脐血间充质干细胞的培养鉴定及成骨诱导后的免疫原性研究

目的通过观察体外培养人脐血间充质干细胞(Umbilical cord blood-mesenchymal stem cells,UCB-MSCs)并作诱导成骨分化,探讨其作为组织工程的骨种子细胞的可行性。方法体外分离培养UCB-MSCs,流式细胞仪检测细胞表面抗原的表达及其变化规律;体外成骨诱导UCB-MSCs2周,采用Alizarin Red染色和钙离子半定量测定的方法评价细胞成骨活性。取P2代UCB-MSCs细胞,流式细胞仪检测加入IFN-γ前后的HLA-Ι、HLA-Ⅱ、CD40、CD80等分子的表达情况;流式细胞仪检测UCB-MSCs在成骨诱导分化前后HLA-Ι类分子、HLA-Ⅱ类分子的表达情况以观察成骨诱导分化的MSCs免疫抗原性的变化。结果第1、3、5代细胞的CD29、CD105和CD166均呈阳性表达,而造血细胞系的表面标记CD31、CD34和CD45则呈低表达,且随传代次数增加含量逐渐下降。UCB-MSCs成骨诱导2周后,Alizarin Red染色为阳性。对照组则无明显钙盐沉积。钙离子半定量的检测结果则表明,UCB-MSCs成骨诱导2周后的钙离子含量远高于未诱导组。流式细胞检测结果显示,人UCB-MSCs高表达HLA-Ι类分子,不表达HLA-Ⅱ类分子和CD40,CD80等共刺激分子;经IFN-γ刺激诱导后,HLA-Ι类分子的表达未发生改变,HLA-Ⅱ类分子呈阳性表达,而CD40和CD80的表达仍为阴性。人UCB-MSCs在成骨诱导分化前后HLA-Ι类分子均为阳性表达;而HLA-Ⅱ类分子在成骨分化前为阴性,诱导后阳性表达率增高。结论①UCB-MSCs能诱导分化为成骨细胞,有望成为较理想的组织工程骨种子细胞;②成骨分化使UCB-MSCs的免疫原性发生相应变化。     

重组人胰岛素治疗2型糖尿病免疫原性研究

目的探讨重组人胰岛素治疗2型糖尿病的免疫原性及其临床意义。方法应用放射免疫法检测179例重组人胰岛素治疗的2型糖尿病患者及429例未用胰岛素治疗的2型糖尿病患者胰岛素抗体（INS-Ab）的阳性率,并分析INS-Ab阳性患者的临床特征及其危险因素。结果 （1）重组人胰岛素治疗组中INS-Ab阳性率为36.31%,而未用重组人胰岛素组INS-Ab阳性率为0.23%,差异具有统计学意义（χ2=166.19,P=0.000）。（2）Logistic回归分析显示在应用重组人胰岛素的患者中INS-Ab阳性的危险因素分别为胰岛素治疗时间（OR=1.201,P=0.006）及糖尿病病程（OR=1.07,P=0.004）。应用重组人胰岛素半年以上、糖尿病病程5年以上并已接受重组人胰岛素治疗时,INS-Ab阳性率明显升高（P〈0.05）。重组人胰岛素治疗组中,INS-Ab阳性组HOMR-IR明显高于INS-Ab阴性组（18.48±21.58 vs.6.90±14.39,t=3.68,P=0.000）,高胰岛素血症组INS-Ab阳性率也明显高于无高胰岛素血症组（59.26%vs.20.99%,χ2=33.684,P=0.000）。（3）INS-Ab阳性患者空腹胰岛素及餐后2 h胰岛素水平均明显高于INS-Ab阴性者（P〈0.05）,低血糖发生次数明显高于阴性者（Z=-6.109,P=0.000）。（4）INS-Ab阳性组糖化血红蛋白达标率明显低于阴性组（χ2=4.422,P=0.035）。（5）诺和灵30R、甘舒林30R及优泌林30R胰岛素抗体阳性率分别为37.25%、38.46%、28.13%,差异无统计学意义（χ2=0.948,P=0.623）。结论 （1）重组人胰岛素治疗2型糖尿病仍具有免疫原性,在应用重组人胰岛素的患者中重组人胰岛素应用超过半年、低血糖频发、糖尿病病程5年以上的应及时检测INS-Ab。（2）已经使用重组人胰岛素的糖尿病患者也应常规查血清胰岛素水平,及时发现高胰岛素血症及免疫性胰岛素抵抗。（3）INS-Ab是胰岛素抵抗的危险因素,是影响糖尿病患者糖化血红蛋白达标率的因素之一。