血吸虫对吡喹酮抗药性的研究Ⅱ曼氏血吸虫吡喹酮敏感株与抗性株虫卵和毛蚴对吡喹酮的反应性

目的　比较曼氏血吸虫吡喹酮敏感株与抗性株虫卵和毛蚴对吡喹酮的反应性 ,旨在运用敏感株与抗性株反应性间的差异 ,建立简单快速吡喹酮敏感性检测方法。方法　将各株虫卵分别孵育于 5× 10 -6、10 -6、5× 10 -7mol/ L和 10 -7mol/ L吡喹酮溶液中 2 4h,后移至清水孵化 ,比较虫卵的孵化率。将各株毛蚴分别暴露于 10 -3 、10 -4 、10 -5、5× 10 -6、10 -6、5× 10 -7mol/ L和 10 -7mol/ L吡喹酮溶液中 ,0、1、5 min后观察比较毛蚴的运动及形态学变化。结果　经 10 -6mol/ L 和 5× 10 -7mol/L吡喹酮孵育 2 4h后 ,敏感株血吸虫虫卵的孵化率分别为 4.2 %和 3 0 .7% ,抗性株分别为 2 4.2 %和61.2 %。当毛蚴暴露于 5× 10 -6mol/ L吡喹酮中 ,敏感株 10 0 %毛蚴体中部立刻收缩变形 ,而抗性株仅见 13 .4%毛蚴变形 ;当暴露于 10 -6mol/ L 吡喹酮 0、1、5 min后 ,敏感株毛蚴的变形率分别为3 5 .5 %、63 .9%、91.2 % ;抗性株分别为 0、7.6%、14 .3 %。结论　曼氏血吸虫吡喹酮抗性株和敏感株虫卵与毛蚴阶段对吡喹酮的体外反应性的差异均非常显著。提示 ,将毛蚴移入 10 -6mol/ L吡喹酮溶液中 1min,镜下观察其变形率 ,作为曼氏血吸虫对吡喹酮敏感性的检测方法 ,可用于现场判断病人化疗失败的原因是否是由于吡喹酮抗性     

“模拟钉螺”制作材料的研究

目的利用对日本血吸虫毛蚴有趋向作用的物质制作＂模拟钉螺＂吸引毛蚴。方法选用明胶、琼脂做载体材料,加入Fe3＋制成＂模拟钉螺＂。采用改良的Roberts比较法观察＂模拟钉螺＂及螺狮处理过的水（SCW）对毛蚴的趋向性。结果 Fe3＋浓度分别为0.1、0.5 mol/L,明胶含量分别为9%和10%的凝胶颗粒,以及Fe3＋浓度为0.5 mol/L、明胶含量为9%,琼脂含量为1%或2%的混合凝胶颗粒可作为＂模拟钉螺＂载体,所制作的＂模拟钉螺＂对毛蚴的趋向性较SCW更强。结论按一定配比制成的含Fe3＋的明胶以及明胶和琼脂的混合物均可作为＂模拟钉螺＂载体的制作材料。     

离子对日本血吸虫毛蚴趋向的影响

目的研究几种常见离子对日本血吸虫毛蚴趋向作用的影响。方法采用改良的Roberts比较法,以不同浓度的Fe3 、Ca2 、Fe2 、Na 、NH4 、Mg2 、Al3 溶液为实验组,等量去离子水作为对照组,检测这些离子对日本血吸虫毛蚴趋向作用的影响。结果Fe3 、Mg2 、Al3 对日本血吸虫毛蚴趋向的影响为显著吸引作用;Fe2 、Ca2 为排斥作用;NH4 和Na 对日本血吸虫毛蚴趋向的影响依离子浓度不同而有差异。结论不同的离子对日本血吸虫毛蚴趋向运动有不同的影响。     

钉螺对不同宿主源性日本血吸虫毛蚴的易感性

目的了解钉螺对不同终宿主源性日本血吸虫毛蚴的易感性差异。方法收集家兔、水牛和小白鼠排出的虫卵,孵出毛蚴,以毛蚴和钉螺5：1的比例感染同一地钉螺。同时设对照组,观察各组钉螺感染率、死亡率。结果实验组家兔、水牛和小白鼠排出虫卵孵出毛蚴感染钉螺,获得的阳性率分别为1.42%、8.67%和19.87%,钉螺死亡率分别为29.5%、13.5%和24.5%;对照组钉螺阳性率分别为2.63%、2.02%和11.66%,死亡率分别为24.0%、49.5%和18.5%。结论不同宿主源日本血吸虫毛蚴对钉螺易感性存在差异。     

江苏省血吸虫病监测预警系统的研究 Ⅴ长江水域血吸虫毛蚴感染性的监测

目的建立长江水体血吸虫毛蚴监测方法,监测水体受血吸虫虫卵污染情况,为追踪与控制传染源、切断传播途径及灭螺提供参考依据。方法在长江江苏段选择45个监测点,采用浮瓶-尼龙袋哨螺测定法,每个点投放500只阴性钉螺,于2009年5-9月每月投放1次,每次投放28 h,钉螺收回后置于25℃恒温箱内饲养。首次回收2个月后每月采用群体逸蚴法检测1次钉螺感染性,在末次投放3个月后,采用压碎法解剖全部钉螺,观察钉螺血吸虫感染情况,并调查出现感染螺环境的人畜活动情况。建立江苏省长江水域哨螺监测数据库,绘制哨螺阳性点地理分布图,计算江水中钉螺单位时间被血吸虫毛蚴感染的阳性率。结果 45个点5个月共投放哨螺44 717只,回收43 477只,回收率为97.23%;钉螺逸蚴81 410只次,未发现感染性钉螺;解剖钉螺13 033只,发现5只感染血吸虫,钉螺感染率为0.038%,水体中钉螺感染血吸虫的阳性率为4.11/100万。在45个监测点中检出阳性点5个,阳性点出现率为11.11%;其中哨螺阳性点分布在长江南岸3个、北岸1个、江心洲1个,其阳性点出现率分别为21.43%、5.56%和7.69%,南岸哨螺阳性点出现率是北岸的3.8倍。5个阳性点中有3个为渔船民集散地。结论江苏省长江南岸水域受血吸虫虫卵污染程度高于北岸,渔船民集散地是重要的污染地之一。浮瓶-尼龙螺袋哨螺测定法是监测水体受血吸虫虫卵污染的有效方法。     

植物他感作用对日本血吸虫毛蚴趋向性观察

目的研究洲滩草本植物的他感作用对日本血吸虫毛蚴趋向性的影响。方法采用改良Roberts比较法检测植物对日本血吸虫毛蚴趋向性的排斥或吸引作用。结果10%茅草根、野胡萝卜草茎、猫眼草叶和根、地菜叶、苔草茎等洲滩草本植物的浸出液能够非常显著地排斥日本血吸虫毛蚴的趋向运动,而小蓟、问荆浸出液作用则相反。结论植物的他感作用能够影响毛蚴的趋向性。     

血吸虫对吡喹酮抗药性的研究Ⅺ日本血吸虫中国大陆现场分离株虫卵毛蚴尾蚴对吡喹酮的敏感性

目的测定日本血吸虫中国大陆主要流行区现场分离株虫卵、毛蚴和尾蚴阶段对吡喹酮的敏感性，为建立日本血吸虫吡喹酮敏感性检测技术提供基础。方法分别从中国湖南、湖北、江西、安徽、江苏和云南6省日本血吸虫病流行区病人粪便标本中分离虫卵，建立日本血吸虫现场分离虫株；采用实验室已有的3株曼氏血吸虫株为对照。将各虫株虫卵分别孵育于5×10-6、10-6、5×10-7、l0-7mol／L吡喹酮溶液中24 h后移至清水孵化，观察虫卵的孵化率。将各虫株毛蚴分别暴露于5×10-6、   10-6、5×10-7、10-7mol/L吡喹酮溶液中，0、1、5 min后观察比较毛蚴的运动及形态学变化。将各虫株尾蚴分别暴露于 10-5、6×10-7，4×10-7、10-7 moI/L吡喹酮溶液中，0、20、40、60、80、100 min后，解剖镜下观察尾蚴的泳动、收缩和断尾率的变化。并将结果与曼氏血吸虫株进行比较。结果 经10-6，5×10-7、10-7 mol／L吡喹酮溶液中24 h后，日本血吸虫虫卵的孵化率分别为0. 52%、11. 90%和49.15%，曼氏血吸虫分别为4.17%、31. 37%和92. 53%。当暴露于10-6 mol/L 吡喹酮1 min后，日本血吸虫毛蚴的变形率为100.00%，曼氏血吸虫为55. 73%；当分别暴露于5×10-7、10-7mol／L吡喹酮5 min后，日本血吸虫毛蚴的变形率为96. 82%和21. 80%，曼氏血吸虫毛蚴为21. 80%和0。当暴露于10-5 mol／L吡喹酮中40 min，日本血吸虫尾蚴的断尾率为96. 75%，曼氏血吸虫为28. 30%；暴露于4×10-7mol/L吡喹酮中100 min，日本血吸虫尾蚴的断尾率为95. 82%，曼氏血吸虫为11. 40%；当暴露于l0-7mol／L吡喹酮中80 min，日本血吸虫尾蚴的断尾率为29. 65%，曼氏血吸虫尾蚴为0。结论 日本血吸虫各现场分离株间在虫卵、毛蚴和尾蚴阶段财吡喹酮的敏感性无明显差异，但均明显高于曼氏血吸虫。研究提示，将毛蚴移人5×l0-7mol/L吡喹酮溶液中1 min，镜下观察其变形率，可作为日本血吸虫对吡喹酮敏感性的观察指标，可用于现场判断病人化疗失败的原因是否是由于吡喹酮不敏感株产生所引起。将尾蚴移入 4×10-7 mol/L吡喹酮溶液中80～100 min，镜下观察其断尾率，可用于螺体内虫株吡喹酮敏感性监测。     

自动摄影术在血吸虫毛蚴孵化实验结果观察中的应用

目的 目的 探讨自动摄影术用于观察常规尼龙绢集卵毛蚴孵化实验结果的价值。方法 方法 在牛粪便中掺入一定量的血吸虫新鲜虫卵, 以含虫卵的粪便为实验组, 包括低污染组和高污染组; 以不含虫卵的粪便为阴性对照组, 每组40份样本。以常规血吸虫尼龙绢集卵孵化法对粪便样本进行毛蚴孵化, 采用手电筒光照、 放大镜及自动录像相结合的方法, 对粪便样本中毛蚴孵化的过程进行录像。通过观察录像记录, 判断粪便样本中是否有血吸虫毛蚴孵出。同时采用常规肉眼观察方法进行结果判断, 比较自动摄影术与肉眼观察法2种方法的毛蚴阳性检出率差异及优缺点。结果 结果 建立了手电筒光照、 放大镜影像放大及自动摄影术相结合的毛蚴孵化结果观察方法, 证实了自动摄影术对粪便中血吸虫虫卵毛蚴孵化的阳性检出率高于常规肉眼观察方法, 尤其是在虫卵低污染组检出率有明显的差异。40份低污染组中常规肉眼观察法和自动摄影术观察法的阳性检出率分别为57.5%和85.0% （χ2 = 11.723, P > 0.05）, 40份高污染组中阳性检出率分别为97.5%和100% （χ2 = 1.253, P < 0.05）, 80份高低污染组平均阳性检出率分别为77.5%和92.5% （χ2 = 6.894, P > 0.05）。结论 结论 自动摄影术可有效提高毛蚴常规尼龙绢集卵孵化实验的阳性检出率。     

血吸虫毛蚴自动识别系统的检测效果

目的 通过模拟现场实验,比较血吸虫毛蚴动态自动识别系统与传统人工肉眼观察法检测血吸虫毛蚴的效果,以评价毛蚴自动识别系统替代人工肉眼观察法检测血吸虫毛蚴的应用价值。方法 采集血吸虫病非流行区居民粪便样本260份,按不同实验需要制作含有血吸虫毛蚴的检测样本瓶。制作30份阳性样品（每瓶中放入5条毛蚴）用于敏感性实验,由2名检验人员采用传统人工肉眼观察法检测,再采用毛蚴自动识别系统进行检测,比较阳性检出率。制作30份阳性检测样品（每瓶中放入10条毛蚴）,由2名操作人员分别采用同一台毛蚴自动识别系统在不同时间检测,比较检测结果。从200份阴性粪便样品中随机抽取90份,加入不同数量毛蚴,制作成阳性样品。将90份阳性样品分为3组,每组30份。第1组每份样品分别加入21条毛蚴、第2组每份样品分别加入6 ~ 20条毛蚴、第3组每份样品分别加入1 ~ 5条毛蚴,然后与其他110份阴性样本混合。采用盲法的原则,由2名检验人员先采用传统人工肉眼观察法检测该200份样品,再用毛蚴自动识别系统进行检测,比较两者检测时间、正确率、漏检率、误检率等参数。结果 2名检测人员采用人工肉眼观察法对30份阳性样本的检出率分别为43.33%和33.33%,而毛蚴自动识别系统检出率为80.00%,差异均有统计学意义（[χ2 =7.05]、12.97,[P均< 0.01]）。2名检测人员采用同一台毛蚴自动识别系统检测30份阳性样本的检出率分别为96.67%和86.67%,差异无统计学意义（[χ2] = 0.27,P > 0.05）。毛蚴自动识别系统检测血吸虫毛蚴阳性样品的正确率为98.00%,高于人工肉眼观察法的79.75%;检出阳性样本的用时仅为人工肉眼法的50%;毛蚴自动识别系统的阳性漏检率和误检率分别为2.22%和1.82%,明显低于人工检测的35.56%和7.73%。结论 与传统人工肉眼观察法相比,毛蚴自动识别系统检测血吸虫毛蚴具有敏感性高、重复性好、检测时间短、正确率高、漏检率和误检率低等优点,在现场和临床血吸虫毛蚴检测中可取代人工肉眼观察法,值得进一步推广应用。     

Ultrastructure of the Miracidium of Echinostoma paraensei Lie and Basch, 1967 (Trematoda, Echinostomatidae)

The morphology of Echinostoma paraensei was studied using transmission electron microscopy. The terebratorium region has many electrondense secretory granules and many folds on the surface. The epidermal cells that cover the larval body have unique nuclear morphology, many mitochondria and vesicles being attached to the interepidermal ridges by a septate junction. The cilia present the organization 9+2 and a typical structure with a shaft, axosome, basal body and rootlet. Below the epidermal cells there is a layer of circular muscle and, adjacent to it, a layer of longitudinal muscle fibers. The excretory system has two flame cells, with internal and external ribs and leptotriches at the barrel region, an excretory vesicle and an excretory pore.