红细胞对创伤性脑内出血大鼠脑含水量及HO-1表达的影响

目的研究大鼠创伤性脑内出血(TICH)中红细胞对脑含水量和血红素氧合酶-1(HO-1)表达的影响,并分析二者的关系,以探讨红细胞在TICH后脑水肿形成中的作用机制。方法120只大鼠随机分为创伤性脑损伤组(TBI组),TBI加注全血组(WB组),TBI加注溶解红细胞组(LRBC组)和TBI加注压积红细胞组(PRBC组),每组30只。4组均采用自由落体打击法造成大鼠脑外伤。后3组借助立体定向仪分别向伤区脑皮质内注射全血、溶解红细胞或压积红细胞,造成TICH模型。每组于伤后1、3、5d分别处死10只大鼠,5只测伤区脑组织含水量,5只用免疫组化法检测HO-1的表达。结果4组组内比较:TBI、WB和PRBC3组第3d的脑含水量最高(分别为82.85%±0.60%,85.00%±1.12%,84.93%±1.21%),LRBC组第1d的含水量最高(84.44%±0.85%;4组间比较,1d时LRBC组含水量最高,3d时WB和PRBC组含水量最高。在WB、PRBC和LRBC组,HO-1阳性表达的强弱与脑含水量的高低变化相一致。结论红细胞在TICH后迟发性脑水肿的形成中有重要作用,其机制涉及红细胞的降解产物。     

Influence of bradykinin B1 and B2 receptors in the immune response triggered by renal ischemia–reperfusion injury

Bradykinin B1 receptors are exclusively expressed in inflamed tissues. For this reason, they have been related with the outcomes of several pathologies. Ischemia–reperfusion injury is caused by the activation of inflammatory and cytoprotective genes, such as macrophage chemoattractant protein-1 and heme oxygenase-1, respectively. This study was aimed to analyze the involvement of bradykinin B1 and B2 receptors (B1R and B2R) in tissue response after renal ischemia–reperfusion injury. For that, B1R (B1−/−), B2R (B2−/−) knockout animals and its control (wild-type mice, B1B2+/+) were subjected to renal bilateral ischemia, followed by 24, 48 and 120 h of reperfusion. At these time points, blood serum samples were collected for creatinine and urea dosages. Kidneys were harvested for histology and molecular analyses by real-time PCR. At 24 and 48 h of reperfusion, B1−/− group resulted in the lowest serum creatinine and urea levels, indicating less renal damage, which was proved by renal histology. Renal protection associated with B1−/− mice was also related with higher expression of HO-1 and lower expression of MCP-1. In conclusion, the absence of B1R had a protective role against inflammatory responses developed after renal ischemia–reperfusion injury.     

一氧化碳保护大鼠肠道对抗LPS的作用机制

目的： 探讨外源性CO对LPS攻击时大鼠肠道的保护作用及作用机制。 方法： 血气分析监测大鼠呼吸参数，在1、3、6 h的时点上，分别对空白组、脂多糖组（LPS，5 mg/kg）、低浓度CO吸入组（CO 250 mL/M3）、腹腔内CO注射组（CO 2 mL/kg）、脂多糖CO吸入组（LPS 5 mg/kg+CO 250 mL/M3）和脂多糖血症CO腹腔内注射组（LPS 5 mg/kg+CO 2 mL/kg），用硫代巴比妥酸法（TBA）测定肠道丙二醛（MDA）含量，用羟胺法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性，并应用RT-PCR检测肠道组织内的血红素氧合酶-1（HO-1）mRNA的变化。 结果: 给予250 mL/M3的CO持续吸入以及2 mL/kg的CO腹腔内注射，在1、3、6 h时点上，大鼠无缺氧情况的出现。两种方法给予外源性的CO，均降低了内毒素血症时大鼠肠道组织中的MDA含量，提高了SOD的活性，同时诱导了肠组织的HO-1 mRNA 的表达。 结论: 低浓度的CO吸入（250 mL/M3）和一次性腹腔内注射CO（2 mL/kg）补充对大鼠是安全的，补充低浓度或小剂量的外源性CO可以对脂多糖血症肠道提供保护作用，并可以刺激HO-1的产生，促进内源性的CO产生发挥抗炎作用。     

HO-1在CCK-8减轻脂多糖所致的急性肺损伤中的作用

目的： 探讨血红素氧合酶（HO）-1在八肽胆囊收缩素（CCK-8）减轻脂多糖（LPS）所致急性肺损伤（ALI）中的作用。方法: 将大鼠随机分为5组：正常对照组、LPS组、CCK-8+LPS组、LPS+Hm（氯血红素，CO供体）组、LPS+ZnPP（锌原卟啉，HO-1特异性阻断剂）组。各组给药后2 h、6 h、12 h行支气管肺泡灌洗、检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中中性粒细胞（PMN）数目；进行肺组织的形态学观察；测定肺组织中丙二醛（MDA）含量和HO-1蛋白活性；应用RT-PCR和Western blotting技术检测给药后6h肺组织中HO-1 mRNA和蛋白的表达情况。结果: LPS组肺组织出现损伤性变化，同时BALF中PMN数目、肺组织中MDA含量、HO-1蛋白活性、HO-1 mRNA和蛋白的表达均高于相应对照组（均P<0.05）；CCK-8+LPS和LPS+Hm组肺组织损伤程度、BALF中PMN数目和肺组织中MDA含量低于相应LPS组，而肺组织中HO-1蛋白活性、HO-1 mRNA和蛋白的表达均高于相应LPS组（均P<0.05）；LPS+ZnPP组肺组织损伤程度、BALF中PMN数目和肺组织中MDA含量分别高于相应LPS组，而肺组织中HO-1蛋白活性、HO-1 mRNA和蛋白的表达分别低于相应LPS组（均P<0.05）。结论: CCK-8可部分通过HO-1介导的抗氧化、抑制PMN聚集等效应来发挥减轻LPS所致的肺损伤作用。     

The self antigen heme evades immune recognition by sequestration in some hemoproteins

Heme is a non-protein autoantigen which is ubiquitous in vivo, primarily complexed in various hemoproteins or bound to specialized carrier molecules. Nevertheless, heme is able to stimulate a high frequency of CD4⁺, class II-restricted T cells, freshly explanted from unprimed mice, to proliferate in vitro. In this study, we show that heme incorporated into various species of mammalian cytochrome c (cyt c), including murine cyt c, represents a facultative cryptic determinant, able to be recalled only at high doses of native cyt c. By contrast, avian cyt c is of comparable antigenicity to free heme. Artificially denatured carboxymethylated (CM) mammalian cyt c exhibited greatly increased antigenicity, comparable to that of heme and avian cyt c, indicating that the crypticity of heme in native mammalian cyt c is due to the resistance of the native conformation of this molecule to antigen processing within murine antigen-presenting cells. Thus, tolerance to the heme group of at least some hemoproteins, may be maintained by the crypticity of the heme, rather than by deletion of hemereactive T cells. Given the high frequency of heme-reactive T cells in unprimed mice, these findings suggest that heme may become an important modulator during an inflammatory response.     

CO对局灶性缺血脑组织血脑屏障通透性的影响

目的:研究一氧化碳及其限速酶(血红素氧合酶-1)对局灶性缺血脑组织血脑屏障通透性的影响。方法:将SD大鼠随机分为3组(n=6),使用血红素氧合酶诱导剂及抑制剂腹腔注射,用等量生理盐水腹腔注射作为对照组,12h后复制MCAO模型。梗塞后24h后检测血液中一氧化碳浓度、血脑屏障通透性。结果:诱导剂组一氧化碳浓度明显高于对照组(P＜0.01),血脑屏障通透性明显低于对照组(P＜0.05),而抑制剂组一氧化碳浓度明显低于对照组(P＜0.01),血脑屏障通透性明显高于对照组(P＜0.05)。血红素氧合酶诱导剂、抑制剂对非梗塞侧的血脑屏障通透性没有影响(P＞0.05)。结论:一氧化碳作为一种信使分子,脑缺血时浓度升高具有保护血脑屏障的作用。     

银杏叶提取物诱导大鼠主动脉平滑肌细胞HO-1的表达及细胞信号通路研究

目的： 旨在研究银杏叶提取物（Ginkgo Biloba Extract,EGB761）对大鼠主动脉平滑肌细胞(RVSMC)血红素氧合酶-1（HO-1）蛋白的影响,并探讨其中涉及的细胞信号通路。方法: 大鼠主动脉平滑肌细胞株复苏、传代培养到第6代，再复孔培养用于实验，分别给予空白对照、单纯EGB761、EGB761＋锌原卟啉Ⅸ(ZnPPⅨ)或不同的细胞内信号途径特异性阻断剂进行处理，采用Western blotting法定量检测HO-1蛋白表达。结果: EGB761能呈剂量依赖性诱导HO-1蛋白表达，加用ZnPPⅨ（血红素氧合酶特异性阻断剂）及酪氨酸蛋白激酶(TPK)阻断剂木黄酮均能显著抑制EGB761诱导的HO-1蛋白表达（均P<0.01），但calphostin-C（蛋白激酶C阻断剂）、LY294002（磷脂酰肌醇-3激酶阻断剂）及Bay11-7082（核因子-κB阻断剂）对EGB761诱导的HO-1蛋白表达无明显影响（均P>0.05）。结论: (1) EGB761能显著诱导RVSMC中HO-1蛋白的表达，并且这种诱导作用能被血红素氧合酶的特异性阻断剂ZnPPⅨ所阻断。（2）EGB761通过TPK途径介导大鼠主动脉平滑肌细胞HO-1蛋白的表达。     

HO-1/CO径路在肺缺血-再灌注损伤中的作用

目的：探讨血红素氧合酶-1（HO-1）/一氧化碳（CO）径路在肺缺血-再灌注损伤中的作用。 方法： 采用在体兔单肺原位缺血-再灌注模型。实验兔40只，随机均分为假手术对照（C）组、肺缺血-再灌注（I-R）组、肺缺血-再灌注加氯铁血红素(H)组和肺缺血-再灌注加锌原卟啉(Z)组。分别在缺血前、缺血后、再灌注1 h、2 h、3 h抽血，检测一氧化碳血红蛋白(COHb)浓度。实验结束时取肺组织检测湿干重比（W/D）、肺泡损伤率（IAR），观察肺组织超微结构的改变、HO-1的活力、表达部位及强度。 结果： 血浆COHb浓度，I-R组、H组明显高于C组，以H组为著（P<0.01）；H组、Z组显著高于、低于I-R组（P<0.01）。肺组织HO-1活力H组最高，其次是I-R组，Z组和C组最低（P<0.05和P<0.01）。I-R组、H组、Z组HO-1在肺血管内皮、部分血管平滑肌、外膜层及部分气道上皮均有阳性表达，明显高于C组，尤以H组最为明显（P<0.01）。W/D、IAR值，I-R组和Z组均明显高于C组，尤以Z组为著，H组虽较C组为高，但显著低于IR组和Z组（P<0.05和P<0.01）。肺组织形态学异常改变，以Z组为著，H组较轻。 结论： HO-1/CO径路对缺血-再灌注肺发挥积极的保护作用。     

脓毒血症大鼠肝脏血红素加氧酶的变化及作用

目的 :探讨脓毒血症时肝脏血红素加氧酶 (HO)的变化及作用。方法 :盲肠结扎穿孔法复制大鼠腹膜炎脓毒血症模型 ,术后 9h和 18h测心功能指标及血压 ,取肝脏测 HO活性和 MDA含量 ,NorthernBlot测 HO- 1m RNA表达。腹腔注射锌原卟啉 IX(Zn PPIX)抑制 HO活性。结果 :9h组心功能指标及血压无明显变化 ,MDA含量增加 4 9.2 % (P<0 .0 5 ) ;18h组血压下降、心功能降低 ,MDA含量升高14 1.6% (P<0 .0 1)。 9h组与 18h组 HO- 1m RNA表达分别比对照组增加 78.2 %与 83.1% ,HO活性分别比对照组升高 112 .5 % (P<0 .0 1)与 12 0 .6% (P<0 .0 1) ;应用 Zn PPIX后 ,9h组与 18h组 HO活性比未用抑制剂时分别降低 5 2 .4 % (P<0 .0 1)与 5 1.0 (P<0 .0 1) ,MDA含量分别比未用抑制剂组增高4 8.5 %与 5 6.7% ;结论 :脓毒血症时肝脏 HO- 1m RNA表达增加、HO活性增强 ,在此病理过程中 HO具有抗氧化损伤作用