Assignment of RFLP,RAPD and isoenzyme markers to Aspergillus nidulans chromosomes,using chromosome-substituted segregants of a hybrid of A. nidulans and A. quadrilineatus

Chromosome-substituted haploid segregants were selected from among the benomyl-induced progeny of an interspecific hybrid produced by polyethylene-glycol-induced fusion of protoplasts of an Aspergillus nidulans master strain and an A. quadrilineatus auxotrophic mutant. These segregants were examined by RFLP, RAPD, and isoenzyme analysis. The A. nidulans ribosomal repeat unit was assigned to chromosome V, while the benA and the pyrG genes were assigned to linkage groups VIII and I, respectively, of A. nidulans. None of the other cloned genes tested (gdhA, amdS and 25s rRNA) showed polymorphism between the two parents. The method was also used to assign RAPD markers and isoenzyme bands of -arylesterase, phosphatases, NAD-dependent malate dehydrogenase, and cellulase, to A. nidulans chromosomes and/or to their A. quadrilineatus equivalents. The isoenzyme and DNA sequences assigned to chromosomes could be used to saturate the genetic map of A. nidulans, or could serve as starting points for the construction of a genetic map of A. quadrilineatus. No method affording the same possibilities has been described so far in Aspergilli. This chromosome-assay method may be a useful alternative to pulsed-field-gel electrophoretic procedures for the assignment of molecular markers to chromosomes.     

人脑颞叶组织中类固醇5a－还原酶同功酶活性分布研究

本文采用酶放射分析法对新鲜人脑颞叶组织中５ａ－还原酶同功酶的活性分布进行研究。结果显示：（１）在颞叶脑组织中，５ａ－还原酶１和５ａ－还原酶２主要分布在灰质，其酶活性（５ａ－还原酶１，３３．６±４．５ｐｍｏｌ·ｈ_（－１）／ｍｇ蛋白，ｎ＝１２；５ａ－还原酶２，１３．８±２．９ｐｍｏｌ·ｈ_（－１）／ｍｇ蛋白，ｎ＝１１）明显高于分布在白质中的酶活性（５ａ－还原酶１，１４．７±２．０ｐｍｏｌ·ｈ_（－１）／ｍｇ蛋白，ｎ＝１２，Ｐ＜０．００１；５ａ－还原酶２，５．２±０．９ｐｍｏｌ·ｈ_（－１）／ｍｇ蛋白，ｎ＝１１，Ｐ＜０，０１）；（２）在灰质中，５ａ－还原酶活性主要来自于５ａ－还原酶１，其酶活性（３４．９±２．５ｐｍｏｌ·ｈ_（－１）／ｍｇ蛋白，ｎ＝３２）明显高于５ａ－还原酶２（１５．０±２．３ｐｍｏｌ·ｒ_（－１）／ｍｇ蛋白，ｎ＝１８，（Ｐ＜０．００１）；（３）５ａ－还原酶１和５ａ－还原酶２的活性在男女性之间差异不显著，且与年龄无相关关系。     

肝癌相关性甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测法

目的：进一步探讨血清肝癌相关性GPDA同工酶分离检测条件,提高其对原发性肝癌的诊断价值。方法：对分离血清肝癌相关性GPDA同工酶电泳体系的凝胶浓度及梯度、缓冲液的pH及离子强度、电泳的环境温度、标本 用量以及呈色条件等进行了逐项摸索,建立了稳定且分离效果好的GPDA同工酶检测方法。结果：采用三层阶段梯度聚丙烯酰胺凝胶体系将血清GPDA分为肝癌相关性的快带（GPDA－F）和相关性的慢带（GPDA－S）,肝癌相关性GPDA的检出率明显提高。结论：肝癌相关性血清GPDA检测法稳定可靠、敏感,适合于临床推广应用。     

小檗胺在升高白细胞的同时对乳酸脱氢酶的影响

采用酶细胞化学及平板聚丙烯酰胺凝胶电泳法观察小檗胺(Ber)在升高白细胞的同时,是否对细胞内酶代谢及其同工酶有影响。结果表明:ip Ber的小鼠粒细胞内LDH酶反应明显增强,酶反应的强弱与用药时间长短成正比。LDH同工酶谱分析,所有标本均显示5条区带,LDH_2比例发生变化,对照组及Ber组中出现LDH’_5亚带。提示,Ber在升高白细胞的同时对细胞内酶的代谢有一定影响,同时伴有同工酶谱比例改变。     

Enzymatic studies and isoenzyme pattern of gammaglutamyl transpeptidase (GGTP) in Indian childhood cirrhosis (CC)

Histopathological studies of liver cell showing necrosis, parenchymal cell injury and microsomal cell damage are known to affect membrane bound enzymes such as gamma-glutamyl transpeptidase (GGTP), alkaline phosphatase (AP) and 5′-nucleotidase (5′-NT). The significant rise in GGTP, AP and 5′-NT indicates the damage of microsomes of parenchymal cell in Indian Childhood Cirrhosis (ICC) patients. SGPT/AP ratio may be an index for distinguishing ICC with other liver diseases. The isoenzyme pattern of GGTP in sera of control and ICC subjects have one band prominent activity. Similarly biopsy samples of control and ICC subjects show one prominent band of GGTP activity. The appearance of isoenzyme of GGTP in blood circulation is an index of microsome damage, cell necrosis and parenchymal cell injury. The isoenzyme pattern of GGTP could be a diagnostic test for ICC.     

人精子特异性乳酸脱氢酶在大肠杆菌中的表达及其初步应用

目的 构建人精子特异性乳酸脱氢酶(hLDH-CA)的原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达,将重组hLDH-CA应用于抗精子抗体(ASA)的检测.方法 以人睾丸TripIEx cDNA文库为模板,PCR扩增hLDH-CA编码序列.PCR产物经Hind Ⅲ-Xho I酶切后,克隆至表达载体pET-28a(+)中,在E.coli BL21(DE3)中诱导His-Tag融合的重组蛋白表达.用免疫印迹、酶活性测定等方法鉴定表达产物.以纯化的重组hLDH-CA为基质,建立检测ASA的ELISA方法.结果 构建了hLDH-C4原核表达载体pET-28a(+).hLDHC.在IPTG的诱导下,重组菌可高效表达相对分子质量35 000的产物,与预期大小相符.免疫印迹显示,重组蛋白可被抗His-Tag单克隆抗体和兔抗人LDH-C4抗体识别.重组菌在IPTG诱导后,其裂菌液的乳酸脱氢酶活性是诱导前的11.2倍.用基于hLDH-C4抗原的间接ELISA法,在一组不育症患者中检测血清抗hLDH-CA抗体,阳性率达30.51%.结论 成功地克隆了hLDH-C4编码序列,并在E.coli BL21(DE3)中获得高效的表达,重组hLDH-C4在ASA检测中得到初步应用.     

广西人芽囊原虫分离株同工酶谱的初步分析

目的观察广西人芽囊原虫分离株的苹果酸脱氢酶(MDH)和碱性磷酸酶(ALP)同工酶谱特征。方法从感染者粪便中分离人芽囊原虫,体外培养,收集虫体,制备电泳样品。采取不连续性聚丙烯酰胺凝胶垂直板状电泳分离同工酶的不同区带,以苹果酸钠和1-萘磷酸钠盐为特异性底物,氯化硝基四氮唑蓝(NBT)和固蓝RR盐为染色剂,分别对MDH和ALP染色,以相对迁移率标记酶带。结果人芽囊原虫10个分离株在MDH酶谱中,共出现7条酶带,常见的酶带有Rm34、Rm47、Rm51、Rm55和Rm59,10个分离株完全一致的酶带有Rm34和Rm51;在ALP酶谱中共出现5条酶带,Rm22、Rm25、Rm28、Rm35和Rm38。各分离株之间的MDH和ALP同工酶谱均存在差异。结论MDH和ALP同工酶谱能反映人芽囊原虫各分离株之间的遗传差异。     

辅酶NADH对大鼠心肌缺血再灌注损伤生化标志物含量的影响

目的观察还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。探讨其可能的保护机制。方法选取健康雄性Wistar大鼠制备心肌缺血再灌注模型,雄性Wistar大鼠80只,随机分为4组,每组20只,分别为：缺血再灌注（MIR）模型组,NADH低剂量组（5mg/kg）,NADH中剂量组（10mg／kg）,NADH高剂量组（15mg／kg）。缺血再灌注（MIR）组：左前降支结扎前30min,5％葡萄糖腹腔注射;NADH低、中、高剂量组于结扎前30min,分别给予NADH5mg／kg、10mg／kg、15mg／kg腹腔注射。以上各组造模成功者分别随机分为：缺血30min和再灌注60min两组。观察大鼠血液中乳酸脱氢酶（1actate dehydrogenase,LDH）、肌酸激酶同工酶（MB isoenzyme of creatine kinase,CK-MB）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）、羟自由基、总超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase,T—SOD）含量的变化。结果与缺血再灌注（MIR）组比较,各处理组再灌后MDA、羟自由基、LDH、CK—MB释放水平明显降低,而T—SOD的水平升高,有统计学意义。结论NADH能够减少缺血再灌注引发的心肌细胞的一系列损伤,对心肌缺血再灌注损伤有保护作用,且达到治疗量（5mg／kg）后这种保护作用不具有剂量依赖性。     

不同麻醉方法对阿霉素化疗后心肌影响的研究

目的研究阿霉素(adriamycin,ADM)化疗大鼠围麻醉期CK(肌酸激酶)、CKMB(肌酸激酶同功酶)和病理变化,探讨围麻醉期心肌损伤的程度与规律。方法32只大鼠随机分成A、B、C、D4组。A、B组:腹腔注射(ip)ADM;C、D组:ip相同容积的生理盐水。最后一次注药后3d实施麻醉:A、C组选择异氟醚麻醉;B、D组选择戊巴比妥钠麻醉。结果四组CK、CKMB值麻醉前或后均无显著差异,麻醉前后配对相比亦无显著差异。心肌病理改变:A、B组见心肌细胞变性、坏死,C、D组结果正常。四组心肌组织病理评分有显著差异(P<0.01)。结论不同麻醉方法对阿霉素化疗后心肌影响不同,异氟醚组心肌损伤较轻,而戊巴比妥钠组损伤严重,异氟醚更适合化疗后心肌损伤的麻醉。     

湖北地区肋壳钉螺与光壳钉螺种群间亲缘关系的探讨

应用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳对长江水系的湖北钟祥、蒲圻光亮钉螺和江陵、潜江、阳新助壳钉螺进行酯酶同工酶（EST）和苹果酸脱氢酶（MDH）电泳比较，结果显示：3地肋壳钉螺EST同工酶酶带数目、活性及Rf值完全一致；2地光亮钉螺与肋壳钉螺相比，酶谱特征也基本一致，EST同工酶仅1－3条弱带稍有差异；MDH同工酶仅蒲圻光亮钉螺与其它各地肋壳与光亮钉螺稍有差异，提示上述各地钉螺在种系进化上具有比较密切的亲缘关系。