基因芯片技术在医学研究中的应用

基因芯片技术是同时将大量的探针分子固定到固相支持物上 ,借助核酸分子杂交配对的特性对DNA样品的序列信息进行高效的解读和分析。它可用于基因表达谱的分析、突变检测 ,克隆选择和文库筛选等研究工作 ,同时在人类疾病的检测 ,预防等方面也具有广阔的应用价值 ,在未来的生命科学领域中必将发挥重要作     

日本血吸虫磷酸丙糖异构酶编码基因的克隆与序列测定

目的克隆和鉴定日本血吸虫磷酸丙糖异构酶(SjTPI)编码基因,为寻找血吸虫病的候选疫苗联合应用打基础.方法设计合成引物,抽提日本血吸虫成虫总RNA,用RT-PCR法从中扩增出SjTPI基因编码序列,将其克隆入pGEM-T载体,用双酶切、以重组质粒为模板进行PCR扩增和测序进行鉴定.结果 RT-PCR法从成虫总RNA中扩增出大小为759 bp SjTPI基因编码序列,重组质粒pGEM-SjTPI经双酶切、PCR扩增,均可获得一条与RT-PCR产物一致的DNA片段,序列测定结果表明具有一个长度为759 bp的完整开放阅读框,与日本血吸虫(菲律宾株)和曼氏血吸虫磷酸丙糖异构酶核苷酸序列有高度同源性(分别为99%和88%).结论该实验成功地克隆了SjTPI编码基因,为进一步研究提供了条件.     

自人脑胶质瘤基因文库克隆到一种未知基因片段

利用神经瘤鞘蛋白ＰＭＰ－２２基因（一种细胞生长休止期特异表达的基因）的编码区５′及３′－序列为引物，藉ＰＣＲ方法自人脑胶质瘤ｃＤＮＡ文库中扩增出一个１８１ｂｐ的基因片段，并测定了其序列，在基因资料库中未查到任何同源基因存在，但该片段与蛋白激酶Ｃ基因有５３．８％的同源性，提示它是一种新的未知基因的片段。     

+10 Gz重复暴露大鼠脑差异表达基因cDNA文库的构建

目的构建＋10Gz重复暴露大鼠脑差异表达基因的消减cDNA文库。方法本实验用SD大鼠，分别提取暴露组与对照组的总RNA，并分离纯化mRNA，应用抑制性消减杂交技术分离＋10GI重复暴露大鼠脑差异表达基因eDNA片段并建立消减eDNA文库；利用PCR对随机挑选的75个白色菌落进行插入片段的验证，对其中70个克隆进行eDNA斑点杂交验证。结果所构建的eDNA文库扩增后包含约400个白色克隆和100个兰色克隆，随机挑选75个白色克隆入质粒载体后共获得70个阳性克隆。结论应用抑制性消减杂交技术成功构建了＋10Gz重复暴露大鼠脑差异表达基因消减eDNA文库，为进一步筛选和克隆脑损伤相关基因奠定了基础。     

日本血吸虫cDNA文库的免疫筛选和融合蛋白的表达

血吸虫感染后的免疫机制为疫苗的研究提供了理论依据, 从基因文库中筛选编码诱导血吸虫保护性免疫力的抗原克隆是血吸虫分子疫苗研究非常关键步骤之一^{[1—3 ]}。本文用日本血吸虫感染兔血清( IRS) 探针来筛选日本血吸虫cDNA 文库, 并鉴定融合蛋白的性质, 为血吸虫分子疫苗的研制打下基础。     

人脑胶质瘤恶性进展相关基因表达谱中葡萄糖代谢相关基因的分析

目的　研究胶质瘤糖代谢增强时哪些基因从中发生显著变化。方法　根据已经建立的胶质瘤恶性进展相关基因表达谱 ,用生物信息学分析方法和 Gene Bank检索的资料分析其中葡萄糖代谢相关基因的变化。结果　在胶质瘤恶性进展中 ,与葡萄糖代谢相关的差异表达基因有 HK1、PFK、Py K、Tra、citratc synthase、isocitrate dehy-drogenase、L DH-A、L DH-B、Glut5、L-xylulose reductase共 10条。结论　上述的 10条基因涉及到多个代谢途径 ,可为进一步研究胶质瘤细胞葡萄糖代谢的分子机制提供线索 ,其中在磷酸戊糖途径中起关键作用的 Tra基因可以作为治疗靶点作深入研究     

人胃印戒细胞癌组织差异表达基因克隆的研究

目的:分离胃印戒细胞癌组织差异表达基因,探讨人胃印戒细胞癌发生的分子机制。方法:采用抑制性消减杂交技术(SSH),构建人胃印戒细胞癌组织cDNA 消减文库;随机挑选部分阳性克隆测序,与GenBank中的已知序列进行基因同源性分析,并进一步探讨基因功能。结果:成功构建高消减效率的人胃印戒细胞癌组织cDNA消减文库,并分离出多个差异表达基因片段:其中1 条与染色体序列相似,可能代表未知的新基因序列,已被GenBank 接收(注册号:CN446913);其他多为已知的肿瘤相关基因的部分片段。结论: 1 )SSH技术是分离差异表达基因的有效方法;2)胃印戒细胞癌的发生发展与多种基因表达异常有关;     

肺癌转移相关基因的差减文库的构建

目的发现与肺癌转移相关的基因.方法选择4例转移和5例非转移患者肺癌的RNA混合样品进行差减杂交.经过两步骤的杂交后,构建了转移相关基因的差减文库.对获得阳性克隆进行测序和同源性分析.结果一共获得了225个阳性克隆.在GenBank中序列比对的结果表明,它们分属124个基因.其中25个基因出现的频率大于一次,并有9个序列未找到同源基因.结论该结果将有助于各类肿瘤转移相关基因的研究.     

血吸虫感染抗性人血清筛选日本血吸虫童虫cDNA文库

目的分析血吸虫感染抗性人血清中起免疫保护作用抗体针对的日本血吸虫蛋白抗原谱,为日本血吸虫病疫苗研究提供新的候选抗原分子。方法采集血吸虫流行病区感染抗性人血清,免疫学方法筛选日本血吸虫童虫cDNA文库,对获得的阳性克隆核苷酸进行序列分析,并利用软件对所筛基因编码的抗原分子进行表位预测。结果共筛选出29个持续阳性克隆,对其进行测序,获得25个基因,包括5种已知基因(其中日本血吸虫肌球蛋白12个、丝氨酸蛋白酶抑制剂2个、细胞色素b1个、延伸因子1-α1个和线粒体编码区1个)和5个未知基因,软件分析显示不同抗原分别具有多个不同的抗原表位。结论获得的阳性克隆插入基因片段可能编码潜在的日本血吸虫病疫苗分子,其中日本血吸虫肌球蛋白为主要抗感染蛋白分子。     

2 338条胎儿心脏cDNA文库的表达序列标签测序分析

目的：寻找在心脏发育过程中具有重要功能的新基因，并研究其表达模式的特点。方法：随意选择8－10周龄胎儿心脏cDNA文库的克隆进行表达序列标签（ESTs)测序，结果与GenBank/EMBL/DDBJ核酸数据库进行同源性比较，其中与已知基因匹配的1550条ESTs用来研究8－10周龄胎儿心脏基因表达特点，并将其与10－12周龄胎儿及成人心脏的基因表达模式相比较，结果：所测2338条ESTs中，69．03％与已知基因匹配，33．18％与其他ESTs或基因组DNA相似，7．57％既不匹配于已知基因，亦不与其他ESTs或基因组DNA相似，发现了心脏发育过程中基因表达的某些特点。结论：大规模随机选择cDNA克隆，并进行ESTs测序是寻找新基因和系统研究不同组织或同一组织不同发育时期基因表达模式的有力工具。