褪黑素和6-羟褪黑素保护神经细胞抗缺血再灌注损伤比较研究

目的研究褪黑素(Mel)和6-羟褪黑素(6-OHMel)神经保护作用及作用机理。方法体外培养N2a细胞,模拟缺血再灌注(OGSD),加入Mel和6-OHMel,检测以下指标:①细胞生存能力:MTT法、乳酸脱氢酶释放;②细胞凋亡分析:DNA片断化,细胞色素C,Caspase3活性;③活性氧(ROS)和线粒体跨膜电位。结果①Mel和6-OHMel都能减轻OGSD诱导的N2a细胞损伤,Mel的作用强于6-OHMel。②Mel和6-OHMel均能抑制细胞色素C释放,但6-OHMel强于Mel。③Mel和6-OHMel都能稳定线粒体跨膜电位,但Mel作用时间比6-OHMel长。④Mel和6-OHMel能清除ROS,6-OHMel表现为直接作用,Mel表现为间接作用。⑤Mel和6-OHMel均能抑制caspase3的活性,但是作用时间不同。6-OHMel表现在OGSD后12h,Mel在OGSD后24h。结论Mel和6-OHMel的神经保护作用与其抗氧化、稳定线粒体功能相关,Mel的作用机制更复杂。     

急性心肌梗死时心律失常与血清镁的含量分析

目的观察急性心肌梗死时心律失常与血清镁离子的关系。方法选择116例急性心肌梗死病人,按心电监护及心电图结果分为心律失常组与心律正常组。根据血清镁含量将其分为血镁正常组与低镁血症组,观察心律失常与血清镁离子的关系,同时给予低镁病人补镁治疗,观察疗效。结果心律失常组比心律正常组的低血镁率显著增高,经补镁治疗的病人预后优于未予补镁者。结论急性心肌梗死时合并低血镁的病人易发生心律失常,且及时予镁制剂治疗有助于改善病人预后。     

人精子体外氧化损伤对线粒体tRNA~(LeuUUR)基因的影响

目的:探讨活性氧(ROS)对人类精子线粒体tRNALeuUUR基因的氧化损伤。方法:采用Percoll梯度离心法筛选具有正常生理功能的精子,作为正常精子模型,并分为损伤组20例和对照组20例,分别加入次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系或不予处理,37℃有氧环境中孵育60min。分别提取精子DNA,以Fpg酶切损伤碱基并采用接头介导PCR(LM-PCR)检测线粒体tRNALeuUUR基因的氧化损伤。采用Rhodamine(Rh123)荧光探针标记精子,通过流式细胞仪检测线粒体膜电位,观察精子的功能。结果:与对照组相比,损伤组精子孵育后线粒体膜电位明显降低[(116.27±11.72)%vs(64.00±4.88)%,P<0.05]。Fpg酶切和LM-PCR显示精子线粒体tRNALeuUUR基因损伤。结论:ROS可能通过对精子线粒体tRNALeuUUR基因氧化损伤而影响精子功能(线粒体膜电位明显降低),从而引起不育。     

人钠/二羧酸协同转运蛋白3基因调控肾小管上皮细胞线粒体膜电位的研究

目的 观察人钠／二羧酸协同转运蛋白3(hNaDC3，)对人肾脏近曲小管上皮细胞(HKC)线粒体膜电位的变化及其对细胞能量代谢的影响。方法 应用亚克隆技术构建正义pcDNA3-hNaDC3和反义pcDNA3-AhNaDC3两个真核表达载体，通过脂质体LipofectAMINE将pcDNA3-hNaDC3及pcDNA3-AhNaDC3转染至HKC细胞。克隆筛选后，用RT—PCR、Northern印迹及Western印迹鉴定外源基因的整合和表达。荧光探针JC-1观察各细胞系线粒体膜电位的变化。结果 外源hNaDC3基因稳定整合到HKC细胞基因组中，并获得高、低表达。转染正义hNaDC3cDNA的HKC细胞线粒体膜电位降低，JC-1在线粒体内形成单体，发出绿色荧光；而转染反义hNaDC3cDNA的HKC细胞线粒体膜电位略微升高，JC-1形成聚合体，发出红色荧光。结论 hNaDC3过表达引起线粒体膜电位降低，反义hNaDC3则使线粒体膜电位略微升高。提示NaDC3可能通过使线粒体膜电位下降，参与了细胞能量代谢。     

人低分化鼻咽癌细胞（CNE—2Z）单克隆株细胞膜电学特性研究

从人低分化鼻咽癌细胞系（ＣＮＥ－２Ｚ）中分离出单克隆株４－２－Ｈ５、５－１－Ｆ１、５－２－Ｆ７进行体外培养，分别计算各克隆株细胞倍增时间和分裂指数，用玻璃微电极细胞内记录方法测量细胞膜电位。结果表明：（１）随培养时间延长，三个克隆株细胞膜电位负值都减小，差异有显著意义；（２）膜电位负值下降率与细胞株生长增殖能力呈正相关；（３）Ｈ５、Ｆ１细胞膜电位负值与细胞外Ｋ＾＋浓度的对数值接近反比关系。提高培养     

对缺氧诱发离体猪冠脉机械和电反应的影响

研究３－Ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｓｙｄｎｏｎｉｍｉｎｅ－Ｎ－ｅｔｈｙｌｃａｒｂａｍｉｄｅ（ＳＴＮ－１）对缺氧诱发离体猪冠脉机械和电反应的影响。同步记录机械张力和膜电位。缺氧可诱发离体猪冠脉平滑肌细胞膜去极化和收缩；ＳＩＮ－１和维拉帕米可使其复极化和松驰。     

线粒体与卵母细胞和早期胚胎发育

在哺乳动物成熟卵母细胞和早期胚胎中,线粒体是最独特且数量最多的细胞器,其不仅仅是产生ATP的细胞器,还参与许多重要的功能。哺乳动物卵母细胞和早期胚胎发育过程中伴随着线粒体诸多特性变化,如线粒体DNA拷贝数、mtDNA转录、线粒体超微结构、线粒体空间分布和线粒体膜电位。上述特性变化可影响卵母细胞和早期胚胎发育,甚至可导致卵母细胞和早期胚胎发育障碍。     

管花苷B对抗H202诱导的PCI2细胞凋亡

目的:观察肉苁蓉提取物管花苷B对H:O:诱导的PCI2细胞损伤的影响.方法:用MTr法检测细胞存活率,以激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内活性氧的产生和线粒体膜电位的变化,DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡的发生,并用荧光酶标仪测定caspase-3的活性.结果:100 μmol稬-1H2O2处理细胞24 h显著降低细胞的存活率;诱导细胞发生凋亡,凋亡率达48.O％;细胞内活性氧水平及caspase-3的活性显著升高;而线粒体膜电位却明显降低,红／绿荧光强度的比值由正常的5.97降低为0.41左右.而预先给予l、10或100 mg.L-1浓度的管花苷B处理细胞12 h,可显著提高细胞存活率;并可有效抑制DNA ladder的发生;流式细胞仪检测凋亡率分别降低到30.9％、18.3％和6.2％;激光共聚焦显微镜结果显示管花苷B可明显降低细胞内活性氧的水平;并可逐渐恢复线粒体的高能量状态;easpase-3的活性不断降低,并呈现了一定的剂量依赖性.结论:管花苷B能显著地抑制H2O2诱导的PCI2细胞凋亡,其神经细胞保护作用可能与其降低细胞内活性氧水平,维持线粒体膜电位的高能状态和抑制caspase-3的活性有关.     

管花苷B对抗H2O2诱导的PC12细胞凋亡

目的：观察肉苁蓉提取物管花苷B对H₂O₂诱导的PC12细胞损伤的影响。方法：用MTT法检测细胞存活率，以激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内活性氧的产生和线粒体膜电位的变化，DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡的发生，并用荧光酶标仪测定caspase-3的活性。结果：100 μmol·L^-1 H₂O₂处理细胞24 h显著降低细胞的存活率；诱导细胞发生凋亡，凋亡率达48.0％；细胞内活性氧水平及caspase-3的活性显著升高；而线粒体膜电位却明显降低，红/绿荧光强度的比值由正常的5.97降低为0.41左右。而预先给予1、10或100 mg·L^-1浓度的管花苷B处理细胞12 h，可显著提高细胞存活率；并可有效抑制DNA ladder的发生；流式细胞仪检测凋亡率分别降低到30.9%、18.3%和6.2%；激光共聚焦显微镜结果显示管花苷B可明显降低细胞内活性氧的水平；并可逐渐恢复线粒体的高能量状态；caspase-3的活性不断降低，并呈现了一定的剂量依赖性。结论：管花苷B能显著地抑制H₂O₂诱导的PC12细胞凋亡，其神经细胞保护作用可能与其降低细胞内活性氧水平，维持线粒体膜电位的高能状态和抑制caspase-3的活性有关。     

细胞内外膜跨膜电位频率响应模型及滤波器特性的研究

提出球形单细胞内外膜跨膜电位频率响应模型和仿真计算方法。通过对频率响应的仿真分析，发现内外膜跨膜电位分别表现出一阶带通和低通滤波器特性，并在内膜频率响应中心频率到上限截止频率的范围内，内膜跨膜电位大于外膜同时能保持在较高水平，这将有利于诱导细胞内电处理效应。计算结果与动物实验吻合得很好，为纳秒脉冲电场治疗肿瘤的窗口参数合理选择提供了理论依据。