SM22蛋白在结肠癌组织中的表达

目的 通过比较结肠腺癌与正常结肠黏膜的蛋白质组表达差异,寻找结肠腺痛相关的蛋白质.方法 运用蛋白质组学技术,对8例结肠腺癌组织和8例正常结肠黏膜组织进行胶内差异双向电泳(2-D),选择差异表达超过2倍的蛋白质进行MALDI-TOF/TOF质谱分析和生物学信息分析,并对结肠癌组织中表达下调的蛋白SM22进行Western blot验证.结果 成功建立结肠腺癌和正常结肠黏膜的双向凝胶电泳图谱,结肠腺癌和正常黏膜组织凝胶电泳图谱中平均蛋白质斑点数分别为3289和3122,其中表达差异超过2倍的斑点共有22个,质谱分析和数据库检索共鉴定出14种蛋白质,包括keratin 8、S100A6、protein disulfide isomerase、SM22等.从功能分析,这些差异蛋白与癌细胞的发生、增殖、分化、转移等相关;SM22在结肠癌组织中的表达水平Western blot结果与电泳结果一致.结论 蛋白质组学能提示结肠腺癌与正常组织间的蛋白质表达差异,SM22在结肠癌组织中表达下降,可作为结肠癌组织的分子标记物.     

SELDI-TOF-MS技术在乳腺癌中的应用

表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)是近年出现的蛋白质组学研究新技术,其综合了蛋白芯片和质谱技术的优点,可快速、高通量捕捉血清、组织及体液中的特异性蛋白质,已成为蛋白质组学研究中较理想的技术平台。本文就SELDI-TOF-MS技术相关的原理、特点及其在乳腺癌的应用进展予以综述。     

肿瘤标记物用于卵巢癌早期诊断的研究进展

卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤之一,早期无明显临床症状,且缺乏有效的诊断方法,其病死率居于妇科肿瘤首位。基因组学、蛋白质组学和免疫学等方法已成为目前卵巢癌早期诊断研究的热点,以期找到高度敏感、特异的用于卵巢癌早期诊断的标记物。综述与卵巢癌相关的新的肿瘤标记物的研究进展。     

乳腺癌组织蛋白质谱的差异对新辅助化疗疗效中的预测

目的应用表面增强激光解析／电离化时间-飞行质谱技术（SELDI—TOF MS）检测乳腺癌患者新辅助化疗前的癌组织蛋白质谱的差异,筛选有疗效预测价值的相关蛋白。方法用SELDI—TOF MS技术检测30例乳腺癌治疗前的癌组织标本,获得蛋白质谱,行新辅助化疗后,根据RECIST标准评价疗效,分为新辅助化疗有效组（CR＋PR,19例）和无效组（SD＋PD,11例）,比较2组蛋白质谱差异。结果2组比较,筛选出11个蛋白峰差异有统计学意义（P〈0．05）,分别为：3491Da（t=3．189,P=0．004）、5158Da（t=3．897,P=0．001）、5360Da（t=2．157,P=0．04）、7549Da（t=2．173,P=0．038）、8451Da（t=2．258,P：0．032）、8694Da（t=3．234,P=0．003）、9089Da（t=2．653,P=0．013）、10528Da（t=3．127,P=0．004）、13445Da（t=2．231,P=0．034）、15118Da（t=3．255,P=0．003）、44065Da（t=2．554,P=0．017）。这些蛋白峰强度有效组均较无效组高。结论应用SELDI—TOFMS技术可筛选出乳腺癌化疗敏感相关的组织蛋白质谱。     

基于iTRAQ多重化学标记串联质谱技术筛选肝细胞癌的生物标记物

目的：利用同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术筛选并鉴定合并乙肝病毒（HBV）感染的肝细胞癌（HCC）患者和慢性乙肝患者的血清差异表达的蛋白质。方法：收集HBV感染的HCC患者血清16例（HCC组）,慢性乙肝患者血清13例（慢性乙肝组）,组内等量混合后利用高效液相色谱柱去除高丰度蛋白,样本经iTRAQ试剂标记后利用二维色谱分离,经串联质谱鉴定并相对定量。结果：质谱共得到49784个多肽片段,经谱库搜索的鉴定的蛋白共279个,其中差异表达的蛋白有28种,HCC组较慢性乙肝组上调的蛋白有20种,下调的有8种。其中上调的蛋白包括α1-抗胰蛋白酶、α1-酸性糖蛋白1、血清淀粉样蛋白A、C反应蛋白,结合珠蛋白等5个急性相反应蛋白,提示炎性反应和肿瘤间存在一定的联系。结论：筛选出多种与肝癌相关的差异蛋白,提示iTRAQ技术对于血清蛋白质组学肿瘤标记物的研究有很好的应用前景。     

蛋白组学角度阐明胰腺糖毒性机制的研究进展

糖毒性的可能机制之一为高血糖调控某些关键蛋白的表达,生物样品的蛋白组学方法是研究慢性高血糖对蛋白表达影响的有效方法.研究证实,许多蛋白受慢性高血糖的调控.蛋白组学的方法可检测到暴露于高糖浓度的胰岛或胰岛β细胞蛋白质表达的变化,由此蛋白参考图将成为剖释高糖影响胰岛或胰岛β细胞生理过程的一个重要工具.     

蛋白质组学在SIRS和脓毒症中的应用

脓毒症是由感染引起的全身炎症反应,是ICU中患者死亡的重要原因.如果能够实现脓毒症的早期诊断,并采取积极有效的治疗,则有望改善脓毒症的预后.蛋白质组学的方法能检测未知的蛋白质,该特点尤其适合于Sepsis研究,以期寻找到脓毒症的早期诊断的生物学蛋白标记.该文就蛋白质组学在脓毒症中的应用作一综述.     

胶质瘤CD133阳性和阴性U87细胞蛋白质组学分析

目的 通过对人脑胶质瘤U87细胞中CD133+和CD133-细胞进行配对研究,寻找差异性蛋白.方法 通过磁珠选择分离U87中CD133+和CD133-细胞,利用双向凝胶电泳(2D - PAGE)检测上述细胞总体蛋白,分析差异性蛋白点.通过质谱( MALDI -TOF - MS)对蛋白点进行鉴定,建立两种细胞差异性蛋白文库.结果 CD133+和CD133-细胞配对比较,蛋白质组学检测结果中,差异有统计学意义(P＜0.05)的2D - PAGE蛋白点共有73个,＞1.5倍差异蛋白点有46个,＞2倍差异蛋白点有27个,＞3倍差异蛋白点有8个.在CD133+ U87细胞中,有10个蛋白表达增多(上调),63个蛋白表达下降(下调).共得到44张高质量质谱肽质量指纹图谱(PMF),鉴定了35种蛋白质.结论 CD133+和CD133-细胞是同一细胞株中两种不同的细胞,蛋白方面存在的差异,将成为进一步研究它们相互关系的重要靶点.     

采用血清蛋白质组学方法筛选能诱发自身抗体的鼻咽癌相关抗原

目的 采用血清蛋白质组学方法筛选能诱发机体产生自身抗体的鼻咽癌(NPC)相关抗原,以便为NPC诊断和治疗提供候选标志.方法 收集19份NPC组织,采用二维凝胶电泳(2-DE)技术分离组织总蛋白质,每份组织样本同时做3块2-DE胶,其中将1块2-DE胶作为制备胶进行考马斯亮蓝染色,另2块2-DE胶采用半干式电转法将胶中的蛋白转至PVDF膜上,并分别与NPC患者自身的血清和健康人血清进行2-DE免疫印迹分析,识别能与多数NPC患者血清反应而不与或很少与健康人血清反应的蛋白质点,再从制备2-DE胶中切取相应蛋白质点,进行基质辅助激光解吸电离飞行时问质谱(MOLDI-TOF MS)和电喷雾电离四级杆飞行时间质谱(ESI-Q-TOF MS/MS)分析,获取肽质量指纹图和肽序列标签,数据库搜索鉴定蛋白质.结果 鉴定了13个能诱发机体产生自身抗体的NPC相关抗原:热休克蛋白70(HSP70)、人血清白蛋白(HAS)、热休克蛋白60(HSP60)、细胞角蛋白15(CK 15)、亮氨酸氨基肽酶(LAP 3)、α-烯醇化酶(α-enolase)、ErbB3结合蛋白(EBP1)、细胞角蛋白19(CK 19)、核糖体蛋白P0(RPP 0)、丙酮酸脱氢酶E1(PDE 1)、GTP结合调节蛋白(GNBP)、抗增殖蛋白(prohibitin)和Rho GDP解离抑制因子2(Rho-GDI 2),13种蛋白质点在21%的鼻咽癌患者中可见,而健康人中缺乏或出现频率较低.结论 本研究筛选到13个NPC相关抗原,这些抗原能诱导患者产生自身抗体,这些抗体有可能成为NPC诊断标志和治疗靶标.     

投氟大鼠肾组织蛋白质组学的初步研究

目的探讨蛋白质组学技术在投氟所致大鼠肾组织蛋白质的整体表达变化研究中的价值，为氟中毒肾损害机制的研究提供新途径。方法采用固相pH梯度（IPG）等电聚焦双向凝胶电泳方法，对投氟（100mg／L）8周和对照大鼠肾组织的蛋白质进行分离，使用Image master 2Delite图像软件分析电泳图谱．利用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱仪对两组间比较具有统计学有意义的差异蛋白点进行鉴定。结果在对照组大鼠肾组织蛋白双向电泳图谱上可观察到624个蛋白点．而投氟组肾组织双向电泳图谱上可见到776个蛋白点。与对照组比较，在投氟组大鼠肾组织表达明显改变的蛋白点经质谱鉴定出13种，主要是与细胞代谢、增殖和氧化应激相关的蛋白，其中11种蛋白表达增多，2种降低。结论本实验所采用的双向电泳和质谱鉴定方法可有效分离和分析肾整体蛋白点，并反映出投氟大鼠肾组织细胞代谢旺盛、增殖活跃和氧化应激明显的特点．表明蛋白质组学技术在氟中毒肾损害研究中具有实用价值。