siRNA干扰跨膜转运蛋白21的表达对KO小鼠胚胎成纤维细胞γ分泌酶活性的影响

目的探讨跨膜转运蛋白21（TMP21）对γ分泌酶活性的影响。 方法将淀粉样前体蛋白基因缺陷型KO小鼠胚胎成纤维细胞[MEF（KO）]分为转染组（T）和对照组（C），转染组转染载有TMP21小分子干扰RNA（siRNA）的质粒，对照组转染空质粒。每组均制备包含细胞全膜蛋白的样品（T1、C1），经CHAPSO进一步溶解后超速离心制备所得纯化全膜蛋白样品（T2、C2），用γ分泌酶组分早老蛋白1（PS-1）特异性抗体免疫沉降C2或T2后获得的γ分泌酶样品（IPT2、IPC2）。蛋白质印迹法检测各类样品中γ分泌酶重要组分TMP21、PS-1和Nicastrin（NCT）蛋白表达量；应用ELISA法检测β淀粉样肽40和β＆#61472;淀粉样肽42的生成总量。 结果蛋白质印迹法检测显示，TMP21蛋白表达量在转染组样品IPT2中为（5294±247）ng/ml，在对照组样品IPC2中为（19110±579）ng/ml，组间差异有统计学意义（P〈0.05）；各类样品中PS-1与NCT蛋白表达量无明显变化；TMP21可与PS-1共沉降。ELISA法检测显示，转染组样品IPT2与饱和浓度底物C99反应生成的β淀粉样肽40和β淀粉样肽42总量为（348±18）pg/ml，对照组样品IPC2为与饱和浓度底物C99反应生成的β淀粉样肽40和β淀粉样肽42总量为（342±18）pg/ml，组间差异有统计学意义（P〈0.01）。 结论TMP21可能为γ分泌酶的组分之一。在TMP21蛋白低表达状态下γ分泌酶活性升高，提示TMP21为γ分泌酶的负调控因子之一。     

逆向斑点杂交检测乙型肝炎病毒基因型及YMDD变异

目的 应用逆向斑点杂交技术检测乙型肝炎病毒（HBV）基因型及YMDD变异。方法 合成有生物素标记的引物，PCR扩增两种DNA片段，与尼龙膜上的探针同时杂交，BCIP／NBT显色。结果 检测21例拉米夫啶治疗中的慢性乙型肝炎患者，11例HBV为基因型B，10例为基因型C；YMDD基序有47．6％（10／21）为YMDD，28．6％（6／21）为YVDD，23．8％（5／21）为YIDD。结论 在同一张尼龙膜上检测HBV基因型及YMDD变异，经济实惠、准确快捷，且易于开展。     

不同转移潜能人肝癌细胞系酪氨酸磷酸化蛋白质差异分析

目的研究不同转移潜能人肝癌细胞系中酪氨酸磷酸化蛋白质表达的差异并筛查与肝癌转移相关的酪氨酸磷酸化蛋白质分子。方法应用双电泳(2-D E)、免疫印迹法及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析,对三种不同转移潜能人肝癌细胞系Hep 3B、MHCC97L和MHCC97H进行酪氨酸磷酸化蛋白质组分析。结果对照2-DE胶和免疫印迹发光胶片,Hep3B检测到10个点,MHCC 9 7L检测到19个点, MHCC97H检测到17个点。经质谱鉴定,得到膜连蛋白Ⅰ等19个差异点。结论细胞内酪氨酸磷酸化蛋白的表达差异与肝癌的侵袭转移有关。     

急性冠状动脉综合征患者血清基质金属蛋白酶2水平的检测

目的检测急性冠状动脉综合征患者血清基质金属蛋白酶2的水平,探讨其与不稳定性斑块及临床危险度的内在联系。方法应用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western免疫印迹法分别检测急性冠状动脉综合症患者血清基质金属蛋白酶2的水平。其中不稳定型心绞痛组28例,分属低、中、高危3个亚组,急性心肌梗死组50例,正常对照组50例,稳定型心绞痛组51例。结果对照组、稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组和急性心肌梗死组基质金属蛋白酶2水平分别为236±33 INT.mm2、224±23 INT.mm2、455±51 INT.mm2和503±45 INT.mm2。急性心肌梗死组和不稳定型心绞痛组分别与稳定型心绞痛组和对照组之间比较,基质金属蛋白酶2水平差异有显著性,对照组与稳定型心绞痛组之间基质金属蛋白酶2水平无统计学差异。4组之间血清基质金属蛋白酶原水平无明显差别。Western免疫印迹法也显示了类似的结果。不稳定型心绞痛低危、中危、高危3个亚组间比较,无论是酶原还是活性酶的水平均未发现显著差别。结论血清基质金属蛋白酶2水平在急性冠状动脉综合征患者中明显升高,提示血清基质金属蛋白酶2增高可作为急性冠状动脉综合症的一个危险信号,但基质金属蛋白酶2与急性冠状动脉综合症危险度并无相关性。     

Nucleostemin在结直肠癌和正常结直肠组织中的表达及其意义

背景：Nucleosterain（NS）是一个与细胞增殖相关的核蛋白,部分研究显示其仅高表达于干细胞和肿瘤细胞,成体组织分化细胞中未见NS表达。目的：探讨NS在结直肠癌和正常结直肠组织中的表达及其意义。方法：收集38例结直肠癌患者的癌组织及其相应癌旁正常组织标本．以实时RT—PCR和蛋白质印迹法检测NSmRNA和蛋白表达。结果：实时PCR扩增曲线显示结直肠癌组织和正常结直肠组织均有NS基因指数式扩增,癌组织NSmRNA表达量显著高于正常组织（1．8939±0．9529对1．P=0．011）。蛋白质印迹法证实NS蛋白在正常组织中表达较微弱或几乎无表达,癌组织中其表达显著增高（1．5397±0．3625对0．6336±0．3443,P=0．001）。结论：结直肠癌组织和正常结直肠组织中均存在NS基因．推测其微量表达可调节细胞正常增殖．而异常高表达则可通过某些机制促进细胞恶性增殖。     

癌基因双微体-2在多发性骨髓瘤中的表达及其临床意义

目的探讨癌基因双微体．2（MDM2）在多发性骨髓瘤（MM）中的表达及其临床意义。方法选取2008年7月至2010年6月温州市第二人民医院血液内科MM患者37例,另选5例巨球蛋白血症患者作为疾病对照组,5名骨髓捐献志愿者为健康对照组。应用逆转录聚合酶链式扩增反应和免疫印迹法分别检测各组MDM2mRNA及其蛋白变化。MM患者按国际分期系统将其分为I期11例,Ⅱ期18例,Ⅲ期20例,应用回归分析法观察MDM2mRNA及其蛋白表达与各分期的相关性。结果MDM2mRNA及其蛋白在健康对照组表达水平均很低,在疾病对照组表达水平稍高,在MM组则明显表现为过表达∽均〈0．05）。另外,MDM2mRNA及其蛋白表达与MM分期呈正相关（r值分别为0．782、0．821）。结论MDM2基因在MM患者中呈高水平表达,且与MM的临床分期有密切关系,临床上或可作为判断其预后和检测肿瘤微小残留的一个指标     

机械应力下成骨细胞外信号调节激酶ERK1/2的早期变化

目的:观察体外培养的成骨样细胞在不同机械应力下细胞外信号调节激酶ERK1/2的表达变化.方法:采用四点弯曲细胞力学加载装置系统,对人成骨样细胞进行加力:频率0.5 Hz,加力板变形量4000μstrain,按5,15,30 min和1h不同时间段,使细胞发生单轴牵张和压缩应变.运用Western Blot检测不同方向、不同作用时间的应力应变下细胞外信号调节激酶ERK1/2所产生的变化.结果:在4000μstrain的周期性应力作用时,细胞外信号调节激酶ERK1/2在5 min内被迅速激活,磷酸化程度大幅升高,牵张及压缩应力均有类似表现;1 h左右恢复至基态水平.牵张应力所引发的ERK磷酸化较压缩应力更强,其差异有统计学意义(P＜0.05).结论:较大的应力应变可以在早期激活成骨细胞内的MAPK/ERK信号转导通路,牵张应力所产生的效应较压缩应力更为明显,机械应力参与了细胞外信号调节激酶的活化.     

p38丝裂原活化蛋白激酶在大鼠视网膜缺血再灌注损伤后的磷酸化及其意义

目的:观探讨大鼠视网膜缺血再灌注损伤后p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)的磷酸化及其意义.方法:采用升高眼内压的方法,制作实验性视网膜缺血再灌注大鼠模型.将30只Wistar大鼠随机分为正常组(n=6)和缺血再灌注组(n=24),其中缺血再灌注组又分为再灌注后2,12,24,72 h等4个时间段(每时间段6只).应用Western Blot法检测视网膜组织中p38 MAPK及磷酸化p38 MAPK (p-p38 MAPK)蛋白的表达变化.结果:p38 MAPK在缺血再灌注组各时间点的视网膜组织内的表达保持相对恒定,与正常对照组相比无统计学上的变化(P＞0.05).p-p38 MAPK的表达水平在缺血再灌注组12 h时即有明显升高,24 h时达到高峰,72 h时仍维持较高的表达水平,与正常对照组相比有统计学著差异(P＜0.01).结论:p38 MAPK信号通路的激活可能与缺血再灌注所造成的视网膜损伤有密切关系.     

Northern印迹法检测喉鳞状细胞癌中表皮生长因子受体mRNA的表达

目的 :探讨喉部鳞状细胞癌的发病机制。方法 :采用Northern印迹法检测喉部鳞状细胞癌中表皮生长因子受体mRNA的表达。结果 :在喉部鳞状细胞癌中可见 5 80 0mRNA异常表达。结论 :喉部鳞状细胞癌的生物学行为与其 5 80 0mRNA介导异常表达密切相关。     

北京地区人群中人Boca病毒血清抗体的分析

目的 通过对血清中人Boca病毒(HBoV)主要衣壳蛋白VP2特异性IgG抗体进行检测,初步了解北京地区人群中这种新发现的病毒的感染状况.方法 以大肠杆菌表达的HBoV主要衣壳蛋白VP2为抗原,应用Western-blot方法,对1996年4月至1997年3月取自首都儿科研究所附属儿童医院健康查体者及北京宣武医院非呼吸道感染患者的血清标本共677份进行HBoV VP2蛋白特异性IgG抗体检测.设抗组氨酸抗体及兔抗HBoV-VP2多肽特异性免疫血清为阳性血清对照.结果 (1)677份血清标本中,抗HBoV VP2蛋白的IgG抗体阳性400份,总检出率为59.1%.(2)被检对象中,＜1个月的婴儿抗体阳性率为45.3%,1个月～的婴儿抗体阳性率为41.4%,2个月～的婴儿抗体阳性率最低(31.3%),6个月～至7岁龄抗体阳性检出率在45.6%～69.7%,7岁后直至40岁,抗体阳性检出率维持在70%左右;50岁后则为61.8%～62.8%.结论 早在1996年北京地区的人群中就有59.1%曾经感染过HBoV,说明这种病毒是一种新发现的病毒而不是新出现的病毒,北京地区人群中该病毒的感染较常见.6个月龄以前的婴儿为易感人群.