叉头状转录因子O1对糖尿病大鼠足细胞影响的实验研究

目的 探讨叉头状转录因子O1（Fox01）对糖尿病大鼠足细胞的影响.方法 链脲佐菌素（STZ）诱导构建糖尿病大鼠模型90只,并采用简单随机抽样法分为糖尿病（DM）＋空慢病毒载体（LV-pSC-GFP）感染组（LV-NC组,n=30）,DM＋大鼠结构性活性FoxO1慢病毒载体（LV-CA-FoxO1）感染组（LV-CA组,n=30）,DM组（n=30）,另设对照组（NG组,n=30）注射相应体积的柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液.于慢病毒感染后的2、4、8周末,测大鼠尿白蛋白、体重、血糖、血肌酐、尿素氮,光镜和透射电镜观察肾小球及其足细胞结构变化,实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blotting法检测大鼠肾皮质中FoxO1、足盂蛋白（PCX）、nephrin mRNA和蛋白的表达.多组间比较采用单因素方差分析.结果 与LV-NC、DM组相比,LV-CA组大鼠肾脏中FoxO1 mRNA、蛋白表达水平明显升高（F8W值分别为10 919.75、3 867.34,均P＜0.05）,尿白蛋白、血肌酐、尿素氮明显降低（2周除外）（F8W值分别为132.72、187.68、503.69,均P＜0.05）,肾脏中PCX、nephrin mRNA和蛋白水平明显升高（mRNA F8w值分别为778.94、478.10;蛋白F8W值分别为393.64、255.79,均P＜0.05）,肾脏病理学变化也明显改善,可见肾小球体积减小,系膜细胞及基底膜增生程度降低,足突融合也有一定程度改善.结论 通过靶向注射慢病毒载体来上调FoxO1的表达可改善DM大鼠足细胞的损伤.     

“两肾一夹”高血压大鼠肾组织中足细胞蛋白podocalyxin的表达及与氧化应激的关系

目的探讨足细胞顶端膜蛋白podocalyxin（PCX）在“两肾一夹”高血压大鼠肾组织中的表达及其与氧化应激的关系。方法将30只雄性SD大鼠随机分为实验组（n=20）和对照组（n=10）,对实验组大鼠以改进的“两肾一夹”方法建立高血压大鼠模型。分别于造模前和造模后1、5、10周检测2组尿胆微球蛋白（β-MG）、血肌酐和尿素氮水平;黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）活力,酶联免疫吸附法（ELISA）测定8-异前列腺素F2α（8-iso-PGF2α）含量;免疫荧光方法观察PCX蛋白在肾组织的表达;PAS染色观察肾脏病理改变。结果实验组尿β2-MG自术后一直呈上升趋势,至术后5周时尿β-MG已明显高于对照组（P〈0．01）,并且随着高血压病情的延续而进行性增加。2组血肌酐和尿素氮在整个实验过程中无明显差异（P〉0．05）。实验组8-iso-PGF2α含量高于对照组（P〈0．01）,SOD活性低于对照组（P〈0．01）。免疫荧光可见实验组PCX表达低于对照组（P〈0．01）,且实验组PCX表达量与8-iso-PGF2α含量呈负相关（r=-0．584,P〈0．05）,与SOD活性呈正相关（r=0．656,P〈0．05）。结论氧化应激可以损伤PCX蛋白,进而使其表达降低,导致肾小球电荷屏障受损,尿蛋白排泄增加,在高血压。肾损害的早期发挥作用。     

尿足细胞标志蛋白Podocalyxin检测在糖尿病肾脏损害程度评估中的意义

目的探讨尿液足细胞表面标志蛋白Podocalyxin(PCX)检测在糖尿病肾脏损害程度评估中的意义。方法选取97例2型糖尿病患者及30例健康体检者(正常对照组)。按照尿清蛋白排泄率(UAER)及血清肌酐(SCr)水平,将97例糖尿病患者分为4组:Ⅰ组,UAER<30 mg/24 h,SCr≤135μmol/L,27例;Ⅱ组,UAER为30～299 mg/24 h,SCr≤135μmol/L,29例;Ⅲ组,UAER≥300 mg/24 h,SCr≤135μmol/L,22例;Ⅳ组,UAER≥300mg/24 h,SCr>135μmol/L,19例。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测5组受检者尿液中PCX水平,分析尿液中PCX与UAER、尿蛋白定量的关系。结果与正常对照组比较,Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组糖尿病患者糖化血红蛋白(HbA1c)、尿中PCX、UAER显著升高(P<0.05),Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组SCr、尿蛋白定量亦显著升高(P<0.05);且随着糖尿病肾病的进展,Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组尿液中PCX分别为(5.8±1.0)μg/L、(15.3±4.3)μg/L、(28.9±9.0)μg/L和(23.3±10.6)μg/L,Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05),Ⅲ组与Ⅳ组比较差异无统计学意义(P>0.05)。相关分析显示,尿液中PCX与UAER、尿蛋白定量均呈正相关(r值分别为0.78和0.58,P均<0.01)。结论尿液PCX检测可反映糖尿病肾病的进展。     

Podocalyxin在大鼠嘌呤霉素肾病模型中的表达及其意义

目的:研究大鼠嘌呤霉素肾病(PAN)模型中podocalyxin的表达,探讨其在蛋白尿发生中的意义.方法:建立PAN模型,应用光镜、电镜观察肾脏病理改变,免疫荧光法检测podocalyxin在肾脏的表达与分布.结果:①PAN 4 d组大鼠24 h尿蛋白量较对照组升高(P＜o.01),PAN 7 d组达高峰(P＜0.001),于28 d逐渐下降至正常.②透射电镜显示PAN 4 d组大鼠足突部分融合,PAN 7 d组大鼠足突广泛融合,PAN 28 d组大鼠足突形态有所恢复.③免疫荧光显示podocalyxin在肾小球表达,PAN 4 d组podocalyxin的表达较对照组降低(P＜0.05).PAN 7 d组表达明显低于对照组(P＜0.01).PAN 28 d组podocalyxin的表达明显高于PAN 7 d组(P＜0.01),与蛋白尿产生明显相关.结论:大鼠PAN模型中,podocalyxin的表达减少可引起足突融合,并与蛋白尿产生密切相关.     

初诊2型糖尿病合并尿白蛋白正常患者血清25羟维生素D和尿PCX、Nephrin及单核细胞趋化蛋白-1的关系

目的探讨初诊2型糖尿病合并尿白蛋白正常患者血清25羟维生素D(25OHD)和尿PCX(UPCX)、Nephrin及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的关系。方法 2013年3至12月在我院内分泌科就诊的初诊2型糖尿病病例134例。分为正常25OHD(25OHD≥20μg/L)组及低25OHD(25OHD<20μg/L)组,测定年龄、性别、BMI、血压、PTH、TSH、25OHD、生化指标、UPCX、尿MCP-1(UMCP-1)、尿Nephrin(UNephrin)、尿UAlb和尿肌酐。结果 UPCX/UCR、UMCP-1/UCR和UNephrin水平在低25OHD组[(63.12±36.13)μg/g,(93.51±60.61)ng/g,(80.30±28.12)μg/g]较正常25OHD组[(42.41±20.63)μg/g,(51.23±32.78)ng/g,(39.66±30.3)μg/g]显著升高(P<0.05);UPCX/UCR、UMCP-1/UCR和UNephrin/UCR与25OHD水平呈负相关(r=-0.635、-0.683、-0.662,P<0.05)。25OHD是UPCX/UCR、UMCP-1/UCR和UNephrin的阴性预测因子(β=-0.832,95%CI-0.932^-0.628,P=0.000;β=-0.808,95%CI-0.901-0.628,P=0.000;β=-0.808,95%CI-0.901^-0.613,P=0.000;β=-0.812,95%CI-0.928-0.613,P=0.000;β=-0.812,95%CI-0.928^-0.701,P=0.000)。结论血清25OHD与讨初诊2型糖尿病合并尿白蛋白正常患者UPCX、Nephrin及MCP-1显著相关,是糖尿病早期肾损害的阴性预测因子。     

肾小球疾病患者尿沉渣足细胞分子podocin和podocalyxin分析

目的：以ELISA法检测尿沉渣足细胞podocin,podocalyxin排泌并观察其与不同肾小球疾病的关系。方法：共收集我院自2010年5月～8月以来行肾活检证实为肾小球疾病的患者,收集其临床资料,并以ELISA法检测尿沉渣足细胞分子podocin,podocalyxin。结果：共40个患者,男15例,女25例,平均年龄（38.27±16.33）岁,增殖性肾小球疾病患者19例：IgA肾病10例,新月体性肾炎2例,IgM肾病2例,Ⅳ（A/G）型狼疮性肾炎5例;非增殖性肾小球疾病患者19例：微小病变型（MCD）5例,局灶节段硬化性肾小球肾炎（FSGS）8例,膜性肾病（MN）6例,另原发性肾淀粉样变性2例,对照健康自愿者10例。尿podocin分子排泌在正常对照组最低,在增殖性肾小球疾病和非增殖性肾小球疾病间差异无统计学意义（P〉0.05）,增殖性肾小球疾病尿podocin排泌高于肾淀粉样变性患者（P〈0.05）。新月体肾炎的尿podocin排泌显著高于其他肾小球疾病（P〈0.05）,后依次FSGS,IgA肾病,狼疮性肾炎,MN,IgM肾病,MCD;尿沉渣podocalyxin排泌在正常对照组最低,而增殖性肾小球肾炎和非增殖性肾小球肾炎间差异无统计学意义（P〉0.05）。新月体肾炎尿podocalyxin排泄量最高,其后依次为FSGS,IgA肾病,MN,狼疮性肾炎,MCD,IgM肾病,以肾淀粉样变性最低。尿podocalyxin与podocin呈正相关,尿podocin与血C3呈负相关。结论：ELISA法检测尿沉渣足细胞分子检测可对肾小球疾病患者的肾病理类型提供参考,以正常人尿podocin,podocalyxin排泌最少,增殖性肾小球疾病和非增殖性肾小球疾病间差异无统计学意义,新月体性肾炎尿沉渣podocin及Podocalyxin高于其他疾病患者,FSGS患者的尿沉渣podocin及Podocalyxin排泌量也较多,肾淀粉样变性患者的尿沉渣podocin及Podocalyxin最低,血清C3与尿podocin的排泌呈负相关。     

阿奇霉素对大鼠阿霉素肾病的干预作用

目的 通过观察阿奇霉素对阿霉素肾病大鼠血、尿生化指标、肾脏组织病理以及细胞间黏附因子1（ICAM-1）、nephrin与podocalyxin在肾组织表达的影响,探讨其在大鼠阿霉素肾病中的干预作用。 方法 建立大鼠阿霉素肾病模型,分为阿奇霉素治疗组、泼尼松治疗组、联合治疗组、模型组及正常对照组。监测实验0、4、8周24 h尿蛋白量（24 h-up）及血生化指标动态变化,计算内生肌酐清除率（Ccr）。观察肾组织病理形态学改变。免疫组化SP法观察肾组织中ICAM-1、nephrin、podocalyxin的表达。 结果 实验4周时尿蛋白及白蛋白指标均达到肾病模型要求,提示模型制作成功。实验8周,与模型组相比,各治疗组大鼠的各项观察指标均有不同程度改善,24 h-up、胆固醇、Scr显著降低（P < 0.05）,总蛋白、Alb及Ccr（除外C组）有所增加（P < 0.05）,肾组织病理改变减轻,肾脏病理积分及细胞外基质/肾小球面积比值降低（P < 0.01）,肾小球及肾小管ICAM-1表达减少（P < 0.01）,nephrin、podocalyxin表达增高。综合比较,其中联合治疗组疗效最好。 结论 阿奇霉素对阿霉素肾病大鼠的干预有类似于泼尼松样的治疗作用,但其对早期肾功能的保护作用逊于泼尼松,而二者联合应用可起到协同治疗的作用,其药效明显优于两药的单独应用。     

高血压大鼠足细胞的超微病变和podocalyxin的表达及其作用研究

目的观察高血压大鼠足细胞的超微结构病变,探讨足细胞蛋白podocalyxin(PCX)在高血压大鼠肾组织中的表达及作用。方法随机将30只雄性SD大鼠以改进的"两肾一夹"方法建立高血压大鼠模型,分为高血压组和对照组。分别于造模前和造模后1、5、10周检测两组大鼠的尿β2-微球蛋白(β2-MG)、血尿素氮(BUN)及血肌酐(Scr)水平;免疫荧光方法观察PCX在肾组织的表达,并用Image-pro plus 6.0软件,以面积密度值进行分析;光镜、电镜观察肾小球及足细胞超微结构改变。结果 (1)术后2周起高血压组收缩压(SBP)较对照组显著升高(137.2±9.4mmHg vs 92.3±10.3mmHg,P<0.01),并且逐渐升高至术后4周趋于平稳。(2)术后5周起高血压组尿β2-MG显著高于对照组[(110.28±11.25)ng/L vs(56.68±9.51)ng/L,P<0.01],并且有继续增高的趋势。两组BUN、Scr在整个实验过程中没有显著性差异。(3)光镜、电镜观察均可见高血压组肾脏发生病理改变;足细胞超微结构发生病变。(4)免疫荧光可见高血压组PCX表达明显减少,其面积密度值显著低于对照组(0.204±0.042 vs 0.296±0.039,P<0.01),且PCX表达与尿β2-MG呈显著负相关(r=-0.927,P<0.01)。结论 PCX蛋白表达降低可能是参与高血压肾损害的机制之一,其可能是导致肾小球电荷屏障受损、尿蛋白排泄增加、肾功能受损、肾脏病理及足细胞超微结构发生病变的基础之一。     

Urinary podocyte-associated mRNA profile in Egyptian patients with diabetic nephropathy

IntroductionPodocyte injury and subsequent excretion in urine play a crucial role in the pathogenesis and progression of diabetic nephropathy (DN). Quantification of messenger RNA expression in urinary sediment by real-time PCR is emerging as a noninvasive method of screening DN-associated biomarkers. We aimed to study the expression of podocyte-associated genes in urinary sediment and their relation to disease severity in type 2 diabetic Egyptian patients with diabetic nephropathy.Methodology: Sixty patients with type 2 diabetes mellitus were recruited in addition to twenty non diabetic healthy volunteers. Relative mRNA abundance of nephrin, podocalyxin, and podocin were quantified, and correlations between target mRNAs and clinical parameters were examined.ResultsThe urinary mRNA levels of all genes studied were significantly higher in diabetics compared with controls (p < 0.001), and mRNA levels increased with DN progression. Urinary mRNA levels of all target genes positively correlated with both UAE and HbA_1c. The expression of nephrin, podocalyxin, and podocin mRNA correlated with serum creatinine {(r = 0.397, p value = 0.002), (r = 0.431, p value = 0.001), (r = 0.433, p value = 0.001) respectively}.ConclusionThe urinary mRNA profiles of nephrin, podocalyxin, and podocin were found to increase with the progression of DN, which suggested that quantification of podocyte-associated molecules will be useful biomarkers of DN.     

来氟米特对糖尿病大鼠肾脏Podocalyxin表达的影响

目的：研究来氟米特对糖尿病大鼠肾脏Podocalyxin蛋白表达的影响。方法：48只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、糖尿病肾病模型组、来氟米特干预组、氯沙坦干预组,每组12只。腹腔注射STZ建立糖尿病肾病大鼠模型,给予药物干预。观察各组大鼠血糖、24h尿微量白蛋白量的变化,8周、12周末各组大鼠血尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）、肾脏组织病理变化及肾组织Podocalyxin表达水平。结果：8周、12周末模型组、来氟米特干预组、氯沙坦干预组24h尿微量白蛋白定量较正常对照组显著增高（P〈0.05）,肾组织病理损伤明显,大鼠Podocalyxin蛋白表达均显著低于正常对照组（P〈0.05）。8周、12周末干预组24h尿微量白蛋白定量、BUN、Scr水平显著低于同期模型组（P〈0.05）,肾组织病理损伤较模型组明显减轻,大鼠肾组织Podocalyxin蛋白表达显著高于同期模型组（P〈0.05）。结论：来氟米特能够上调糖尿病大鼠肾组织Podocalyxin表达水平,对糖尿病肾脏损伤有保护作用。