三维准连续ASL评价兔软组织肿瘤抗血管生成的可行性研究

目的通过病理对照来研究三维准连续性动脉自旋标记(3D-PCASL)用于评价兔软组织VX2肿瘤抗血管生成的可行性。材料与方法 24只新西兰瘤兔大腿下段肌肉内VX2肿瘤接种成功,对实验组12只和对照组12只瘤兔分别采用恩度(endostatin)/盐水比例为1.5 mg/8 ml溶液和0.9%生理盐水8 ml连续瘤周肌注14 d。瘤兔下肢采用3D-PCASL序列进行扫描,3D-PCASL选取肿瘤组织最大层面,分别测量肿瘤边缘和肿瘤中心灌注参数BFASL值,与病理指标微血管密度(MVD)和血管内皮生长因子(VEGF)表达状况进行对照。结果实验组肿瘤边缘及中心区域MVD值分别与BFASL值具有良好的相关性(r=0.891、r=0.626,P0.05),对照组肿瘤中心及边缘治疗后MVD值分别与BFASL值具有良好的相关性(r=0.960、r=0.917,P0.05),均与VEGF的表达情况相对应。结论 BFASL值与MVD值在软组织VX2肿瘤抗血管生成治疗前后具有良好的相关性,3D-PCASL技术用于评价软组织肿瘤抗血管生成治疗是可行的。     

血管外肺水、肿瘤坏死因子-α、E-选择素、血管抑制因子-2与急性呼吸窘迫综合征患者预后的相关性研究

目的：分析血管外肺水（ EVLW）、肿瘤坏死因子-α（ TNF-α）、E-选择素、血管抑制因子-2与急性呼吸窘迫综合征（ ARDS）的相关性,探讨EVLW、TNF-α、E-选择素、血管抑制因子-2在ARDS病情严重程度及预后判断中的参考价值。方法选择36例ARDS患者进行PiCCO监测,根据PiCCO监测指标血管外肺水指数（ EVLWI）的高低分为两组,EVLWI≥14 mL/kg组和EVLWI＜14 mL/kg组,监测记录患者EVLWI、PVPI、CI、ITBVI等血流动力学指标,观察患者血气分析结果,记录氧合指数、计算APACHEⅡ评分,应用ELISA方法检测两组患者血清TNF-α、E-选择素、血管抑制因子-2水平。结果 EVLWI≥14 mL/kg组患者APACHEⅡ评分为（23．93±4．44）分、28 d病死率为61．1％、ICU住院时间为（19．05±4．0） d,均较 EVLWI ＜14 mL/kg组[APACHEⅡ评分为（18．58±3．66）分、28 d病死率为27．8％、ICU住院时间为（14．35±3．39）d]高（t＝3．941,χ2＝4．050,t＝3．797,均P＜0．01）;同时血清TNF-α为（85．28±18．25）μg/L、E-选择素为（74．07±14．57）μg/L,也较EVLWI＜14 mL/kg组[TNF-α为（63．27±20．28）μg/L、E-选择素为（40．99±16．35）μg/L]高（t＝3．422、5．847,均P＜0．01）;EVLWI≥14 mL/kg组氧合指数为（122．86±25．45）,较EVLWI＜14 mL/kg组的（156．77±37．58）低（t＝-3．170,P＜0．01）。两组中28 d内仍存活的20例患者（存活组）,在入组后经72 h积极治疗后EVLWI明显下降（Z＝-0．392,P＜0．01）,氧合指数较前升高（Z＝-3．845,P＜0．01）,且TNF-α、E-选择素水平均较前下降（t＝7．194、4．025,均P＜0．01）;而死亡组16例患者经72 h积极治疗后EVLWI、TNF-α、E-选择素水平较前无下降,氧合指数较前无改善,差异无统计学意义（均P＞0．05）。 EVLWI 与PVPI、EVLWI 与TNF-α、EVLWI与E-选择素均呈显著正相关（r＝0．605、0．649、0．549,均P＜0．01）?     

重组人血管内皮抑制素联合GP方案治疗晚期非小细胞肺癌

 【摘要】　目的　评价重组人血管内皮抑制素（商品名：恩度）联合吉西他滨加顺铂（GP）方案治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的疗效和安全性。方法　采用非随机同期对照的方法,以接受重组人血管内皮抑制素联合化疗的NSCLC患者32例为试验组,单纯GP方案化疗者40例为对照组。比较两组有效率（RR）、临床受益率（CBR）、肿瘤进展时间（TTP）、生活质量（QOL）及安全性。结果　试验组和对照组的总RR分别为40.6 %（13／32）和 20.0 %（8／40）,差异无统计学意义（χ2＝3.66,P＝0.07）,总 CBR分别为68.8 %（22 ／32）和42.5 %（17／40）,差异有统计学意义（χ2＝4.93,P＝0.034）,总的中位TTP分别为 5.2个月和3.9个月,差异有统计学意义（P＝0.042）。试验组与对照组不良反应的发生率差异无统计学意义（P＞0.05）。结论　重组人血管内皮抑制素联合 GP方案能明显提高晚期NSCLC的RR、CBR及中位TTP,安全性好,具有较好的临床应用前景。     

温度和pH对重组人血管内皮抑制素脱酰胺的影响

目的利用液质联用技术研究温度和pH对重组人血管内皮抑制素中天冬酰胺(Asn)脱酰胺过程的影响。方法在不同的温度和pH值条件下,对重组人血管内皮抑制素样品溶液进行孵化,酶解处理后利用液质联用技术识别发生脱酰胺的多肽并测定其含量随样品放置温度和pH条件的变化。结果质谱分析结果表明酶解产物中多肽SVWHGSDPNGR序列中的Asn发生了脱酰胺化,Asn残基生成了天冬氨酸和异天冬氨酸残基,其他位置的Asn均未检测出明显的脱酰胺化;实验获得了不同温度和pH条件下重组人血管内皮抑制素中Asn脱酰胺化的速率及动力学常数;Asn脱酰胺过程随着温度和溶液pH值的升高,Asn脱酰胺速率上升。结论重组人血管内皮抑制素中天冬酰胺的脱酰胺过程受储存温度和pH值影响,研究药用蛋白质在不同条件下的脱酰胺过程对于筛选合适的储存条件、减少活性损失具有重要意义。     

小鼠结肠癌中巨噬细胞金属弹力蛋白酶对血管抑素生成和肿瘤血管生长的影响

目的 在小鼠模型体内探讨巨噬细胞金属弹力蛋白酶(macrophage metalloelastase,MME)分解纤溶酶原生成有生物学功能的血管抑素的途径,及其对肿瘤生长和微血管密度(MVD)的抑制作用.方法 构建重组质粒pEGFP-C1-MME.给90只小鼠分别皮下接种稳定转染pEGFP-C1-MME(MME转染组)、空质粒pEGFP-C1(空质粒转染组)和未转染(未转染组)的CT-26细胞,每组30只.应用放射性碘标纤溶酶原及其示踪技术分析体内血管抑素的生成情况.结果 各组肿瘤标本进行SDS-PAGE电泳,在MME转染组电泳胶中,蛋白相对分子质量为35×103和38×103的区域放射性明显高于空质粒转染组和未转染组(P值均为0.00).Western印迹检测发现三组均检测出35×103和38×103片段表达,通过灰度扫描分析发现上述2个片断在MME转染组表达强度为9.32±1.52和5.61±2.24,明显高于空质粒组(2.47±0.23和0.67±0.12,P值均为0.00)和未转染组(1.21±0.69和0.86±0.44,P值均为0.00).MME转染组MVD平均值和血管内皮生长因子(VEGF)荧光表达强度均明显低于空质粒转染组和未转染组(P值均为0.00).MME转染组小鼠皮下种植瘤平均体积小于空质粒组和未转染组(P值均为0.00).结论 MME是与血管抑素生成密切相关的间质金属蛋白酶,同时具有抑制结肠肿瘤血管形成的作用.

Abstract：

Objective To determine the pathway of macrophage metalloelastase (MME)generate active angiostatin by decomposing plasminogen and its effect on inhibiting growth of tumor and microvessel density (MVD) in vivo in mouse models. Methods The recombined plasmid pEGFPC1-MME was constructed. Thirty mice were subcutaneously inoculated with CT-26 cells that were stably transfected with pEGFP-C1-MME (MME-transfected group), 30 with CT-26 cells transfected with empty vector pEGFP-C1 (vector-transfected group) and 30 with CT-26 cells (non-transfected group). Radioiodination and radioisotope tracer were used to explore the pathway of angiostatin generation in vivo. Results SDS-PAGE electrophoresis analysis revealed that, in the PAGE gel contained the protein with molecular weights of 35 000 and 38 000, radioactivity in MME-transfected group was significantly higher than vector-transfected and non-transfected groups (P = 0. 00).Western blotting analysis demonstrated two bands containing 35 000 and 38 000 fragments in three groups. Quantification of the protein signals by image analysis revealed that the levels of 35 000 and 38 000 fragments were obviously increased in MME-transfected group (9.32±1.52 and 5.61±2.24,respectively) than those in vector-transfected (2.47 ± 0.23 and 0. 67 ± 0. 12, respectively) and nontransfected (1.21±0. 69 and 0. 86 ± 0.44, respectively) groups (P= 0.00). The average value of MVD and fluorescent express of vascular endothelial growth factor (VEGF) were lower in MMEtransfected group when compared with those in vector-transfected and non-transfected groups (P =0.00). The average tumor size in MME-transfected group was small in comparison with vectortransfected and non-transfected groups (P= 0.00). Conclusions MME is demonstrated to be one of matrix metalloproteinase that closely related with angiostatin production and has inhibitory effect on tumor growth in tumor-bearing mice.     

腺相关病毒介导重组血管抑素联合雷公藤红素对大鼠颅内C6胶质瘤的抗血管生成作用

目的:腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的重组血管抑素(angiostatin,AS)联合应用雷公藤红素(celastrol)治疗大鼠颅内C6胶质瘤,观察其对肿瘤体积、新生血管密度及肿瘤细胞凋亡的影响,探讨抗血管生成重组基因联合雷公藤红素对胶质瘤治疗的前景。方法:建立颅内原位荷C6脑胶质瘤大鼠模型,7d后随机分为4组,分别给予0.9%氯化钠溶液(作为对照)、AAV-AS、雷公藤红素及两者联合用药。每隔7d行头部强化MRI检查,计算肿瘤体积。于22d后处死动物,检测AS蛋白表达、血管密度及肿瘤细胞凋亡情况。结果:联合治疗组及AAV-AS治疗组均检测到AS蛋白表达,证实基因转导成功。联合治疗组第22天时肿瘤体积、血管密度和凋亡指数均与对照组、雷公藤红素组及AAV-AS治疗组相比差异有统计学意义(P<0.05),联合治疗可以抑制肿瘤生长,降低新生血管密度,促进肿瘤细胞凋亡。结论:基因治疗联合雷公藤红素可通过抑制胶质瘤血管生成而抑制肿瘤生长;两者联合应用具有协同作用,可弥补两者单独应用的不足之处。     

重组腺相关病毒载体介导人血管抑素K1-5基因预防和治疗B16黑素瘤的实验研究

目的:研究重组腺相关病毒载体介导人血管抑素K1-5基因(rAAV-AG)对B16F0恶性黑素瘤细胞生长的影响。方法:观察rAAV-AG单次肌肉注射在预防肿瘤生长、血行转移及治疗肿瘤方面的不同作用;Western blot法定性检测血管抑素表达情况;免疫组化法检测肿瘤组织中的微血管密度(MVD);TUNEL法检测肿瘤凋亡细胞数。结果:rAAV-AG单次肌肉注射后第2周至实验结束时(~70 d)小鼠体内均有血管抑素表达;预防肿瘤生长抑瘤率为97%(P<0.01);预防肝、肺转移抑瘤率分别为37.5%(P<0.05)和47.7%(P<0.01);低、中、高剂量组治疗肿瘤抑瘤率分别为44%、61%和65%,小鼠中位生存时间分别为58 d6、6 d和68 d,与生理盐水组比较,低剂量组无显著性差异(P=0.06),中、高剂量组均有显著性差异(P<0.01);基因治疗各组肿瘤MVD减少,凋亡细胞数增加,与生理盐水组比较,统计结果与各组抑瘤率一致。结论:rAAV-AG单次肌肉注射能有效预防和治疗B16恶性黑素瘤的生长及血行转移,延长荷瘤小鼠的生存期;在一定剂量范围内其抑瘤效应呈剂量依赖性;抑瘤作用可能是通过抑制肿瘤血管生成、诱导肿瘤细胞凋亡来实现的。     

Angiostatin和Fas基因对人结肠癌的协同抑制作用

目的 探讨血管生成抑素Angiosmtin(AS)基因和Fas基因对人结肠癌细胞系LOVO的协同抑制作用.方法 构建pcDNA3-AS和pcDNA3-Fas质粒,用脂质体法分别将AS、Fas、AS和Fas基因转染体外培养的人结肠癌细胞系LOVO,用Western blot法检测目的 基因的表达,用MTT法检测转染AS和Fas基因对体外培养的人结肠癌细胞生长的影响.通过瘤内注射分别将AS、Fas、AS和Fas基因转染裸鼠皮下移植的人结肠癌肿瘤,检测首次基因转染后14 d肿瘤的大小.结果 基因转染后12、24、48和72h,Fas和AS共转染组及Fas组对人结肠癌LOVO细胞的抑制作用明显强于对照组(P＜0.01).质粒转染后14 d,Fas和AS共转染组小鼠的肿瘤体积明显小于对照组、Fas组和AS组(P＜0.05);Fas组和AS组的肿瘤体积明显小于对照组(P＜0.05).结论 AS和Fas基因对体内人结肠癌有协同抑制作用.     

hAG(K1～3)联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因真核表达质粒对裸胃癌皮下移植瘤的作用

目的 探讨hAG(K1-3)联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因在体内对裸鼠胃癌皮下移植瘤的生长抑制作用.方法 通过亚克隆法构建重组质粒pBud-hAG及pBud-hAC-TRAIL,将人胃癌细胞SGC-7901注射裸鼠皮下形成移植瘤,并将移植瘤小鼠随机分为实验组和对照组.实验组包括pBud-hAG组和pBud-hAG-TRAIL组,各5只;对照组包括空质粒(pBud)组和生理盐水组,各5只.然后分别将2种重组质粒分次多点注入实验组移植瘤体内,并与对照组比较,通过检测移植瘤的体积和肿瘤微血管密度(MVD)研究其对肿瘤生长抑制情况及对肿瘤血管密度的影响.结果 pBud-hAG组和pBud-hAG-TRAIL组移植瘤的MVD分别是(4.6±1.2)个/高倍视野(HP)和(4.8±0.9)个/HP(P>0.05),而pBud组和生理盐水组分别是(17.4 ±2.4)个/HP和(18.2±2.7)个/HP,实验组和对照组之间差异有统计学意义(P<0.05).pBud-hAG组和pBud-hAG-TRAIL组的sTRAIL和hAG mRNA及蛋白表达均为阳性,其移植瘤体积分别是(1.862 ±0.017)cm3和(1.325±0.012)cm3(P<0.05),而pBud组和生理盐水组分别是(3.637±0.032)cm3和(3.521 ±0.028)cm3,实验组与对照组差异有统计学意义(P<0.05).结论 hAG(K1-3)通过抑制血管内皮细胞的生长而抑制肿瘤血管的生成,而TRAIL则通过诱导肿瘤细胞凋亡,从而抑制肿瘤细胞生长,因此hAG(K1-3)联合TRAIL具有更强的抗肿瘤作用.     

血管抑素和内皮细胞抑制素在血管增生性皮肤病中的表达及意义

目的 分析不同类型血管增生性皮肤病中血管抑素（AS）和内皮细胞抑制素（ES）的表达情况。方法 选取毛细血管瘤、海绵状血管瘤、蔓状血管瘤、化脓性肉芽肿病理切片43份,新鲜组织19份,正常皮肤作为对照,分别作免疫组化及荧光定量PCR检测AS与ES在不同组织中的分布与表达水平。 结果 AS、ES在各组织血管内皮细胞胞质及胞膜上均有一定的表达,毛细血管瘤中AS和ES的阳性细胞率分别为（15.77 ± 5.92）%,（19.35 ± 7.81）%,基因表达量分别是正常皮肤的2.4和2.7倍;其他各型血管增生性病变与正常组织的表达量比较,差异无统计学意义。 结论 AS、ES在毛细血管瘤内高表达,提示二者可能通过特异性作用于增殖活跃的血管瘤内皮细胞,在血管瘤的发病机制中发挥一定的生物学作用。