未成熟树突状细胞诱导实验性自身免疫性重症肌无力耐受的试验研究

目的 探讨未成熟树突状细胞(iDC)对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的影响。方法 用小剂量粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)体外诱导骨髓前体细胞，获得的iDC用乙酰胆碱受体(ACAR)负载后皮下接种同基因大鼠，3周后通过体外试验观察脾细胞对AChR的增殖反应，同时用AChR和完全弗氏佐剂(CFA)免疫大鼠，观察免疫7周后MG相关指标的改变。结果 小剂量GMCSF诱导所获得的iDC与成熟DC(mDC)相比，其表面MHCⅡ和共刺激分子CD80、CD86的表达低，摄取dextran-FITC的能力强但刺激同种T细胞增殖的能力弱。接种iDC、mDC、AChR负载的mDC的大鼠和对照组一样，体外脾细胞对AChR的刺激均强烈增殖，用AChR和CFA免疫后，产生明显的MG症状，重复电刺激出现明显衰减，血清AChRAb滴度明显增高，神经肌肉接头呈现典型的MG样改变；而接种AChR负载的iDC的大鼠脾细胞对AChR的刺激呈现明显的增殖抑制但对卵清蛋白的刺激仍强烈增殖，MG相关指标均未见明显改变。结论 骨髓前体细胞经小剂量GM-CSF诱导产生了iDC，AChR负载的iDC可诱导EAMG耐受。     

非小细胞肺癌患者Th1/Th2型细胞因子的表达及其临床意义

目的研究辅助性T淋巴细胞(helper T lymphocyte,Th)1、2型细胞因子在非小细胞肺癌(non-small cell lung canc-er,NSCLC)患者外周血中的表达。方法采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测40例NSCLC患者手术前后和20例正常对照外周血中Th1型细胞因子白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis fac-tor-α,TNF-α)和Th2型细胞因子IL-10、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的水平。结果 NSCLC组术前IL-2、TNF-α水平较正常对照组明显降低(P<0.05);IL-10、TGF-β1水平则明显升高(P<0.05)。NSCLC患者手术后IL-2、TNF-α水平较手术前明显升高(P<0.01);IL-10、TGF-β1水平则明显降低(P<0.01)。外周血Th1/Th2型细胞因子水平与NSCLC临床病理无关。结论①NSCLC患者呈现Th1抑制和Th2极化状态,是肺癌发生免疫耐受的可能机制;②手术切除肿瘤可在一定程度上逆转Th1/Th2的失衡状态,改善机体免疫状态,对预后产生积极作用。     

口服牛胰岛素在昆明株小鼠抑制了链脲菌素引起的糖尿病及胰岛炎

正常昆明株小鼠口服牛胰岛素（Ａ组）６周（１ｍｇ，３次／周）与对照组（Ｂ组）均接收ＳＴＺ注射（３０ｍｇ·ｋｇ－１／日×５日），２２周后糖尿病发病率（１０％～９０％）及胰岛病理检查（胰岛炎计分０～３．４级）差异显著。接受Ａ组小鼠新鲜脾细胞（２×１０７）的正常Ｃ组，免疫１０天后共接收ＳＴＺ（同上）２次（间隔７周），共观察６个月。糖尿病发生率为０。提示口服牛胰岛素诱导了免疫耐受，保护胰岛免受ＳＴＺ引起的胰岛炎及糖尿病。     

环磷酰胺抑制作用下小鼠对人红细胞抗原的选择性耐受

目的　以环磷酰胺 (CY)作为免疫抑制剂 ,诱导小鼠产生对人红细胞血型抗原的选择性免疫耐受。　方法　1 0 2只 Balb/c小鼠分成 1 7组 ,在 2× 1 0 7人红细胞免疫注射后 ,分别以不同 CY剂量和给药时间给予抑制。并通过直接和间接血凝反应测定小鼠免疫应答所产生的抗人红细胞抗原的 Ig M和 Ig G型抗体效价。　结果　在 5 0～ 1 5 0 mg/kg CY剂量范围内 ,免疫注射当天至免疫后第 4天 (d0～d4)均可对小鼠的免疫应答产生抑制。而诱导小鼠产生对人红细胞抗原完全耐受的最佳 CY抑制时间和剂量分别为免疫注射后的第 1天和 1 0 0 mg/kg。　结论　 CY能有效抑制小鼠对人红细胞免疫所产生的应答 ,选择适当的给药时间和 CY剂量对耐受的建立十分重要。本项研究对诱导小鼠免疫系统产生对人红细胞血型弱抗原的应答具有探索意义。     

不同小鼠之间异基因骨髓移植免疫耐受的实验研究

目的　研究有效诱导异种骨髓移植耐受的方法和对异基因骨髓移植重建的影响。方法　将C57BL 6J小鼠辐射后 ,尾静脉注射 1× 10 7个BALB c小鼠骨髓细胞 (输入骨髓细胞前 4h ,注射供鼠的活化NK细胞 ) ,观察生存期、体重、病理组织学等指标。结果　经骨髓及NK细胞输注的小鼠能显著提高受体小鼠的生存率 ,减轻移植物抗宿主病 (GVHD)的病理伤害程度。结论　在小鼠异基因骨髓移植初期 ,输入供鼠的NK细胞和骨髓细胞 ,能促进造血重建 ,预防移植物抗宿主病的发生     

反转录病毒载体介导猪MHCⅡ分子在猪骨髓细胞中的表达

目的构建猪MHC Ⅱ分子的反转录病毒表达载体，建立产生病毒颗粒的包装细胞株，体外转导小型猪骨髓细胞并观察目的基因的表达情况，为研究小型猪转导同种异体MHC Ⅱ分子对于肝脏移植特异性免疫耐受的诱导提供实验基础和实验材料。方法利用基因重组技术将目的基因SLA-DRB^dd、SLA-DQA^dd和SLA-DQB^dd克隆到反转录病毒载体pLNCX2上，通过脂质体转染包装细胞AmphoPack^TM-293细胞，从G418筛选阳性克隆细胞培养上清中获得了有感染性的病毒颗粒；并对体外培养的猪骨髓细胞进行了感染，采用Nothern杂交和逆转录．聚合酶链反应（RTPCR）等方法检测了目的基因在骨髓细胞中的表达。结果经过酶切和测序验证已成功构建了MHC Ⅱ分子的反转录病毒表达载体，在转染AmphoPack^TM-293细胞后可以产生有感染性的重组病毒颗粒，稳定的CFM-GFG418抗性率为6％～11％，RT结果显示抗性细胞中有目的基因的RNA转录产物存在，而转染空载体的对照组没有。结论重组有目的基因的逆转录病毒载体pLNCX2经过包装细胞AmphoPack^TM-293产生的病毒颗粒可以有效地将猪MHC Ⅱ分子转导入猪的骨髓细胞并获得长期稳定的表达。     

Current status and perspectives in clinical islet transplantation

Beta-cell replacement, by either pancreas or islet transplantation, is the only treatment to achieve an insulin-independent, constantly normoglycemic state avoiding hypoglycemic episodes in patients with type-1 diabetes mellitus. This article reviews the current state of the worldwide experience based on data provided by the International Islet Transplant Registry; it also illustrates the perspectives of clinical islet transplantation. Received: February 7, 2000 / Accepted: February 29, 2000     

组织工程学中的种子细胞移植免疫学问题研究

组织工程是应用组织与器官修复与功能重建的的新兴交叉学科,是研究异基因种子细胞的来源与由此而产生的细胞移植免疫学问题,从其免疫反应发生的类型特点与检测方法,免疫耐受诱导与建立,以及降低异基因种子细胞免疫原性的方法等方面的问题。特别对采用组织工程方法,纯化细胞培养去除抗原呈递细胞和杂细胞的方法,以及通过酶消化使细胞表面抗原变性或减弱、深低温冻存降低细胞表面活性、添加生长调节因子对免疫反应产生抑制作用、采用微孔支架和微囊包被等对细胞起到免疫隔离作用、基因治疗技术等移植前细胞处理降低免疫原性的方法进行了进一步的探讨,展示了异基因种子细胞在组织工程研究中的应用前景。     

小鼠异体Sertoli细胞诱导胰岛移植免疫耐受的作用

目的 观察小鼠Sertoli细胞是否能在异体内起到诱导局部免疫耐受、保护共移植异体胰岛的作用.方法 以糖尿病C57小鼠作移植受体,随机分4组,每组6只;以正常BALB/C小鼠为胰岛供体,正常C57小鼠和正常BALB/C小鼠各作为Serloli细胞供体.A组:单纯移植异体胰岛;B组:移植来源于C57小鼠的Sertoli细胞+BALB/C小鼠来源的胰岛;C组:移植均来源于BALB/C小鼠的Sertoli细胞及胰岛;D组:假手术组.监测各组移植受体的血糖尿糖变化,观察移植物的存活时间.结果 A组移植物平均存活时间为(6.50±2.35)d;B组为(55.67±4.84)d;C组为(51.33±5.05)d;D组未观察到血糖正常.B组及C组的移植方式均可逆转糖尿病小鼠的高血糖状态,移植物存活期均较A组有明显延长,其差异有统计学意义(P<0.05);而B组与C组的移植物存活时间差异无统计学意义(P>0.05).结论 同种异体来源的睾丸Sertoli细胞在异体内可起到诱导局部免疫耐受的效果,对共移植同种异体胰岛起到保护作用,其效果与自体睾丸Sertoli细胞相当.     

亲属活体肾和造血干细胞联合移植诱导免疫耐受研究

目的探讨亲属活体肾造血干细胞联合移植诱导免疫耐受的可行性及安全性。方法对3例女性尿毒症患者进行亲属活体肾造血干细胞联合移植（观察组） 同期接受亲属活体肾移植的5例女性尿毒症患者作为对照组。供体均为男性。采用PCR-SRY方法进行嵌合体检测。测定受体淋巴细胞亚群,随访观察肾造血干细胞联合移植的并发症和临床移植效果并与对照组进行比较分析。结果观察组嵌合体阳性率100%,对照组60% 观察组肾移植受者临床效果良好,呈现免疫低反应和免疫抑制趋势。结论亲属活体肾造血干细胞联合移植是一种可行的诱导免疫耐受的方法,可以诱导产生临床肾移植的免疫低反应。