锌对儿童身体发育的影响

锌是人体内的微量元素,含量极少,但对生命有极重要的意义,被誉为“生命之花”。锌在人体内参与蛋白质、脂肪、醣的合成与代谢,是体内新陈代谢多种酶的激活因子。 人生最需要锌的阶段,即胚胎、婴幼儿、学龄儿童和青春生长发育最快的阶段。如体内缺锌,会引起多种器官和组织生理功能异常,而发生各种各样的病态,神经功能异常,智力发育迟缓,生长发育不佳,免疫功能     

川赤芍实时荧光定量PCR内参基因的筛选与验证

川赤芍与芍药共同作为《中国药典》著名药材赤芍的基原植物,具有重要的药用价值,且在花卉市场的潜力巨大。筛选稳定可靠的内参基因是开展川赤芍分子研究的必要前提。该研究从川赤芍的转录组数据中选取Actin和GAPDH 2个内参基因作为候选基因,利用实时荧光定量技术(qRT-PCR)检测2个候选基因在川赤芍的不同组织(韧皮部、木质部、茎、叶、叶柄、子房)和不同生长时期(萌动期、开花期、休眠期)的表达水平,然后利用geNorm、NormFinder、BestKeeper、ΔCT和RefFinder综合分析2个内参基因表达的稳定性,结果表明Actin和GAPDH在川赤芍不同组织和不同生长时期中的表达模式均稳定。该研究进一步检测川赤芍转录组数据中8个基因(Pv-TPS01、Pv-TPS02、Pv-CYP01、Pv-CYP02、Pv-CYP03、Pv-BAHD01、Pv-UGT01、Pv-UGT02)在不同组织中的表达水平,结果表明,以Actin和GAPDH分别作为内参基因,8个基因在川赤芍不同组织部位的表达趋势均一致,验证了Actin和GAPDH作为川赤芍内参基因的可靠性。综上,该研究发现Actin和...     

荧光定量聚合酶链反应法比较标准管家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶、β-肌动蛋白、酸性核糖体磷蛋白P0及18S核糖体RNA在老年大鼠不同组织中的表达

背景:反转录聚合酶链反应用于基因表达分析越来越显示出其重要性,其中合适的内参基因选择很重要,目前并没有适合于所有体系可作为内参的管家基因.人鼠是常用动物模型,选择合适的大鼠管家基因作为内参尤其必要.目的:比较分析使用最广泛的4个标准管家摹因3-磷酸甘油醛脱氢酶、β-肌动蛋白、酸性核糖体磷蛋白P0及18S核糖体RNA在老年大鼠肝、肾、心、肺组织和大脑皮质中的表达情况.设计、时间及地点:观察对比实验,于2007-07/08在泰山医学院生命科学研究所分子生物学实验室及泰安市疾控中心病毒检测中心实验室完成.材料:选用老年SD大鼠3只,用于检测管家基因表达情况.方法:采用反转录实时荧光聚合酶链反应技术检测老年大鼠肝、肾,心、肺组织和大脑皮质中有着不同表达丰度和功能的4个管家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶、β-肌动蛋白、酸性核糖体磷蛋白P0及18S核糖体RNA的表达情况.主要观察指标:老年大鼠不同组织内4个管家基因的表达水平及不同组织间的表达差异.结果:①酸性核糖体磷蛋白P0在老年大鼠不同组织间表达差异最小.②老年大鼠肾组织中表达最稳定的管家基因是β-肌动蛋白:心脏组织和肺组织中表达最稳定的管家基因是3-磷酸甘油醛脱氢酶.结论:老年大鼠组织间信使RNA分析仅用1个内参基因是不合适的,至少应该使用两个参照基因,1个选用18S核糖体RNA:另一个基因的选择标准如下:适用于分析不同组织间基因表达情况的内参基因是酸性核糖体磷蛋白P0,而心脏和肺组织研究适用3-磷酸廿油醛脱氢酶,肾组织研究适用β-肌动蛋白.     

穿心莲茉莉酸甲酯及非生物胁迫下Real-time PCR内参基因的筛选

目的 筛选合适的穿心莲茉莉酸甲酯（MeJA）和非生物胁迫下实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测的内参基因。方法 利用高温、干旱、紫外和MeJA处理的穿心莲转录组数据，挑选到7个候选内参基因肌动蛋白1（ACT1），肌动蛋白2（ACT2），转录延伸因子（EF-1α），甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH），微管蛋白（TUB），多聚泛素酶（UBQ）和18S核糖体RNA（18S），并以上述处理后的穿心莲叶片为实验材料，进行Real-time PCR验证。利用geNorm，NormFinder 和BestKeeper 3种内参稳定性评估软件进行分析，再利用Refinder软件进行综合分析。结果 3种软件基于不同指标进行稳定性评估，结果并不相同，综合分析得出候选内参基因在高温胁迫下表达稳定性顺序依次为UBQ>18S>EF-1α>ACT2>ACT1>GAPDH>TUB；干旱胁迫下表达稳定性顺序依次为ACT1>UBQ>EF-1α>18S>ACT2>GAPDH>TUB；UV胁迫下表达稳定性顺序依次为EF-1α>TUB>ACT2>UBQ>18S>GAPDH>ACT1；MeJA胁迫下表达稳定性顺序依次为ACT1>EF-1α>UBQ>ACT2>18S>TUB>GAPDH。其中18S基因表达丰度较高，不适合作为内参基因。结合转录组数据对4种胁迫中穿心莲内酯合成相关基因酶羟甲基戊二酰-辅酶A合成酶（HMGS）的相对表达水平验证，发现合适内参基因的Real-time PCR结果更可靠。结论 穿心莲高温、干旱、紫外和MeJA胁迫时，UBQ，ACT1和UBQ，EF-1α和TUB，ACT1和EF-1α分别为最适内参基因组合，为后期开展穿心莲高温、干旱、紫外和MeJA处理中基因的功能调控和表达研究提供了参考。     

过度补锌易患前列腺癌

锌是人体必需的微量元素之一,它是多种酶的组成部分和活化剂;酶在人体内参与蛋白质、脂肪、氨基酸、核酸等重要物质的代谢过程。人体缺锌,体内各种酶的活性就会降低,正常的代谢失去平衡。因此,锌是人体生长发育、生殖、遗传、免疫、内分泌、神经、体液等重要生理过程必不可少的物质。锌主要来源于食物,如动物肝脏、瘦     

尖锐湿疣皮损中结合蛋白-1 mRNA的表达研究

目的 检测尖锐湿疣(CA)组织中潜在转化生长因子13结合蛋白-1(LTBP-1)mRNA表达水平,探讨其表达水平与CA发病的关系. 方法 用哺乳动物RNA抽提方法,提取CA组织总RNA,18s rRNA作为内参照,正常包皮组织作为对照,RT-PCR半定量分析LTBP-1 mRNA表达水平. 结果 CA组LTBP-1 mRNA表达水平比包皮组低,二者差异有统计学意义(P＜0.01). 结论 CA组织中LTBP-1表达下降,影响TGFβ功能的正常发挥,可能与CA疣体的发生有关.     

双色红外荧光在蛋白检测中的优势

目的：通过比较Western blot的两种不同显色方法,了解双色红外荧光检测技术在蛋白检测中的优势。方法：制备L-02肝细胞总蛋白,SDS-PAGE电泳分离后转膜,内参蛋白GADPH,β-actin一抗孵育,二抗用藕联有IRDye700、IRDye800的荧光抗体和辣根过氧化物酶抗体,通过双色红外荧光检测技术和化学发光法检测,比较相同量时,两种方法的灵敏度及特异性差异。结果：双色法显色的图像较化学发光法更清晰直观,且实验背景低。结论：双色红外荧光检测提高了蛋白检测灵敏度,保证实验结果的准确,在蛋白检测方面具有不可比拟的优势。     

内参基因β-actin质粒标准品的构建

为构建检测内参基因β-actin mRNA表达水平差异的标准品，以成人外周血细胞的总RNA为模板、Random 6 mers为引物反转录合成cDNA，用该cDNA为模板PCR扩增人β-actin基因相应的cDNA片段，构建PMD-18-β-actin重组质粒，鉴定测序后，用荧光定量PCR制作标准曲线。结果外周血提取的总RNA完整性良好，构建的β-actin质粒经PCR扩增后得到一186 bp的清晰条带，测序结果与目的片段完全一致，且质粒的原始浓度为2.39×1013 copies/mL，倍比稀释至2.0×104 copies/mL均能得到良好的标准曲线（R2=1），提示构建β-actin基因荧光定量PCR标准质粒成功。     

LPS诱导下THP-1细胞基因表达内参基因的筛选

动脉粥样硬化（atherosclerosis,As）是心脑血管疾病的主要病理基础,引起AS的病因很复杂。巨噬细胞在其发生、发展过程中有重要作用^[1,2]。抑制巨噬细胞的炎症反应有可能成为预防和治疗AS的一个重要的方向。已知人单核白血病（THP-1）细胞具有单核细胞和巨噬细胞的功能和生理学特性,被广泛用于毒理学、免疫学和动脉粥样硬化等研究领域^[3]。而G-细菌细胞膜的主要成分脂多糖（1ipop01ysaccharide,LPS）可以刺激单核巨噬细胞系统发生免疫反应^[4]。明确LPS刺激THP-1细胞的基因转录水平将有助于揭示AS的病因。     

含PML/RARα（L型）与ABL双基因质粒标准品的制备及应用

目的建立一个含PML/RARα（L型）与ABL双基因质粒标准品,用于PML/RARαL型）的定量检测。方法从NB4细胞中提取总RNA并逆转录为cDNA,以此为模板,设计PML/RARα（L型）与ABL基因特异性引物进行PCR,PCR产物经琼脂糖电泳、胶回收、PCMV4载体克隆后转化DH5α工程菌,提取质粒进行酶切、测序鉴定,提取质粒用于制作荧光定量PCR标准曲线,同时对质粒的稳定性能进行评价。结果结果NB4细胞提取的总RNA完整性良好,构建的质粒经酶切鉴定后与目的条带一致,测序结果与目的片段几乎完全一致,且质粒的原始浓度为9×1012copies/ml,倍比稀释至9×104copies/ml,均能得到良好的标准曲线（R2≈1）,且质粒的稳定性好,提示含PML/RARa（L型）与ABL双基因荧光定量PCR质粒标准品构建成功。结论本研究建立了制备含PML/RARα（L型）与ABL双基因质粒标准品方法,并成功制备出稳定的含PML/RARα（L型）与ABL双基因质粒标准品。