人Uroplakin Ⅱ启动子用于靶向性基因治疗膀胱癌的实验研究

目的探讨利用人UroplakinⅡ(hUPⅡ)启动子进行靶向性基因治疗膀胱癌的可能性。方法将hUPⅡ启动子和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)克隆到腺病毒载体Ad5中,构建重组体pAd-hUPⅡ-TNF。转染细胞293后产生复制缺陷型的重组腺病毒,感染膀胱癌细胞系BIU-87,检测TNF-α对BIU-87细胞体外生物学行为及体内成瘤性的影响。结果成功构建pAd-hUPⅡ-TNF重组腺病毒载体,转染细胞293获得复制缺陷型重组腺病毒。BIU-87细胞经重组腺病毒感染后可产生高浓度的TNF-α,并降低BIU-87的生长速度。感染腺病毒的BIU-87培养液可抑制L929细胞的生长。裸鼠原位膀胱肿瘤动物模型实验结果表明膀胱灌注重组腺病毒48h后,裸鼠尿液含高浓度的TNF-α,4周后腺病毒组膀胱重量和体积明显低于对照组(P<0.01)。结论hUPⅡ启动子TNF-α为治疗基因的重组腺病毒可特异性使膀胱癌细胞系BIU-87产生高浓度的TNF-α,并降低BIU-87和L929细胞的生长速度。重组腺病毒可使裸鼠尿内含高浓度的TNF-α,并可抑制裸鼠原位膀胱肿瘤动物模型膀胱癌细胞的成瘤性。     

慢性乙型肝炎45例HBV基本核心启动子变异及HBV-DNA定量检测

采用聚合酶链反应－酶联免疫吸附法检测45例慢性乙型肝炎乙肝病毒基本核心启动子（HBV－Bcp）变异及HBV－DNA定量，结果HBV－Bcp变异阴性组HBV－DNA定量值明显低于HBV－Bcp变异阳性组（P＜0．05），提示HBV－Bcp变异可促进乙肝病毒繁殖，对慢性乙型肝炎患者检测HBV－Bcp变异有一定的临床意义。     

用氮源调控的FLD1启动子开发在毕赤酵母中生产外源蛋白的高细胞密度流加补料培养技术

构建了一株可在P．pastoris甲醛脱氢酶1基因的启动子（PFLD）转录控制下，表达稻根霉脂肪酶基因的毕赤酵母重组菌，以研究该表达系统可否用于无需甲醇诱导的高细胞密度流加补料培养技术生产重组蛋白。使用PFLD系统开发了简单可靠的流加补料技术，在诱导期分别用甲胺和山梨醇作为氮源和碳源。在3种恒定生长速率下分别进行3项流加补料发酵试验，     

人甲胎蛋白转录调控序列的研究进展

人甲胎蛋白(AFP)基因的转录受控于5'-侧翼序列的三种调控区域,即启动子、增强子和沉寂子.AFP启动子是一个典型的肿瘤特异性的启动子,非常适宜于肝细胞癌(HCC)基因治疗,但由于它作用比较弱,在决定胎儿肝脏和HCC的AFP表达水平上,发挥主要作用的是增强子.如何增强人AFP转录调控序列的转录活性,是当前HCC靶向基因治疗研究的重要方面,本文对该三种调控区域的研究进展和应用作一综述.     

内科学

老年多器官功能不全综合征预后危险因素分析;连续性血液净化治疗老年多器官功能障碍及对机体免疫功能的影响;武汉地区人群中CDl4单核细胞受体基因启动子区多态性与冠心病的关系;冠心病患者颈动脉弹性的临床观察;辛伐他汀治疗老年冠心病的疗效及安全性临床研究;三磷酸腺苷负荷与运动负荷心肌显像对冠心病诊断的对照研究及临床应用;     

Kringle 5的真核植物细胞穿梭表达载体的构建

目的：构建含有目的基因kring5的真核植物细胞穿酸表达载体。方法：应用RT－PCR方法，从正常人肝脏组织中获得kringle5基因，测序后，再通过DNA重组技术，将kringle5基因片段克隆到真核植物细胞表达载体pBI121和pCAMBIA3301上。结果：得到的kringle5基因序列测定结果与文献相符，重组载体pB1k5和pC33k5经酶切鉴定正确，含有植物高效表达CaMV35S启动子。结论：重组载体pB1k5和pC33k5不仅可以在大肠杆菌中稳定复制，而且可以在植物细胞中表达。