卡氏肺孢子虫特异性DNA探针的制备及其实验应用

目的制备特异、敏感的卡氏肺孢子虫(Pc)DNA探针,用于检测卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)患者临床标本中的PcDNA。方法PCR扩增获得Pc的线粒体核糖体RNA大亚基基因,以其为模板,采用随机引物法制备半抗原地高辛标记的探针。检测探针的敏感性和特异性后,用斑点杂交法检测实验大鼠肺组织和PCP患者临床标本中的PcDNA。结果敏感性检测显示该探针可检出2pg水平的PcDNA,特异性检测显示该探针仅与PcDNA杂交,而不与伯氏疟原虫、恶性疟原虫、弓形虫、人白细胞及正常大鼠肺组织DNA反应。斑点杂交检测PCP大鼠肺组织中的PcDNA,检出率为73.7%,低于PCR结合斑点杂交的检出率94.7%。用该探针从1例肾移植术并发PCP患者的支气管肺泡灌洗液中检测到PcDNA。结论制备的PcDNA探针具有敏感性高、特异性好、无放射性污染等优点,对PcDNA有良好的检测效果。     

应用Digoxigenin标记探针定量检测血清HBV DNA

本文报道采用非同位素Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记探针定量检测血清ＨＢＶ ＤＮＡ。显色膜经空气干燥，液体石蜡透明处理后，即可置酶联免疫检测仪上测定各斑点的光密度值，液长６３０ｎｍ。结果发现已各含量的ＨＢＶ ＤＮＡ在２－５００ｐｇ／样点范围内与其相应的ＯＤ值有着良好的线性关系。标本测得ＯＤ值后，便可知其含量，该法重复性试验试验结果良好，１１份ＨＢＶ ＤＮＡ阳性的血清经定量测定，其ＨＢＶ ＤＮＡ含量在２０     

半抗原Digoxigenin标记HBV DNA探针的制备及临床应用

本文采用一种新的非同位素标记物Digoxigemin通过随机寡核苷酸引物法(RHP)制成Digoxigenin-HBV DNA探针,用于斑点杂交法检测血清标本中的HBV DNA,经敏感性试验证明该探针检测HBV DNA的灵敏度与~(32)P探针相近,而比生物素探针灵敏度高出近100倍,经与~(32)P-HBV DNA探针同时对126份临床标本进行检测比较,结果符合率达95.24％、对HBeAg阳性血清HBV DNA检出率高达86.49％,而抗HBeAg阳性血清HBV DNA检出率仅为10.20％。经过试验观察还证明,此探针检测HBV DNA的特异性高,重复性好,背景显色也较低。由于此探针既有~(32)P探针的高灵敏性,又具有生物素探针易保存、无放射性损伤等优点,因而具有较高的应用价值。