嗅三针对SAMP8小鼠海马磷酸化PI3K/Akt蛋白表达和突触可塑性的影响

目的:观察嗅三针对SAMP8小鼠海马磷酸化PI3K、Akt蛋白表达和海马突触可塑性损伤的影响,探讨嗅三针治疗阿尔茨海默病(AD)模型小鼠的作用机制。方法:将40只SAMP8小鼠随机分为模型组(Model)、嗅三针组(XSZ)、嗅神经切断嗅三针组(XSZ+XSJ)和盐酸多奈哌齐组(Donepezil),每组10只,10只SAMR1小鼠作为正常组(Control)。XSZ组和XSZ+XSJ组采用电针刺激印堂穴和双侧迎香穴,Donepezil组采用盐酸多奈哌齐灌胃,Control组和Model组不干预。采用Morris水迷宫实验评价小鼠学习记忆能力,新物体识别实验评价小鼠新物体识别能力,Western Blot和免疫组化检测小鼠海马区p-PI3K和p-Akt蛋白表达,透射电镜观测小鼠海马突触超微结构。结果:与Model组比较,XSZ和Donepezil干预均可以明显降低SAMP8小鼠4d平均逃避潜伏期,增加其靶象限停留时间、穿越平台次数和新物体偏爱指数,明显升高其海马p-PI3K和p-Akt蛋白表达(P<0.05),改善其海马神经元突触结构;XSZ+XSJ对于SAMP8小鼠学习记忆能力、新物体识别能力指标及p-PI3K、p-Akt蛋白表达无显著影响(P>0.05),对其突触结构损伤无明显改善;对于上述指标的影响,XSZ组与Donepezil组比较无显著差异(P>0.05)。结论:嗅三针可能基于嗅觉通路完整性,调节海马PI3K/Akt磷酸化表达,修复海马突触形态结构损伤,改善海马突触可塑性,从而发挥提高SAMP8小鼠学习记忆能力的效应。     

隐丹参酮对胰腺癌细胞生物学行为的影响及作用机制

背景与目的:胰腺癌是一种高度恶性的消化系统肿瘤,尽管目前针对胰腺癌的治疗方式在不断发展,患者预后仍然很差。隐丹参酮(CPT)是从植物丹参中提取的具有多种活性的单体,已被证实对宫颈癌、前列腺癌等有抗癌作用,但其对胰腺癌的作用尚不清楚,本研究通过体外实验探讨CPT对胰腺癌细胞生长和迁移的影响及相关机制,为相关的临床治疗药物研发提供理论和实验依据。方法:采用人胰腺癌BxPC-3细胞和SW1990细胞为研究对象,用3个浓度(10、20、40 μmol/L)的CPT处理该两种胰腺癌细胞不同时间(0、1、2、3 d)后,用CCK-8法检测CPT对细胞活力影响的浓度与时间效应;用以上3个浓度的CPT处理两种胰腺癌细胞24 h后,分别用克隆形成实验、划痕实验、Transwell实验检测对细胞克隆形成能力、迁移能力、侵袭能力的变化;用20 μmol/L CPT处理BxPC-3和SW1990细胞1、2、3 d后,用Western blot检测Akt、磷酸化Akt(p-Akt)以及上皮-间质转化(EMT)相关蛋白vimentin、E-cadherin与细胞周期相关蛋白CDK4、cyclin D1的表达。对照组细胞均只采用溶剂(DMSO)处理。结果:与各自对照组比较,CPT处理后的两种胰腺癌细胞的生长被明显抑制,且呈时间与浓度依赖性(均P0.05);划痕愈合程度、相对克隆形成率、侵袭细胞数均明显降低,且呈浓度依赖性(均P0.05);Akt、p-Akt、vimentin、E-cadherin、CDK4、cyclin D1蛋白的表达均明显下调,且呈时间依赖性(均P0.05)。结论:CPT能有效抑制胰腺癌细胞的生长和迁移,其作用机制可能与其下调Akt的表达,并进一步导致胰腺癌细胞生长周期阻滞及抑制EMT过程有关。     

尖锐湿疣皮损中Caspase 8与p-Akt的表达

目的 探讨Caspase 8与p-Akt在尖锐湿疣皮损中的表达及意义.方法 收集尖锐湿疣30例、宫颈癌20例、正常皮肤(包皮)20例,采用免疫组化检测以上组织中Caspase 8及p-Akt的表达及分布.结果 Caspase 8在尖锐湿疣皮损、宫颈癌、正常皮肤中阳性率分别为23.33%、80%、90%.Caspase 8在尖锐湿疣中的表达强度显著低于正常皮肤(P<0.01)和宫颈癌组织(P<0.001).p-Akt在尖锐湿疣皮损、宫颈癌组织、正常皮肤组织中的阳性率分别为93.33%、95%、90%.p-Akt在尖锐湿疣皮损的表达强度显著高于正常皮肤组织(P<0.001),低于宫颈癌组织(P<0.001).在尖锐湿疣皮损和正常皮肤组织中,Caspase 8与p-Akt的表达无相关性.在宫颈癌中,Caspase 8与p-Akt的表达存在显著的正相关(r=0.369,P<0.05).结论 Caspase 8的凋亡启动受抑制及p-Akt的抗凋亡作用可能参与了尖锐湿疣的发生发展.     

双硫仑联合铜离子对乐伐替尼耐药肝癌细胞Huh7增殖及凋亡的影响

目的建立乐伐替尼肝细胞肝癌(简称"肝癌")细胞耐药模型,以研究双硫仑联合铜离子对乐伐替尼耐药细胞Huh7增殖和凋亡的影响。方法通过CCK8法检测乐伐替尼作用下Huh7细胞的半抑制浓度(IC50),采用浓度递增法诱导Huh7细胞乐伐替尼耐药。各组细胞处理:对照组为Huh7细胞加普通培养液培养后的细胞;敏感组为Huh7细胞加10μmol/L乐伐替尼培养后的细胞;耐药组为耐药Huh7细胞加10μmol/L乐伐替尼培养后的细胞;联合组为耐药Huh7细胞加10μmol/L乐伐替尼+1μmol/L双硫仑+0.5μmol/L铜离子培养后的细胞;抑制剂组为耐药Huh7细胞加10μmol/L乐伐替尼+10μmol/L Akt抑制剂MK2206培养后的细胞。CCK8法及流式细胞术分别检测细胞的存活率和凋亡率;Western blot法检测磷酸化-Akt(p-Akt)和半胱氨酸蛋白酶9(caspase-9)和B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)蛋白表达;Transwell法检测细胞侵袭性。结果乐伐替尼耐药细胞系成功建立,选取10、20、40、60、80及160μmol/L 6个乐伐替尼浓度对Huh7细胞作用48 h后计算得出细胞IC50为12.35μmol/L。耐药组细胞存活率明显高于敏感组(P<0.01),联合组细胞存活率明显低于耐药组(P<0.01),抑制剂组细胞存活率明显低于耐药组(P<0.05)。与耐药组比较,联合组及抑制剂组p-Akt蛋白表达明显降低(P<0.01)、caspase-9明显升高(P<0.01),而Bcl-2蛋白在耐药组和联合组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。联合组细胞凋亡率明显高于耐药组(P<0.01)。Transwell结果显示联合组的肿瘤细胞侵袭数明显少于耐药组(P<0.01)。结论双硫仑联合铜离子能增加乐伐替尼对乐伐替尼耐药肝癌细胞Huh7的敏感性,同耐药组相比其细胞抑制率明显提高,其机制可能与抑制磷脂酰肌醇-3-激酶/Akt通路及促进caspase-9蛋白表达有关。     

p-Akt在胰腺癌组织芯片中的表达及临床意义

目的用高通量的组织芯片技术,探讨胰腺癌组织中p-Akt蛋白的表达及其与胰腺癌临床病理特征和预后的相关性及意义。方法将88例胰腺癌组织和11例正常胰腺组织制成组织芯片,采用EnVision免疫组化方法检测p-Akt蛋白在胰腺癌中的表达,并对随访2个月～6年的53例病例作了生存分析。结果胰腺癌中p-Akt高表达率为52.3%(46/88)。p-Akt表达和胰腺癌的临床TNM分期、淋巴结转移存在相关性(P<0.01),与肿瘤病理分级、部位和大小无关(P>0.05)。在有随访结果的53例病例中,单因素、多因素Cox分析显示,p-Akt表达与预后有关(P<0.05)。结论组织芯片技术是大规模检测基因蛋白表达的一种有效方法。p-Akt在胰腺癌中过表达可能参与了胰腺癌的发生、发展和转移。p-Akt是胰腺癌有意义的预后指标。     

结直肠癌原发及转移灶中PI3K、p-Akt及mTOR的表达及意义

背景与目的:随着对PI3K/Akt信号通路在结直肠癌发生、发展中研究的不断深入,人们发现该通路在结直肠癌发生、发展及治疗药物开发中有重要价值.本研究旨在探讨PI3K、p-Akt及mTOR在结直肠癌原发灶及转移灶中的表达变化及临床意义.方法:应用免疫组织化学EnVison法检测60例结直肠癌患者原发灶及其转移灶中PI3K、p-Akt及mTOR的表达.结果:PI3K在转移灶中的阳性率显著高于原发灶中的阳性率(46.7% vs 30%,χ2=13.890,P<0.05),mTOR在转移灶中的阳性率显著高于原发灶中的阳性率(55.0% vs 41.7%,χ2=10.823,P<0.05);而p-Akt在原发及转移灶中的表达差异无统计学意义(53.3% vs 50.0%,χ2=0.267,P>0.05).PI3K和mTOR在结直肠癌原发及转移灶中表达均具有相关性,且呈正相关.结论:PI3K和mTOR的表达与结直肠癌转移密切相关,而且转移灶癌细胞PI3K的表达明显增强,mTOR的表达明显下降,可作为临床判断结直肠癌恶性程度、转移及预后的重要参考指标.     

老龄大鼠肝脏和骨骼肌胰岛素受体底物-1及磷酸化蛋白激酶B的表达

目的 探讨老龄对胰岛素受体底物-1(IRS-1)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B (PKB, p-Akt)在肝脏和骨骼肌中表达的影响,为老年糖尿病早期干预方法提供实验依据. 方法 3种不同月龄SD大鼠(6、12、20～24月龄),腹腔麻醉后抽心血查血糖、血脂、游离脂肪酸(FFA);分离肝脏、骨骼肌,免疫组化观察IRS-1与p-Akt在不同月龄大鼠肝脏和骨骼肌中的表达. 结果 20～24月龄鼠血浆中FFA水平高于6月龄大鼠[(419.94±93.93) vs (256.22±73.93 ) mmol/L, P<0.05];但空腹血糖及血脂水平与其它月龄大鼠相当;在肝脏或骨骼肌均未发现IRS-1表达水平的显著变化(P>0.05);p-Akt在肝细胞中的表达减少,与6月龄和12月龄组相比差异有统计学意义(P<0.05);而在骨骼肌细胞中,3组动物p-Akt表达无明显差异. 结论 FFA水平增高是自然衰老大鼠胰岛素抵抗的显著特征,与此相关的PI3K/Akt信号通路障碍早于血糖异常出现;Akt 的磷酸化障碍可能是早期干预的靶点.Akt 的磷酸化障碍主要在肝细胞中发现,肝脏可能是衰老相关胰岛素信号通路异常的主要部位.     

Correlation between EGFR gene mutation pattern and Akt phosphorylation in pulmonary adenocarcinomas

The detection of gene mutation of epithelial growth factor receptor (EGFR) is important to predict the therapeutic effect of gefitinib. Recently, it was reported that examination of the activation of the downstream protein of EGFR is useful in the same way as the EGFR mutation. Therefore the purpose of the present paper was to determine whether activation of Akt and Erk, which are downstream proteins, and the EGFR gene mutation pattern was correlated. A total of 130 pulmonary adenocarcinomas were studied for the gene mutations of EGFR in exon 19 and 21, and the phosphorylation of Akt and Erk was investigated by immunostaining. The EGFR mutation was detected in 32%, the positivity of p-Akt was 51%, and the rate of p-Erk was 27%. The EGFR mutation-positive cases were the minority in p-Akt-negative cases, and the p-Akt expression was significantly associated with the mutation of EGFR (P=0.0014). In addition, there was a significant correlation between the L858R mutation and the expression of p-Akt (P=0.040). It is suggested that the activation of Akt is dependent on EGFR mutation pattern.     

重组人促红细胞生成素对SCI大鼠Akt和p-Akt表达的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rHuEPO)对脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)大鼠Akt与p-Akt表达的影响。方法成年健康Wistar大鼠72只,雌雄不限,按随机数字表法分为假手术组、脊髓损伤组和重组人促红细胞生成素治疗组,参照Nystrom's压迫方法制作大鼠脊髓压迫损伤模型,按照存活时间再分为脊髓损伤6h,12h,24h,3d组。免疫组化和Western blot方法检测Akt、p-Akt在各组大鼠脊髓表达的变化。结果免疫组化和Westernblot结果发现,脊髓Akt、p-Akt蛋白阳性表达的平均光密度值SCI组低于假手术组(P<0.05),重组人促红细胞生成素治疗组显著高于SCI组(P<0.05)。结论 rHuEPO可通过上调Akt、p-Akt蛋白的表达参与脊髓损伤修复。