Association of expression of p53, livin,ERCC1, BRCA1 and PARP1 in epithelial ovarian cancer tissue with drug resistance and prognosis

ObjectiveTo evaluate the correlation between expression of p53, Livin, Excision repair cross-complementation group 1 (ERCC1), BRCA1 and Poly (ADP-ribose) polymerase 1 (PARP 1) in epithelial ovarian cancer (EOC) tissues with platinum-based chemotherapy and prognosis in patients who received either comprehensive surgical staging or cytoreductive surgery.MethodsThe protein expressions level of five potential regulators involved in chemo-resistance, including p53, Livin, ERCC1, BRCA1 and PARP1 in EOC tissues from 66 patients were evaluated using immunohistochemistry method. We also measured preoperative CA125 level measured by an electrochemiluminescence immunoassay (ECLIA) in all patients. Cox proportional hazard regression model was established to identify whether these proteins are associated with overall survival.ResultsChemo-resistance and poor overall survival were shown to be significantly related with positive expressions of p53, Livin, ERCC1, BRCA1 and PARP1. The evaluation of risk factors on the chemo-resistance showed that ERCC1 and BRCA1 are strong risk factors (OR: 21.12 and 21.61, all P < 0.01), while the positive expression of ERCC1, BRCA1 and PARP1 was significantly highly associated with the overall survival (HR: 3.9, 3.7 and 2.6, all P < 0.05, respectively). CA125 levels were significantly higher in patients with positive expression of P53, BRCA1, ERCC1 or Livin compared with those with negative expression (471:146, 667:260, 494:261 and 4589:89 U/ml, respectively, all P < 0.05).ConclusionsThe elevated expression levels of ERCC1 and BRCA1 were identified as significant risk factors for chemo-resistance in EOC. Reduced expression levels of ERCC1, BRCA1 and PARP1 were significantly associated with better overall survival. The CA125 levels were significantly higher in patients with EOC specimens that were positive of p53, BRCA1, ERCC1 and Livin.     

替莫唑胺对 Livin基因过表达的胶质瘤TJ905细胞及其干细胞增殖活性的影响

目的分析替莫唑胺（TMZ）干预Livin基因过表达的胶质瘤TJ905细胞及其干细胞模型后对细胞增殖活性的影响,以及对胶质瘤TJ905细胞和TJ905干细胞中Livin、Caspase-3/7的作用机制。 方法使用免疫磁珠方法从胶质瘤TJ905细胞系中分选出CD133阳性胶质瘤干细胞,采用慢病毒过表达技术建立Livin过表达的细胞模型,使用不同浓度（0、25、50、100、200、400 μmol/L）的TMZ干预细胞模型48 h,采用CCK-8、流式细胞术、反转录PCR检测药物干预后细胞增殖活性、细胞周期及Livin、Caspase-3/7基因的表达量。 结果（1）胶质瘤TJ905细胞中Livin基因表达量明显高于同源TJ905干细胞,差异有统计学意义（P<0.05）;（2）TMZ能抑制胶质瘤TJ905细胞及其干细胞的增殖活性,降低增殖速度,并且随药物浓度的增加抑制作用逐渐增强;（3）TMZ能抑制Livin基因的表达,诱导Caspase-3/7的表达,并且随药物浓度的增加抑制作用逐渐增强,差异有统计学意义（P<0.05）;（4）Livin基因转染后胶质瘤干细胞细胞周期G0/G1增加明显,而TJ905细胞周期则是G2/M期少量增加;TMZ干预细胞模型后,TJ905干细胞过表达组在S、G2/M停滞,对照组则是在S期停滞;TJ905细胞过表达组在S期停滞,对照组G2/M则是低浓度诱导停滞,随药物浓度增加其诱导作用减弱,差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论TMZ可以通过抑制Livin基因的表达、诱导Caspase-3/7的表达、调控细胞周期变化来降低细胞增殖活性,促进细胞凋亡。     

凋亡抑制基因在急性白血病及骨髓增生异常综合征中的研究

目的探讨急性白血病及骨髓增生异常综合征患者骨髓凋亡抑制基因MCL-1、livin、aven的表达及临床意义。方法选取2012年9月~2013年12月本院收治的113例初发急性白血病患者,32例骨髓增生异常综合征患者及20例对照组患者（缺铁性贫血12例、血小板减少性紫癜8例）的新鲜骨髓液标本,采用RT-PCR方法检测MCL-1、livin、aven基因mRNA的表达水平及表达率。结果 AL组和MDS组MCL-1、livin、aven mRNA表达水平及阳性表达率分别高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。MCL-1与livin基因mRNA的表达呈正相关（r=0.586,P〈0.05）,MCL-1与aven基因的表达呈正相关（r=0.603,P〈0.05）,liven基因与aven基因表达无相关性（r=0,P〉0.05）。结论 3种凋亡抑制基因MCL-1、livin、aven基因mRNA在急性白血病及骨髓增生异常综合征中表达均增高。     

Livin异构体基因转染对肺腺癌A549细胞生长及放化疗敏感性的影响

目的研究转染Livin α、β两种异构体基因对肺腺癌A549细胞生长及放、化疗敏感性的影响。方法基因转染获得稳定表达Livinα和β的A549细胞克隆，逆转录一聚合酶链反应及免疫荧光化学法了解Livin α、β在转染细胞中基因水平和蛋白水平的表达情况；用平板克隆形成实验研究细胞生长情况；甲基偶氮唑蓝法研究细胞对放、化疗的敏感性；细胞周期分析法了解细胞凋亡情况。结果与转染前比较，基因转染后，阳性细胞尤其是表达Livin α的A549细胞克隆形成能力提高约20％、倍增时间缩短5～6h（P〈0．05），对多种化疗药物和放射线敏感性降低（P〈0．01），10Gy放射线照射下仅有0．2％细胞发生凋亡。结论Livin尤其是Livin α参与肺癌的发生发展，是肺癌细胞对放、化疗耐受的重要机制之一。     

SiRNA联合介导Livin和Survivin基因沉默诱导人肾癌细胞786-O化疗敏感性的实验研究

目的:观察siRNA联合介导Livin和Survivin基因的沉默诱导人肾癌细胞786-O化疗敏感性的作用。方法:构建Livin和Suvivin联合靶向的小干扰RNA(siRNA)重组表达载体shRNA,然后将目的载体转染于人肾癌细胞株786-O。应用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot方法分别检测转染前细胞经顺铂、5-FU和丝裂霉素处理后的Livin和Survivin基因的mRNA与蛋白水平的变化。应用CCK-8试验检测转染前后细胞对顺铂、5-氟尿嘧啶(5-FU)和丝裂霉素的半数致死量(IC50)、细胞增殖的变化。结果:CCK-8结果显示,联合介导Livin和Survivin基因沉默组细胞较分别单独介导细胞组化疗的敏感性明显增强(P0.05),且转染前后细胞对顺铂、5-FU和丝裂霉素的IC50发生显著变化(P0.05)。结论:SiRNA联合介导Livin和Survivin基因表达下调,发挥协同增强的siRNA作用。     

凋亡抑制蛋白Livin在人原发性肝癌细胞系HEPG-2中的表达情况

目的研究凋亡抑制蛋白Livin在人原发性肝癌细胞系HEPG-2中的表达情况。方法以RT-PCR法检测人原发性肝癌细胞系HEPG-2中凋亡抑制蛋白Livin基因mRNA的表达。结果HEPG-2细胞只表达Livin基因的β亚型,即Livinβ。结论人原发性肝癌细胞系HEPG-2细胞阳性表达Livinβ基因。本实验研究结果为原发性肝癌的诊断和治疗提供了新思路、新方法。     

灵芝孢子粉对癫痫大鼠学习记忆、caspase-3和livin的影响

目的： 观察灵芝孢子粉对戊四氮（PTZ）致痫大鼠学习记忆变化、caspase-3和livin的影响,探讨癫痫发病机制及灵芝孢子粉的干预作用。方法: 将Wistar大鼠分为对照组、模型组和灵芝孢子粉干预组。用Y迷宫检测各组大鼠学习记忆能力,用免疫组化染色观察caspase-3和livin的表达,用BI-2000医学图像分析系统比较各蛋白的阳性单位（PU）。结果: 戊四氮点燃后的大鼠学习记忆能力显著下降（P<0.05）。癫痫组海马及皮层caspase-3表达水平增加（P<0.05）,且与livin呈负相关。灵芝孢子粉治疗后学习记忆能力增强,神经元的变性、坏死和凋亡减轻。结论: Caspase-3、livin参与了癫痫后脑组织神经元的凋亡过程,灵芝孢子粉能够提高癫痫大鼠学习记忆能力,这可能与其降低caspase-3表达而保护神经元有关。     

乳腺癌组织Livin和PTEN表达与肿瘤血管生成的相关性

目的:研究乳腺癌组织中凋亡抑制蛋白Livin和抑癌基因PTEN的表达与微血管密度(MVD)的关系,探讨乳腺癌血管生成的影响机制。方法:应用免疫组化Elivision法检测90例乳腺癌和30例乳腺纤维腺瘤组织中Livin、PTEN、VEGF的表达和CD34标记的MVD值,分析Livin和PTEN表达与乳腺癌血管生成及侵袭转移的关系。结果:在90例乳腺癌中Livin、PTEN和VEGF表达阳性率分别为54.4%、48.9%和61.1%,MVD为(30.81±11.29)个/HPF,与良性对照组比较均有显著差异(P<0.01);Livin阳性表达与乳腺癌肿瘤大小、临床分期、MVD值及VEGF表达呈正相关(P<0.05),与年龄、病理分级、淋巴结转移未见显著相关(P>0.05);PTEN表达与乳腺癌淋巴结转移、临床分期和MVD呈负相关(P<0.05),与VEGF表达、年龄、肿瘤大小、病理分级未见显著相关(P>0.05)。结论:Livin和PTEN在乳腺癌的血管生成及发生发展过程中分别起促进和抑制作用,Livin的促血管生成作用可能与其上调VEGF的表达有关。     

新发现的Livin基因在结直肠癌组织中mRNA表达及其临床意义

目的 研究Livin基因在结直肠癌组织表达及其意义。方法 采用逆转录聚合酶链式扩增反应对30例结直肠癌组织、30例癌旁正常组织及10例正常成人大肠组织中Livin mRNA的表达进行检测。结果 10例正常成人大肠组织中Livin基因均无表达。结直肠癌及癌旁正常组织Livin基因表达阳性率均为100％，但癌旁正常组织Livin基因表达量较癌组织表达量明显下降，（P〈0．05），Livin基因表达量与患者的年龄、性别、肿瘤的分期、分级差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 Lvin基因表达升高与结直肠癌密切相关。可能参与结直肠癌的发生。     

Livin在非霍奇金淋巴瘤中表达的临床意义

本研究旨在探讨凋亡抑制因子Livin在非霍奇金淋巴瘤组织中的表达及其临床意义。应用免疫组织化学法检测Livin蛋白在30例非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin′s lymphoma,NHL)患者及11例淋巴结反应性增生(reac-tive hyperplasia of lymph node)患者淋巴结中的表达,并应用real-time PCR对其中20例非霍奇金淋巴瘤、10例淋巴结反应性增生及4例正常人的淋巴结组织中Livin mRNA表达水平进行检测,分析livin蛋白和mRNA表达与NHL患者临床表现及其特征的相关性。结果表明,NHL患者淋巴结组织中Livin mRNA表达水平与正常淋巴结组织以及淋巴结反应性增生组织比较均显著增高(RQ中位数分别为12.4vs0.34和12.4vs0.61)(p0.01)。30例非霍奇金淋巴瘤中有16例Livin蛋白表达阳性,阳性率为53.3%;11例淋巴结反应性增生患者仅1例表达阳性,阳性率为9.1%;而且观察到Livin蛋白主要在细胞浆中表达,在胞核内极少见有表达。研究还显示,无论是LivinmRNA表达还是蛋白表达均与NHL的临床分期(p=0.023;p=0.009)、B症状(p=0.015;p=0.026)、血β2微球蛋白(β2-MG,p=0.031;p=0.012)及血清乳酸脱氢酶(LDH,p=0.037;p=0.007)密切相关,而两者的表达与年龄、性别及分型无明显相关性(p0.05)。结论:Livin mRNA及蛋白在NHL患者中表达增高,并与临床多项指标存在相关性,因此Livin表达水平对评价患者临床分期及预后可能具有重要的指导意义;对Livin在NHL中的作用机制的深入探讨将有助于揭示NHL的发生、发展及治疗的机理,并有望成为NHL未来治疗的重要突破点。