双重实时荧光PCR快速鉴别人参和西洋参＊

目的 建立一种能够快速鉴定人参和西洋参的双重实时荧光PCR方法。方法 通过对人参属及其近似种基因序列的分析比对，设计特异性的引物探针，建立双重实时荧光PCR检测方法。PCR反应体系为Premix Ex Taq （Probe qPCR） 10 μL，人参上下游引物各0.5 μL，西洋参上下游引物各0.3 μL，人参与西洋参特异性探针各0.4 μL，DNA模板2 μL，灭菌去离子水补至20 μL。反应条件为95℃预变性30 s；然后以95℃变性5 s，60℃退火延伸30 s进行40个循环。应用该方法测试了27份DNA样品，包括7份人参、6份西洋参、4份人参与西洋参混合样、10份其他人参属样品及其他常见中药材样品的DNA，以确定该方法的特异性。将人参与西洋参样品DNA混合后10倍稀释成不同浓度后进行检测，用以确定该方法的灵敏度。结果 人参及西洋参样品均在特定的荧光通道下出现典型的阳性扩增曲线，人参与西洋参混合样品均同时出现两条阳性扩增曲线，其它对照样品及空白对照均没有出现阳性扩增曲线。灵敏度检测结果显示该方法检测人参及西洋参的最低检测限均为2 pg DNA/反应。结论 本实验建立的双重实时荧光PCR方法能够同时快速、准确、灵敏地鉴别出人参和西洋参。     

改良双腔球囊导管在插管失败的输卵管阻塞介入再通术中的应用价值

目的探讨改良双腔球囊导管在插管失败的输卵管阻塞介入再通术中的应用价值。方法回顾45例输卵管阻塞性不孕患者,应用常规法行介入再通术,其中输卵管开口插管失败采用改良双腔球囊导管行介入再通,统计分析常规法组与联合改良双腔球囊导管法组(联合法组)的输卵管开口插管成功率、输卵管阻塞的开通率。结果输卵管阻塞性不孕患者45例,共阻塞输卵管90条,采用常规法输卵管开口插管成功32条,其中开通成功31条,插管成功率为35.56%,开通率96.88%。采用联合法输卵管开口插管成功90条,输卵管开通83条,插管成功率为100%,开通率92.22%,7条输卵管因阻塞病情严重无法开通,其中双侧均未能开通1例。所有患者术中均无严重并发症发生。随访12个月,妊娠率48.65%。常规法组与联合法组输卵管开口插管成功率差异具有统计学意义(χ^2=85.574,P=0.000),而输卵管开通率差异无统计学意义(χ^2=0.248,P=0.619)。结论对于常规法输卵管开口插管失败者,采用联合改良双腔球囊导管可提高输卵管开口插管成功率。采用改良双腔球囊导管介入再通与常规法开通效果相当,可作为常规介入再通输卵管开口插管失败的备选方案。     

单孔加一孔联合ERAS在高位直肠及乙状结肠癌中的应用

目的 探讨单孔加一孔腹腔镜手术联合 ERAS 治疗高位直肠及乙状结肠癌的近期疗效。方法 回顾性分析 2017 年 11 月至2018 年 10 月在福建省肿瘤医院胃肠肿瘤外科进行加速康复外科干预的 92 例高位直肠及乙状结肠癌患者资料，根 据手术方式的不同，分为单孔加一孔手术联合快速康复外科组39 例及常规腹腔镜手术联合ERAS 组 53 例，对比两组围术 期情况。结果 两组患者基线资料无明显统计学差异（P ＞ 0.05），且在手术时间、出血量、上下切缘、清扫淋巴结数量及 并发症方面无明显统计学差异（P ＞ 0.05）。但单孔加一孔手术联合ERAS 组较常规手术联合ERAS 组，总切口长度更短 [（6.7±1.1）cm 比（8.5±1.3）cm，P=0.000]，术后首次下床时间更早 [（22.2±5.2）h 比（27.1±7.9）h，P=0.001]，首次排便 时间更早[（70.2±19.8）h比（83.1±20.4）h，P=0.005]，术后第一天C反应蛋白值更低[（43.5±28.6）mg/L比（57.2±33.2） mg/L，P=0.038]，术后住院时间更短 [（7.0±1.7）d 比（8.1±2.1）d，P=0.010]，且术后 2~4 天疼痛评分更低（P ＜ 0.05）。 结论 经验丰富的腔镜医师采用单孔加一孔手术治疗高位直肠及乙状结肠癌并联合 ERAS 干预是安全可行的，且单孔加一孔 手术可减低操作难度，具有疼痛轻、术后恢复快等优势，值得临床推广。     

Resistin is elevated in cystic fibrosis sputum and correlates negatively with lung function

Background

Resistin is an immunometabolic mediator that is elevated in several inflammatory disorders. A ligand for Toll-like receptor 4, resistin modulates the recruitment and activation of myeloid cells, notably neutrophils. Neutrophils are major drivers of cystic fibrosis (CF) lung disease, in part due to the release of human neutrophil elastase- and myeloperoxidase-rich primary granules, leading to tissue damage. Here we assessed the relationship of resistin to CF lung disease.

微滴式数字PCR和实时荧光定量PCR对新型冠状病毒肺炎患者不同时间血便尿中核酸检测结果初步探讨

目的 分析微滴式数字PCR(droplet digital PCR, ddPCR)和实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)的核酸检测结果,比较两种方法检测各类样本的差异性,为改进新型冠状病毒核酸检测方案提供数据支持。 方法 利用ddPCR和qPCR技术对已经确诊的3例新型冠状病毒肺炎患者发病不同时间的全血、尿液、粪便共22份标本进行新型冠状病毒核酸检测。 结果 两种方法对人保守区域基因扩增结果一致:全血标本信号最强,尿液次之,粪便最少;ddPCR在1份全血,1份尿液,5份粪便中检出ORF-1ab和N基因的阳性微滴,qPCR仅在3份粪便中检出上述基因,漏检的3个标本基因拷贝数平均浓度为128 copies/ml;ddPCR在发病<5、5~15、>15 d的各类标本中都有检出,qPCR检出以中晚期为主;重症病例用ddPCR均可测到阳性微滴,qPCR检测的各类标本均为阴性;轻症病例的各类标本中qPCR只有粪便核酸检测阳性,ddPCR检出率高于qPCR。 结论 ddPCR可以有效克服qPCR 灵敏度不足的难题,是对qPCR 的有益补充,尤其是针对病毒载量比较低的血液、尿液和可疑的粪便或肛拭子标本,适用于早期感染的判断及患者治愈后出院诊断。     

Application of recombinase polymerase amplification method for rapid detection of infectious laryngotracheitis virus

Infectious laryngotracheitis is a significant respiratory disease of chickens that causes huge economic losses due to high morbidity and mortality and reduced egg production. A real-time recombinase polymerase amplification (RPA) assay was developed to accurately detect ILTV. The specific probe and primer sets were carefully designed and screened. The real-time RPA assay was carried out at 39 °C for 30 min, and results were obtained within 15 min. The results of the specificity assay showed no fluorescence signals with other avian-related viruses. The sensitivity of the assay was 1 × 10² copies/μL. The low CV value showed that the assay was reproducible. A total of 115 clinical samples were tested using the real-time RPA assay and the real-time PCR assay in parallel; the coincidence rates of the two detection methods were 100%. The results indicated that the real-time RPA assay is a specific, sensitive, rapid, and useful tool for epidemiological studies and clinical diagnosis, especially in the field and in resource-poor areas.     

PCR仪与测序仪应用于丙型肝炎病毒基因型检测的临床效果观察

目的:观察PCR仪与测序仪在丙型肝炎病毒(HCV)基因型检测中的应用。方法:选择2018年1月~2018年12月收治的134例HCV感染患者为研究对象,给予患者PCR仪检测、测序仪检测。结果:测序仪检测134例均可分型,PCR仪检测130例患者可分型,4例未能分型。PCR检测结果:134例HCV感染患者中,1b型59例,2a型47例,3a型6例,3b型15例,6a型3例,4例为分出型别。基因测序结果:134例均可分型:1型59例,2a型40例,2i型7例,3a型6例,3b型15例,6a型3例,6n型4例。PCR仪检测法检测符合率97.0%。结论:PCR仪测序仪检测用于丙型肝炎病毒基因型检测,操作便捷,但其只能检测探针覆盖的型别,个别罕见型别不能分型。