3种不同survivin基因启动子驱动Apoptin表达的重组慢病毒构建及体外抑瘤效果比较

目的构建3种不同长度的survivin基因启动子融合6×his标签Apoptin cDNA的重组慢病毒载体,经鉴定后行慢病毒包装并感染人结直肠癌细胞(SW480),体外实验观察并比较抑瘤效果。方法克隆3种不同长度的人survivin基因启动子(160、270、987 bp)和Apoptin-6×his cDNA,将其分别连接到pMD18-T载体并在该载体上完成survivin基因启动子和Apoptin基因组装。将组装好的表达盒构建入polyA改造后的慢病毒载体FG12中,利用三质粒包装系统包装成慢病毒。为观察重组慢病毒的抑瘤效果,以最适MOI值感染SW480肿瘤细胞后第5天及第30天,利用AnnexinV-PE/7-AAD凋亡试剂盒和流式细胞术检测细胞凋亡和周期变化,Western blot检测Apoptin-6×his表达。结果成功构建3种重组慢病毒载体,经包装浓缩后获得高滴度病毒,可以有效地感染目的细胞(感染效率大于80%)。体外结果提示病毒感染的SW480可以正确表达Apoptin-6×his蛋白,并能在感染后第30天出现明显的凋亡/坏死。其中,含有270 bp启动子的慢病毒抑瘤作用更为明显。结论采用270 bp survivin启动子,apoptin基因构建的重组慢病毒在靶细胞中显示出较好的抑瘤效果。     

脑胶质瘤中凋亡抑制生存基因和细胞周期蛋白b1的表达及临床意义

目的探讨凋亡抑制生存基因(survivin)在人脑胶质瘤中的表达及其与细胞周期蛋白(cyclin)b1蛋白表达的相关性。方法采用免疫组织化学SABC法检测survivin、cyclin b1表达蛋白在41例胶质瘤和10例正常脑组织中的表达。结果survivin基因表达蛋白在正常脑组织中无表达;41例胶质瘤中25例呈阳性表达,占61.0%。病理分级Ⅰ~Ⅱ级和Ⅲ~Ⅳ级间的表达差异有统计学意义(P0.05)。胶质瘤组织survivin蛋白的表达与cyclin b1蛋白表达密切相关(r_s=0.836,P0.01)。结论 survivin蛋白异常表达在胶质瘤的发生中起重要作用,它可能与cyclin b1共同在胶质瘤细胞有丝分裂的G2/M期中起特殊促进作用。