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1.
文章通过对不同无性系杜仲叶中含胶细胞密度的测量,对其生长动态作了分析研究,结论如下:不同无性系含胶细胞的密度在七月中旬达到最大;在同一引种地的雌雄株之间,雄株含胶细胞的密度不完全小于雌株。 相似文献
2.
目的构建大鼠维生素D受体(VDR)蛋白表达载体,测定并分析遗传性高钙尿性结石(GHS)大鼠VDRcDNA序列。方法采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)方法扩增含VDR蛋白编码基因序列,将扩增产物克隆至真核表达载体pcDNA3.1/Zero(+),对5只GHS大鼠和4只正常尿钙对照(NC)大鼠十二指肠VDRcDNA序列进行测序分析。结果琼脂糖凝胶电泳示PCR扩增产物碱基数目与目的片段大小一致。对重组质粒的分析表明,插入片段的序列与发表的VDR基因编码序列相同。5只GHS鼠和4只NC鼠肠VDR cDNA序列均有3个相同的位点不同于已公布的大鼠肠VDR cDNA序列:在256bp位点:C取代G;569bp位点:G代替A;1658位点:A替代G。另外,GHS鼠在1795bp位点发生改变,G取代A,而NC鼠则无改变。结论大鼠维生素D受体蛋白编码序列被成功地克隆至表达载pcDNA3.1/Zero(+)上。GHS大鼠基因编码区的序列组成同NC大鼠相一致,但GHS鼠1795bp位点的碱基改变未见于NC鼠。 相似文献
3.
目的:在大肠杆菌中表达人B组轮状病毒WH-2株VP7蛋白并制备其兔抗血清。方法:根据B组轮状病毒(GBRV)WH-2株vp7基因的全序列设计引物,用PCR的方法扩增得到vp7基因的编码区。将其克隆到原核GST融合表达载体pGEX-KG内,转化大肠杆菌E.coliDH5α,IPTG诱导表达人B组轮状病毒WH-2株VP7蛋白,经SDS-PAGE分离纯化表达的蛋白免疫新西兰兔,制备人B组轮状病毒WH-2株VP7蛋白抗血清。结果:经鉴定确认,vp7基因以正确的方式插入到载体中,此重组表达载体经IPTG诱导后,可表达相对分子量为53.4 kDa的GST-VP7融合蛋白。制备的抗血清经同样诱导表达的表达载体pGEX-KG表达产物吸收后1:500倍稀释后用Western Blot分析,与53.4 kDa的GST-VP7融合蛋白获得特异性显色信号。结论:人B组轮状病毒WH-2株VP7蛋白成功在大肠杆菌中GST融合表达,所表达的蛋白和制备的抗体不但为研究结构与功能提供了物质基础,也为GBRV所引起的疾病预防、诊断和治疗等流行病学研究和临床诊断奠定了基础,具有重要实际应用价值。 相似文献
4.
以军团菌DNA为模板,PCR扩增获得军团菌主要外膜蛋白基因(Major outer membrane protein gene,ompS),与原核表达质粒pUC18定向重组,构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21,并用限制性酶酶切分析、聚合酶链式反应、核酸序列分析、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、Western印迹进行鉴定。实验结果表明我们扩增出了军团菌914bp的ompS基因,成功构建了重组质粒pLPompS,并在原核系统中得到了表达。 相似文献
5.
酵母双杂合系统AD端阴离子交换蛋白C-末端表达质粒的构建 总被引:2,自引:0,他引:2
利用PCR方法,从阴离子交换蛋白1(AE1)全长cDNA中扩增出约350bp c末端cDNA片段,测序后将其克隆至pGADT7载体上,用醋酸锂法构建好的pADT7-AE1-c末端转染酵母菌HA109,观察其在选择性培养基上的表达情况。结果表明,获得了530bp AE1c-末端cDNA,pGADT7-AE1-c末端对酵母无毒性,不能激活检测基因,可作为酵母双杂合系统中的靶基因。 相似文献
6.
目的利用基因工程技术制备铜绿假单胞菌外毒素A(PE),为深入研究PE的致病机理和免疫防治奠定基础。方法应用PCR技术从铜绿假单胞菌基因组中扩增外毒素A全长结构基因,将其克降于原核表达载体pQE-31中,所构建的重组质粒经测序鉴定后转化大肠埃希菌JM109, IPTG诱导表达;制备融合蛋白包涵体,并采用Ni-NTA柱亲和层析、葡聚糖凝胶过滤和阴离子交换层析分离和纯化目的蛋白;采用透析法对纯化后的目的蛋白进行复性,MTT法测定复性后的重组PE对L929细胞、B16黑素瘤细胞的细胞毒活性。结果通过对PCR反应体系的优化,扩增到了PE全长结构基因。所构建的pQE-PE重组质粒经酶切及测序鉴定与设计序列一致;转化E.coli JM109后,IPTG诱导目的蛋白表达率约为25%;SDS-PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(M_r)约为66×10~3,与理论预期值一致;破菌后电泳证实目的蛋白主要以包涵体形式表达。经亲和层析、葡聚糖凝胶过滤和阴离子交换层析后蛋白纯度大于95%。MTT法测得重组PE对L929细胞和B16黑素瘤细胞的半数抑制浓度(IC_(50)值)分别为2.13μg/ml、2.58μg/ml。结论通过对PE的表达纯化,获得了具有细胞毒活性的重组PE,为利用基因工程手段大量制备PE的工作奠定了基础。 相似文献
7.
人白细胞介素18(hIL—18)的cDNA基因克隆及序列测定 总被引:6,自引:1,他引:5
目的:克隆人白细胞介素18(IL-18)全长cDNA基因,进一步探讨人白细胞介素18的功效。方法:采用RT-PCR的方法从人肝组织中扩增出人白细胞介素18(IL-18)基因,并克隆到真核表达的绿色荧光蛋白报告载体pEGFP-NI中,结果:经PCR及DNA序列测定得以证实其序列与文献报导一致,结论:该实验成功地克隆了IL-18cDNA,并将其重组构建了含有IL-18cDNA的真核表达载体pEGFP-N1-IL18。 相似文献
8.
目的克隆并体外表达HPV58E6,为E6致癌作用和疫苗的研究奠定基础.方法通过PCR方法从HPV58全基因克隆中扩增出HPV58E6基因片段,利用基因重组技术,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3的T7启动子下游,体外转录成mRNA后,在源自网织红细胞的翻译缓冲液中表达生物素标记的HPV58E6蛋白,化学发光法检测,X光胶片曝光显影鉴定.结果酶切电泳证实质粒构建正确,SDS-PAGE电泳显示在相当于HPV58E6分子量约18.8kD的位置出现条带,X光胶片亦在相应位置出现印迹条带.结论成功表达了含有生物素标记的HPV58E6蛋白,为其致癌作用和治疗的研究奠定基础. 相似文献
9.
Heymann肾炎是一种用于人类膜性肾病的自身免疫病模型。gp330糖蛋白和44kD受体相关蛋白(RAP组成Heymann肾炎抗原复合物(HNAC),被证明是HN的主要致病原。本研究中,我们用RT-PCR技术,克隆了RAP基因,用Nested-PCR技术克隆了RAP羧基端118个氨基酸的基因,DNA序列分析克隆基因与RAP相同,原位杂交发现RAPmRNA在肾小球上皮细胞表达。 相似文献
10.
用限制性内切酶PstⅠ消化人型结核杆菌H37RvDNA,与质粒pUC19 DNA连接后转化大肠杆菌,经同位素32P标记的人型结核杆菌H37Rv全染色体DNA探针筛选出6个阳性克隆(MT1 ̄6),其中克隆DNA片段MT2(4.2Kb)、MT4(3.5Kb)和MT5(3.0Kb)标记成探针,检测了22种分支杆菌标准株和15侏人型结核杆菌临床分离侏以及2种非分支杆菌,其杂交结果完全相同,与人型结核杆菌及 相似文献