穿孔素对不同肿瘤细胞的杀伤作用

目的：研究穿孔素对不同肿瘤细胞株的杀伤作用是否一致,以确定肿瘤细胞对穿孔素的杀伤是否有抵抗作用。方法：大量培养LAK细胞,制备含穿孔素毒性颗粒的LAK细胞裂解物,用红细胞裂解试验证实LAK细胞裂解物的杀伤活性,培养穿孔素敏感的K562肿瘤细胞株和穿孔素不敏感的Hela,MGC80-3肿瘤细胞株,用流式细胞计数的方法研究LAK细胞裂解物对3种不同肿瘤细胞的杀伤作用。结果：红细胞裂解试验证实,LAK细胞裂解物具有杀伤活性;抗人穿孔素（Human perforin HP)McAbs可封闭LAK细胞裂解物对不同肿瘤细胞株的细胞毒作用,LAK细胞裂解物对K562细胞的杀伤是通过穿孔素依赖途径的。结论：穿孔素对K562,Hela和MGC80－3肿瘤细胞的杀伤明显不同,说明肿瘤细胞存在对穿孔素的抵抗机制。     

负载自体肿瘤细胞裂解物的DC疫苗联合CIK治疗晚期肾癌的临床观察--附10例报告

背景与目的:肾癌的主要治疗手段是手术,但晚期肾癌术后复发率高,加上肾癌对化疗和放疗不敏感,因此,晚期肾癌预后不佳,需要寻找新的更有效的治疗方法。本研究通过负载自体肿瘤细胞裂解物的树突细胞(dendriticcells,DC)疫苗联合细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-inducedkillercells,CIK)治疗10例晚期肾癌,观察近期的临床疗效,免疫学反应及副作用。方法:分离患者外周血单核细胞,体外经GM-CSF和IL-4诱导产生DC细胞,并负载自体肿瘤细胞裂解物;T淋巴细胞经IFN-γ、IL-2、CD3单抗、IL-1α体外诱导产生CIK细胞。所有患者在切除原发病灶后,接受每周一次的皮内DC疫苗注射治疗,至少8次治疗;CIK细胞过继细胞免疫治疗,每2周一次,至少接受4次治疗。临床疗效和免疫学反应分别通过影象学检查,外周血T淋巴细胞亚群改变和迟发性超敏(delayed-typehypersensitivity,DTH)反应进行评估。结果:(1)4例有可评价病灶的患者中1例部分缓解(PR),2例疾病稳定(SD),1例进展(PD);6例没有可评价病灶的患者中1例PD,1例失访,另外4例未见疾病进展。随访时间6～20个月(中位时间11个月)。(2)与治疗前比较,治疗2个月后患者CD3 、CD4 、CD4 /CD8 、CD56 明显升高(P<0.05)。(3)包括PR患者在内的6例患者DTH反应呈现阳性。(4)除一过性的发热、畏寒外没有其它不良反应出现。结论:负载自体肿瘤细胞裂解物的DC疫苗联合CIK细胞治疗晚期肾癌有一定的近期临床疗效,能诱导出特异的抗肾癌免疫反应,并且有良好的耐受性。     

低HMGB1含量的肿瘤细胞裂解物增强树突状细胞的抗肺癌作用

目的 探讨低含量高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的肿瘤细胞裂解物（TCL）对树突状细胞抗肺癌作用的影响。方法 反复冻融的方法制备Lewis肺癌细胞TCL。Western blot检测TCL中HMGB1蛋白的表达情况。用30 nmol/L甘草酸（GA）抑制Lewis肺癌细胞中HMGB1的表达,进而制备低含量HMGB1的TCL(LH-TCL)。用未处理的Lewis肺癌细胞制备正常含量HMGB1的TCL(NH-TCL)。分为不同剂量NH-TCL负载DC组、LH-TCL负载DC组及PBS对照组,用流式细胞术检测体外诱导的小鼠树突状细胞（DC）表面CD11b、CD11c、CD86表达或细胞凋亡,用酶联免疫吸附试验检测DC细胞IL-12分泌情况。分为NH-TCL刺激DC活化的脾细胞组、LH-TCL刺激DC活化的脾细胞组及PBS对照组,用流式细胞术检测小鼠脾细胞表面CD69的表达情况,酶联免疫吸附试验检测小鼠脾细胞TNF-β的分泌。分为NH-TCL刺激DC活化的脾细胞组、LH-TCL刺激DC活化的脾细胞组及PBS对照组,并设5∶1、10∶1、20∶1三个效靶比进行体外杀伤实验,采用CCK8法检测小鼠...     

脑出血后脑水肿经时变化机制的探讨

目的 研究脑出血(mtracerebral hemorrhage，ICH)后血肿周围脑水肿与血脑屏障(blood-brain barrier，BBB)随时间变化的机制，从而为预防脑水肿提供依据。方法90只大耳白兔随机分为3组。1组：在立体定向仪下将300μl生理盐水注入兔左侧基底节；2组：注入200μl自身动脉血与100μl生理盐水；3组：注入200μl自身动脉血与100μl水蛭素。每组每时相(6h、12h、24h、48h、72h)各6只兔。脑组织含水量采用干湿重法测量，血脑屏障的通透性测定采用伊文思兰法。结果动脉血组及水蛭素干预组血肿周围脑组织含水量均在48h达到高峰．此后逐步降低。动脉血组伊文思兰(EB)于24h到达高峰，水蛭素干预组伊文思兰(EB)于48h达高峰。结论脑出血后脑水肿是多种因素综合作用的结果。早期可能和血块凝缩、流体静力压有关；至中期时凝血酶是主导因素；后期则主要由于红细胞裂解物的损害。     

鲎试剂法检测采血原辅材料细菌内毒素的应用

细菌内毒素是微生物的代谢产物,是引起热原反应的主要物质。鲎试剂为鲎血变形细胞裂解物的冻干精制品,含有能被内毒素激活的凝固系统,在一定的条件下极微量的细菌内毒素即可激活鲎试剂中的C因子,最终形成肉眼可见的凝胶。鲎试剂法检测细菌内毒素以其快速、简便、灵敏度高、重现     

聚四氟乙烯热裂解物对健康的影响

聚四氟乙烯热裂解物成分复杂，职业病危害因素较多，热裂解物浓度高时，可致急性中毒“聚合物烟雾热”。而浓度较低时，它的慢性损害如何，报道尚少。为探讨其联合毒性作用对职工健康的影响，我们对衡水市某塑料制品厂聚四氟乙烯塑制品车间职工进行了调查。     

热原检测的新时代

热原是能引起机体发热的生物源性质，研究最深入的热原是革兰阴性菌细胞壁上的脂多糖（LPS，亦称内毒素），内毒素是普遍存在的致病分子，对制药业和医学界是一种热源，基于鲎变形细胞裂解物（LAL）的内毒素检测方法已在注射制剂和医疗器同控中应用达25年之久，但鉴于该方法本身的缺点及鲎来源有限，亟需一种替代热原检测方法，重组C因子（rFC）开创了热原检测的新时代，其机理是内毒素激活rFC酶原，活化的rFC水解合物的底物，生成可检测的产物（产物的量与内毒互正相关），从而定量内毒素。     

胆管癌肿瘤裂解物修饰和p53基因导入对树突状细胞免疫效应的影响

目的　研究胆管癌裂解物对转染全长野生型p5 3的树突状细胞 (DC)免疫功能的影响。方法　用腺病毒作为介质 ,将全长野生型 p5 3转染入DC ,然后用胆管癌裂解物修饰已转染全长野生型 p5 3的DC(Lywtp5 3DC) ,检测这种DC表面分子B7-1、B7-2、MHC -Ⅰ、MHC -Ⅱ表达的高低 ,诱导特异的细胞毒性T淋巴细胞 (CTLs)的能力 ,对小鼠的免疫保护和对动物模型治疗作用。结果　经流式细胞仪检测胆管癌裂解物刺激的wtp5 3DC表面高表达B7-1( 86.70± 0 .0 7)、B7-2 ( 18.77± 0 .0 8)、MHC -Ⅰ ( 87.2 0± 0 .0 5 )、MHC -Ⅱ ( 5 6.70± 0 .0 7) ,而单纯DC这些分子是低表达的 ;Lywtp5 3DC能够特异性地杀伤胆管癌细胞 ,杀伤率为 81%。Lywtp5 3DC治疗组和其它组在肿瘤生长的直径大小之间有显著差异 (P <0 .0 5 ) ,在Lywtp5 3DC治疗组中 ,肿瘤生长明显减慢。结论　全长野生型 p5 3基因转染 胆管癌裂解物联合修饰的DC能诱导CTLs的特异性 ,显著地提高DC的抗原提呈功能 ,体外能诱导高效而特异的抗胆管癌免疫效应。     

卡介苗热休克蛋白70对肿瘤细胞裂解物免疫原性的影响

的：观察卡介苗热休克蛋白70（BCGHSP70）对肿瘤细胞裂解物（TCL）免疫原性的影响,为TCL相关肿瘤疫苗的制备提供依据。方法：应用冻融法制备B16黑色素瘤细胞裂解物B16TCL,将BCGHSP70与B16TCL在体外混合制备BCGHSP70-B16TCL。将C57BL/6小鼠随机分为BCGHSP70-B16TCL组、PBS组、BCGHSP70组和B16TCL组,分别于第1和14天皮下免疫BCGHSP70-B16TCL、PBS、BCGHSP70和B16TCL。于末次免疫后第7天处死小鼠,MTT法观察不同免疫组小鼠脾淋巴细胞在B16TCL体外刺激后的增殖情况,计算刺激指数（SI）。结果：应用冻融法能够使B16细胞完全裂解,所制备的B16TCL中含有丰富的蛋白成分。与PBS组、BCGHSP70组和B16TCL组比较,BCGHSP70-B16TCL组免疫小鼠脾脏明显增大;BCGHSP70-B16TCL免疫组SI高于PBS免疫组（P=0.00）、 B16TCL免疫组（P=0.01）和BCGHSP70免疫组（P=0.00）。结论：BCGHSP70　能够增强B16TCL的免疫原性,提示BCGHSP70可能作为有效的免疫佐剂用于TCL相关肿瘤疫苗的研究。     

树突细胞和肿瘤免疫的临床实验研究

1971年Bumet提出了免疫监视的概念,认为机体免疫系统能够识别并通过细胞免疫机制破坏肿瘤细胞。大量支持肿瘤免疫监视的证据说明了免疫疗法或疫苗可以有效地治疗肿瘤。用杀死的肿瘤细胞、肿瘤细胞裂解物或肿瘤抗原蛋白、肽或DNA并辅以细胞因子或佐剂制备的疫苗可以产生免疫应答或临床反应。但是这种免疫反应通常比较弱,并且很少能产生彻底和持久的临床反应。