴转移、肝外脏器转移及门脉癌栓组高于无转移及癌栓组(P<0.05)，而在不同癌灶数目及包膜情况组间无显著差异（P＞0.05）。②TF mRNA在肝癌组织中阳性率及相对表达强度分别为62.96%（17/27）、0.567±0.268，均显著高于癌旁组织及正常组织。阳性患者相对表达强度在肿瘤大小及部分侵袭转移指标中表达有显著差异（P<0.05） 。结论：TF在肝癌患者血浆及组织中升高且与部分侵袭转移指标相关，提示其TF可能促进了肝癌的发生与侵袭转移。     

XIIa因子受抑稀释凝血活酶试验的影响因素及其临床意义

目的　探讨因子XIIa(FXIIa)受抑稀释凝血活酶时间 (FXIIai DTT)试验的影响因素及其与凝血酶原时间 (PT)、激活部分凝血活酶时间 (APTT)的关系。方法　以玉米胰蛋白酶抑制物抑制FXIIa,向血浆中加Ca2 + 和 1∶10 0 0凝血活酶 ,测定血浆凝固时间。结果　 30份健康人血浆FXIIai DTT和PT、APTT分别为 (s) 81.3± 8.9、12 .9± 1.7、37.1± 3.5 ,FXIIai DTT与PT、APTT间存在正相关关系 ,其相关系数分别为 0 .83和 0 .87(均P <0 .0 1)。 4种不同抗凝剂所制备的血浆 ,FXIIai DTT延长排序是 :2U/ml肝素 >1%EDTA >1.34%草酸钠 >3.8%枸橼酸三钠。硫酸钡吸附血浆、储存血浆和FVIII血浆FXIIai DTT均呈剂量依赖式延长。对羧基苄胺和抑肽酶均可延长FXIIai DTT ,分别为 (s) 114 3±9.5 ,10 0 .1± 10 .0 (均P <0 .0 1)。急性心肌梗死和急性缺血性脑卒中患者的FXIIai DTT较正常人短 ,分别为 (s) 70 .4± 10 .1,71.6± 9.8(均P <0 .0 5 )。结论　FXIIai DTT可以反映血液凝固过程两阶段凝血因子的含量与功能状况变化 ,较合适的抗凝剂是枸橼酸钠。     

肝病患者凝血酶原时间报告方式的评价

目的 评价凝血酶原时间（PT）作为判断肝病患者细胞损伤程度实验指标的两种报告方式。方法 选择肝病患者104例,其中肝炎肝硬化37例,慢性肝炎32例,肝癌36例,急性肝炎35例。30例口服华法林病人做对照组。采用ISI值不同的2种凝血活酶试剂进行PT测定。结果 急性黄疸性肝炎患者,二种凝血活酶试剂测定的INR结果有显著性差异;慢性活动性肝炎、肝硬化、肝癌患者,二种凝血活酶试剂测定的国际标准化比值（INR）结果无明显差异。急性黄疸性肝炎、肝癌患者,二种凝血活酶试剂测定的活动度（PTA）结果有显著性差异。结论 目前尚不能否定INR可作为肝病病情估计时的门标准化报告方式;PT并不是评价肝病病情的最佳指标;PTA仍为目前门作为肝病病情估计时的首选报告方式。     

组织因子对大肠癌细胞侵袭及血行转移的影响

目的分析组织因子（TF）表达对人类大肠癌细胞侵袭和血行转移能力的影响。方法利用构建有正义／反义组织因子cDNA（TFcDNA）的质粒pcDNA3．1／Zeo,以脂质体法转染人类大肠癌细胞HT-29细胞及LoVo细胞;转染成功的HT-29细胞及LoVo细胞采用Western Blot检测TF表达水平,通过裸鼠皮下成瘤观察细胞体内侵袭能力的变化;通过建立裸鼠体内肺转移及肝转移模型观察细胞体内血行转移能力的变化。结果转染了正义TFcDNA的HT-29细胞及LoVo细胞的TF表达水平较未转染的HT-29细胞及LoVo细胞升高,转染了反义TFcDNA的HT-29细胞及LoVo细胞的TF表达水平则降低;转染了正义TFcDNA的HT-29细胞的体内侵袭能力较未转染的HT-29细胞增强,转染了反义TFcDNA的HT-29细胞的体内侵袭能力则减弱;转染了正义TFcDNA的LoVo细胞的体内血行转移能力较未转染的LoVo细胞增强,转染了反义TFcDNA的LoVo细胞的体内血行转移能力能力则减弱。结论TF可以促进人类大肠癌细胞的侵袭和血行转移的能力。     

组织因子表达对原发性结直肠癌侵袭及转移能力的影响

目的探讨组织因子(TF)表达在原发性结直肠癌侵袭及转移中的作用,分析TF对人类大肠癌HT-29细胞侵袭能力的影响.方法应用免疫组织化学染色法研究85例原发性结直肠癌和6例结直肠良性腺瘤标本TF表达情况,分析TF表达与肿瘤侵袭转移及预后的关系;利用构建有正义/反义TFcDNA的质粒pcDNA3.1/Zeo,以脂质体法转染HT-29细胞; 转染成功的HT-29细胞采用Western印迹分析检测TF表达水平并进行基质胶体外侵袭实验观察细胞侵袭能力的变化.结果85例结直肠癌标本中40例(47.1%)TF表达阳性,正常黏膜和结直肠良性腺瘤均为TF阴性表达;TF阳性表达与结直肠癌的浸润深度密切相关(r=0.895, P<0.01);TF阳性表达与结直肠癌的同时性(r=0.974, P<0.01)和异时性(r=0.963 ,P<0.01)肝转移均密切相关;Logistic回归表明TF表达为结直肠癌肝转移的影响因素(P<0.01),多因素回归分析表明TF表达是影响原发性结直肠癌预后的因素之一(P<0.01);转染了正义TFcDNA的HT-29细胞的TF表达水平较未转染的HT-29细胞升高,转染了反义TFcDNA的HT-29细胞的TF表达水平则降低;转染了正义TFcDNA的HT-29细胞的侵袭能力较未转染的HT-29细胞增强,转染了反义TFcDNA的HT-29细胞的侵袭能力则减弱.结论TF可能参与原发性结直肠癌侵袭及转移的生物学过程,其阳性表达可能作为患者术后肝转移的预测指标应用于临床,TF表达是影响原发性结直肠癌预后的因素之一; TF表达的改变可以影响人类大肠癌HT-29细胞的体外侵袭能力.     

氧化型低密度脂蛋白抑制人内皮细胞组织因子通路抑制子mRNA的表达

为探讨氧化型低密度脂蛋白在血栓形成过程中的作用及机制,用超速离心法从正常人血浆中分离出低密度脂蛋白后,用Ｃｕ２ ＋ 使之氧化变成氧化型低密度脂蛋白。在人脐静脉内皮细胞的培养基中加入一定浓度的低密度脂蛋白或氧化型低密度脂蛋白,培养一定时间后,用异硫氰酸胍法抽提细胞总ＲＮＡ,用反转录聚合酶链反应方法检测人脐静脉内皮细胞中组织因子通路抑制子ｍＲＮＡ的表达,以观察氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞表达组织因子通路抑制子ｍＲＮＡ 的影响。结果发现,人脐静脉内皮细胞能持续性地表达组织因子通路抑制子ｍＲＮＡ,它的表达不受低密度脂蛋白的影响。但氧化型低密度脂蛋白能明显地以时间和浓度依赖性方式抑制人脐静脉内皮细胞表达组织因子通路抑制子ｍＲＮＡ。实验结果提示氧化型低密度脂蛋白可能通过抑制血管内皮细胞表达组织因子通路抑制子,从而在诱导动脉粥样硬化斑块内血栓形成过程中发挥极为重要的作用。     

组织因子、组织因子途径抑制物与产科凝血关系的初步研究

目的 检测正常足月妊娠胎盘、蜕膜和子宫肌层中组织因子（tissue factor，TF）和组织因子途径抑制物（tissue factor pathway inhibitor，TFPI）含量，探讨TF、TFPI与产科凝血间的关系。方法 选择正常足月妊娠孕妇30例，用ELISA方法分别检测血浆、胎盘、蜕膜、子宫肌层中TF、TFPI抗原含量。结果 胎盘、蜕膜和子宫肌层中TF抗原含量分别为（14.17±0.60）ng／mg总蛋白、（15.60±0．75）ng／mg总蛋白和（4．37±1．28）ng／mg总蛋白。TFPI抗原含量分别为（11．15±3．63）ng／mg总蛋白、（39.17±15.32）ng／mg总蛋白和（8．91±10.00）ng／mg总蛋白。血浆中TF、TFPI分别为0．013ng／mg总蛋白和（34．00±10．75）ng／mg总蛋白。结论正常足月妊娠胎盘、蜕膜和子宫肌层的高TF，低TFPI抗原水平可能与胎盘剥离面凝血止血及产科凝血障碍有关。