阴沟肠杆菌感染的临床分布与耐药性分析

目的：调查近期天津市社区和院内获得性阴沟肠杆菌感染的临床分布与耐药情况，为临床合理选用抗菌药物提供科学依据。方法：收集天津市八家三级甲等医院于2001年2月—2002年2月分离的95株阴沟肠杆菌。琼脂纸片扩散法进行药敏试验，用WHONET5软件分析。结果：阴沟肠杆菌感染中患者以60岁以上的老年人多见，占53．7％。主要疾病是肺感染，占85．3％。阴沟肠杆菌临床株对头孢唑啉的耐药率最高，其次是阿莫西林 克拉维酸和氨节西林，对三代头孢菌素的耐药率在44．4％—66．7％。对亚胺培南的敏感性最高，对环丙沙星和阿米卡星耐药率分别为25％和29．5％。结论：治疗阴沟肠杆菌引起的感染要根据药敏结果选择使用三代头孢菌素、喹诺酮类及氨基糖甙类抗菌药，重症感染可用亚胺培南。     

2008-2011年产气肠杆菌的临床分布及耐药性分析

目的 分析产气肠杆菌临床分布特点及对常用抗菌药物的耐药性变化,以更好地指导临床的合理使用抗菌药物.方法 采用WHONET5软件统计分析2008年1月-2011年12月临床分离的产气肠杆菌临床分布和耐药率.结果 4年内共分离到产气肠杆菌459株,其中2008-2011年分别检出108、101、130、120株；病原菌主要来源于住院患者的痰液213株占46.4％、胆汁70株占15.3％、血液51株占11.1％、尿液50株占10.9％;4年耐药监测显示,亚胺培南和美罗培南的耐药率在2.0％～7.9％,呈明显的逐年上升趋势；头孢类抗菌药物除头孢唑林耐药率较高约90.0％外,其他如头孢替坦、头孢曲松、头孢他啶、头孢吡肟等耐药率由最高的55.5％下降至最低28.5％,氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦等复合制剂耐药率也由最高70.2％下降至最低21.1％,同时阿米卡星、庆大霉素等氨基糖苷类等药物的耐药率亦呈下降趋势,最高30.4％,最低为0,对喹诺酮类的耐药率约30.0％,保持相对稳定.结论 4年产气肠杆菌对头孢菌类、氨基糖苷类、复合制剂等药物的耐药率有所降低,而碳青霉烯类药物的耐药率呈上升趋势,说明细菌耐药性存在动态的变化,及时对细菌耐药性进行分析,依据药敏结果合理选用抗菌药物,严格掌握适应证,可减少或延缓耐药菌株的播散.     

产碳青霉烯酶产气肠杆菌的ERIC-PCR图谱分析

目的了解医院临床产碳青霉烯酶产气肠杆菌感染流行情况,为医院感染控制提供帮助。方法对医院检验科微生物实验室在2009年6月-2010年3月临床分离出的16株产碳青霉烯酶产气肠杆菌及1株非产碳青霉烯酶产气肠杆菌,用肠杆菌基因间重复一致序列聚合酶链反应(ERIC-PCR)进行基因分型。结果 17株菌株分为两个克隆型,其中16株产碳青霉烯酶产气肠杆菌为同一型,而另1株非产酶菌株为另一型。结论医院存在产碳青霉烯酶产气肠杆菌克隆传播现象,医护人员应予以高度关注,并及时采取有效措施。     

产气肠杆菌EAM-Z1荚膜的去除对胞内pyNPase活力和菌体生长量的影响

研究产气肠杆菌(EAM-Z1)荚膜去除或变薄对于胞内嘧啶核苷磷酸化酶(PyNPase)活力的菌体生长量和影响。在培养基中增加碳源以去除荚膜或使荚膜变薄,研究其对菌体生长的影响,并通过转化合成5-氟尿苷的方法研究其对PyNPase活力的影响。结果:在培养基中增加4%的D-甘露糖,1%的甲醇,2%的甘油或2%的丙酮都能使产气肠杆菌的荚膜变薄;其中增加2%丙酮时,菌体量增加43.92%,在工业生产中有重要意义,转化率为57.5%,提高2.8%,PyNPase比活力提高4.8%,转化合成5-氟尿苷的最佳反应时间为45 min,缩短了1/4。     

阴沟肠杆菌质粒介导DHA-1型AmpC酶基因的研究

目的:研究阴沟肠杆菌质粒介导DHA-1型AmpC酶及其基因类型.方法:利用3-氨基苯酚硼酸对AmpC酶的抑制作用检测阴沟肠杆菌的AmpC酶,通过接合实验分析质粒携带ampC基因的转移,用多重PCR及DNA测序技术测定AmpC酶基因,将序列测定结果用EMBOSS软件进行分析.结果:对头孢西丁和头孢噻肟不敏感的59株临床分离的阴沟肠杆菌中,AmpC酶阳性53株,接合实验成功3株,进一步用PCR及DNA测序技术测出此3株阴沟肠杆菌及其接合子细菌的质粒ampC基因类型为DHA-1型.结论:从我院患者送检标本分离的阴沟肠杆菌中检测到AmpC酶,并成功获得3株接合子细菌,从接合子细菌的质粒中检测到DHA-1型ampC基因.     

建立检测产气肠杆菌的TaqMan荧光定量PCR和普通PCR方法

目的 建立敏感、特异的普通聚合酶链反应(PCR)方法和TaqMan 荧光定量PCR方法对产气肠杆菌进行快速检测。方法 以产气肠杆菌组氨酸脱氢酶基因(hdc)为靶基因设计引物以及TaqMan FAM探针,建立对产气肠杆菌进行检测的普通PCR方法和TaqMan 荧光定量PCR方法,并评价该方法的特异性、灵敏性和稳定性。结果 普通PCR和TaqMan 荧光定量PCR方法均能对产气肠杆菌进行特异检测;普通PCR方法对质粒标准品和粪便模拟标本的检测下限分别为 100 copies/l和1.0105 cfu/g,TaqMan 荧光定量PCR方法对质粒标准品和粪便模拟标本的检测下限分别为33 copies/l和1.0104 cfu/g;TaqMan 荧光定量PCR方法对质粒标准品和粪便模拟标本检测的扩增曲线良好;在稳定性评价试验中,普通PCR方法的重复性良好,TaqMan 荧光定量PCR方法对质粒标准品检测Ct值的组内差异为0.15%~0.98%,组间差异为0.55%~1.63%。结论 本研究建立的检测产气肠杆菌的普通PCR方法和TaqMan 荧光PCR方法特异性好、灵敏度高,能够用于产气肠杆菌的快速检测。     

In vivo selection of Enterobacter aerogenes with reduced susceptibility to cefepime and carbapenems associated with decreased expression of a 40 kDa outer membrane protein and hyperproduction of AmpC beta-lactamase

The mechanism(s) of resistance or decreased susceptibility to cefepime (FEP) and/or imipenem (IMP) in three consecutive isolates of Enterobacter aerogenes (Ea1, Ea2 and Ea3) cultured from bronchial aspirates of the same patient after treatment with ceftriaxone and FEP were studied. Identification was performed with the VITEK 2 system. All three isolates showed identical pulsed-field gel electrophoresis patterns and were resistant (minimum inhibitory concentrations (MICs)) to cefoxitin (MIC, >1024 mg/L), cefotaxime (CTX; MIC, 32–128 mg/L) and ceftazidime (CAZ; MIC, 32–128 mg/L) but susceptible to meropenem (MIC, ≤0.5 mg/L) according to the National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). MICs of FEP were 0.5 mg/L (Ea1), 2 mg/L (Ea2) and 16 mg/L (Ea3), whereas MICs of IMP were ≤0.5 mg/L (Ea1 and Ea3) and 8 mg/L (Ea2). Clavulanic acid (CLV) did not affect the MICs of CTX and FEP. In contrast, the MICs of CTX were reduced 32–128 times by BRL 42715 (BRL) or cloxacillin (CLX), whereas the MICs of FEP were reduced 2–128 times by BRL and 16–64 times by CLX. Production of extended-spectrum β-lactamases (ESBLs) was not detected using the disk diffusion method (NCCLS) or Etest (CTX/CTX–CLV and CAZ/CAZ–CLV). TEM- or SHV-type ESBL genes were not detected by polymerase chain reaction amplification. The three isolates showed the same pattern of five β-lactamases (isoelectric points 7.9–8.3, inhibited by CLX but not by CLV) by isoelectric focusing of crude extracts. Hydrolysis (nmol/mg) of cefaloridine (CF) was 3741.0 (Ea1), 4000.6 (Ea2) and 3797.4 (Ea3), suggesting that AmpC is hyperproduced. Hydrolysis of FEP was much lower than that of CF: 1.3 (Ea1), 2.1 (Ea2) and 17.3 (Ea3). The nucleotide sequences of the ampR-ampC genes of Ea1 and Ea2 were identical to that of E. aerogenes strain deposited in GenBank (accession no. AF211348). For Ea3, however, a point mutation in position 311 of ampC caused a change of Val → Glu. Three outer membrane proteins (OMPs) of 51 kDa, 40 kDa and 38 kDa were observed in the three isolates by sodium dodecylsulphate–polyacrylamide gel electrophoresis (SDS–PAGE) (10% polyacrylamide gels with 4 M urea), although expression of the 40 kDa OMP was reduced in Ea2. In conclusion, decreased susceptibility to FEP and IMP in Ea2 is related to reduced expression of a 40 kDa OMP and hyperproduction of AmpC, whereas resistance to FEP in Ea3 is associated with hyperproduction of an altered AmpC.     

CLSI新判断标准下肠杆菌的耐药监测与比较

目的比较新折点下的耐药监测,更好指导临床用药。方法双纸片增效法进行超广谱β-内酰胺酶法(ESBL)筛选及确证试验。K-B法和琼脂稀释法进行直径和肉汤稀释法(MIC)值测定后计算耐药率。结果新规则下总体耐药率升高,其中头孢噻肟耐药率高达67.0%,但与ESBL阳性规则下的耐药率比较,头孢他啶,氨曲南的敏感率显著提高,头孢他啶耐药率55.2%,氨曲南耐药率50.2%。结论多重耐药模式确证以前的规则不可靠,一部分不能使用的头孢他啶、氨曲南敏感率显著性提高,新规则下三代、四代头孢总体耐药率上升,使临床大量求助其他类型药物,给感染控制提出巨大挑战。