胰腺癌PANC1细胞microRNA-217靶基因ANLN的鉴定

目的 通过实验验证ANLN为microRNA-217(miR-217)的靶基因.方法 使用生物学软件预测miR-217调控的靶基因可能为ANLN.设计并合成mR-217结合的ANLN及突变型ANLN(mutANLN)序列,将其PCR扩增的片段插入表达质粒psiCHECK-2,构建重组质粒psiCHECK-2-ANLN及psiCHECK-2-mutANLN.采用脂质体法将2个重组质粒单独或分别与miR-217、miR-217 inhibitor及与人同源性远的miRNA序列(NC)、NC inhibitor共转染胰腺癌PANC1细胞,采用双荧光素酶报告系统检测荧光素酶活性,采用蛋白质印迹法检测ANLN蛋白的表达.结果 转染psiCHECK-2-ANLN、psiCHECK-2-ANLN+miR-217、psiCHECK-2-ANLN+miR-217 inhibitor、psiCHECK-2-ANLN+NC、psiCHECK-2-ANLN+ NC inhibitor各组间的荧光素酶活性分别为2.221±0.188、0.769±0.061、3.764±0.371、2.265±0.201、2.242 ±0.018,差异有统计学意义(F =77.405,P＜0.01),但psiCHECK-2-ANLN组、psiCHECK-2-ANLN+ NC组及psiCHECK-2-ANLN+ NC inhibitor组两两比较差异无统计学意义,而psiCHECK-2-ANLN+ miR-217组的荧光素酶活性较这3组明显下降,psiCHECK-2-ANLN+miR-217inhibitor组活性较其他4组明显升高(P值均＜0.01).转染psiCHECK-2-mutANLN各组间荧光素酶活性差异无统计学意义(P=0.053).psiCHECK-2-ANLN+ miR-217共转染组PANC1细胞的ANLN蛋白表达水平较单纯转染psiCHECK4-ANLN组细胞的ANLN蛋白表达明显下调.结论 在胰腺癌中,ANLN可能是miR-217的直接靶基因.     

沉默ANLN基因对胃癌细胞侵袭、迁移、增殖和凋亡的影响

目的 探讨肌动蛋白结合蛋白ANLN在体外对胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法 RT-PCR和Western blot检测胃癌细胞株、胃黏膜细胞株中ANLN的表达情况和验证siRNA对ANLN基因的敲减情况。划痕实验和Transwell检测沉默ANLN基因表达对胃癌细胞迁移、侵袭能力的影响。CCK-8实验、细胞荧光染色和流式细胞术检测沉默ANLN基因表达对胃癌细胞增殖和凋亡的变化。结果 胃癌细胞株SGC-7901/MGC-803中的ANLN的mRNA和蛋白表达显著高于正常胃黏膜细胞株GES-1（P<0.001）。siRNA干扰后RT-PCR和Western blot结果证明转染成功,转染组的mRNA和蛋白表达量与对照组差异有统计学意义（P<0.05）。下调ANLN能够显著降低胃癌细胞的迁移、侵袭、增殖和凋亡能力。结论 下调ANLN的表达可以显著降低胃癌细胞侵袭、迁移、增殖和凋亡能力。     

ANLN缺失后Hela细胞的力学特性与骨架蛋白变化分析

文题释义： Anillin蛋白(ANLN)：最早是以F-actin的绑定蛋白被发现的，后经研究表明其与细胞骨架的肌动蛋白纤维和肌球蛋白等主要组分相互作用，是一种高度保守的脚手架蛋白，在胞质分裂中稳定收缩环。在细胞分裂间期中维持正常的细胞-细胞连接和细胞形态。 原子力显微镜：利用探针与测量样本之间的各种相互作用力，再通过激光束反射放大微悬臂形变的信号，能够以极高分辨率(纳米级)检测样本表面并成像，同时可对样本进行力学性能测试，获得样本表面特定点的力-距离曲线，再通过对曲线分析获得精确的力学特性，是近期运用最为广泛的工具之一。 背景：目前关于ANLN蛋白在细胞分裂间期调节细胞形态、细胞-细胞间接完整性以及胞质分裂中稳定收缩环的作用已经明确，但其对细胞力学性能和骨架蛋白的影响还鲜有报道。 目的：探讨ANLN缺失对分裂间期细胞力学特性与骨架蛋白的影响。 方法：通过原子力显微镜分别测量正常Hela细胞与siRNA敲降ANLN的Hela细胞的表面弹性模量和破膜力；采用激光共聚焦显微镜观察正常Hela细胞与siRNA敲降ANLN的Hela细胞的肌球蛋白ⅡA以及肌动蛋白纤维分布特征。 结果与结论：①敲降ANLN的Hela细胞的表面弹性模量明显高于未经处理的正常Hela细胞，与敲降ANLN的细胞相比，正常细胞的表面弹性模量更倾向于极性分布(两极间逐步降低)，但两组细胞长轴边缘区域的破膜力并没有明显差别；②ANLN敲降组细胞在边缘位置有较低的肌球蛋白ⅡA分布；③ANLN敲降组近底层细胞-细胞连接区域的肌动蛋白纤维趋向更散乱，并且细胞内纤维束沿长轴排列不明显，中层有细胞间隙变大的倾向；④结果说明，敲降ANLN对细胞的边缘区域影响最大，ANLN的缺失会导致细胞边缘区域更频繁的重构，细胞需要聚集更多的骨架蛋白及其结合蛋白来稳定细胞状态，导致了更高的表面弹性模量。 ORCID: 0000-0002-3501-4467(徐丽萌) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程     

Actin‐binding protein Anillin promotes the progression of gastric cancer in vitro and in mice

BackgroundTo detect the expression levels of actin‐binding protein anillin (ANLN) in human gastric cancer (GC) tissues and explore the possible involvement of ANLN in GC cell proliferation, migration, and invasion.MethodsThe bioinformation analysis was performed in TCGA database to explore the expression of ANLN in human GC tissues and the difference of ANLN expression between multiple types of cancers. IHC assays and clinical pathological analysis were performed to confirm ANLN expression and its correlation with clinical features of GC patients. Colony formation, CCK‐8, wound closure, and transwell assays were performed to detect its effects on GC cell proliferation, migration, and invasion in vitro. Tumor growth was also measured using a xenograft animal model.ResultsWe found the high expression of ANLN in human GC tissues based on the results from TCGA database and IHC staining. We further noticed ANLN depletion resulted in the inhibition of GC cell proliferation, migration, and invasion. Our data further confirmed that ANLN contributed to tumor growth of GC cells in vivo.ConclusionsWe confirmed the involvement of ANLN in GC progression and thought ANLN could serve as a promising therapeutic target for GC.     

ANLN对肝内胆管癌增殖的影响和机制

摘要：目的：探讨ANLN基因在肝内胆管癌细胞增殖中的作用及其可能的机制。方法：收集手术切除的 40例肝内胆管癌患者的新鲜组织及癌旁组织, 采用 RT-PCR、 Western blot以及免疫组化的方法检测组织中 ANLN mRNA水平和蛋白表达水平, 比较ANLN在肝内胆管癌组织与癌旁组织中的表达差异, 分析其与肿瘤分期及肿瘤大小的关系。行CCK8、平板克隆以及细胞周期检测ANLN对胆管癌细胞体外增殖能力的影响。行String软件预测ANLN与TPX2相关,行RT-PCR、 Western blot 方法检测相应蛋白表达差异以及两者间的相关性。结果：Western Blot 和RT-PCR显示 ANLN在肝内胆管癌组织中高表达。临床数据分析显示ANLN的表达与肝内胆管癌患者的肿瘤大小及TNM分期密切相关,并且ANLN表达高的患者的预后较差。利用小干扰RNA（siRNA）下调 ANLN能有效抑制胆管癌细胞的增殖能力。Western Blot实验证明下调ANLN导致周期蛋白 Cyclin D1,CyclinA表达明显减少。行String预测ANLN与TPX2相关,行western blot和PCR验证相关结果。结论：ANLN可能通过TPX2调节肝内胆管癌细胞的增殖能力,促进肝内胆管癌的肿瘤发展,这可为肝内胆管癌的治疗提供一个新的靶点。     

LncRNA XIST promotes chemoresistance of breast cancer cells to doxorubicin by sponging miR-200c-3p to upregulate ANLN

The resistance of breast cancer cells to drugs is a major obstacle to effective cancer chemotherapy. Here, we study the function mechanisms of long non-coding RNA XIST in chemoresistance of breast cancer to doxorubicin. We examined the 50% inhibitive concentration of doxorubicin to MDA-MB-231 and MDA-MB-231/ADM cells, showing that the doxorubicin resistance of MDA-MB-231/ADM cells was much higher than MDA-MB-231 cells. The gene or protein expression of XIST and ANLN were also higher in MDA-MB-231/ADM cells than that in MDA-MB-231 cells. Moreover, XIST overexpression promoted cell proliferation and inhibited apoptosis of doxorubicin-treated MDA-MB-231 cells by promoting ANLN expression. XIST silencing inhibited cell proliferation and promoted apoptosis of doxorubicin-treated MDA-MB-231/ADM cells by inhibiting ANLN expression. Luciferase reporter assay showed that XIST functioned as a competing endogenous RNA to repress miR-200c-3p, which controlled its downstream target ANLN. In conclusion, these data reveal that XIST promotes chemoresistance of breast cancer cells to doxorubicin by sponging miR-200c-3p to upregulate ANLN. This work explores the relationship between lncRNA XIST and doxorubicin resistance in breast cancer cells and highlights a novel therapeutic target for the treatment of breast cancer.