Molecular and Phylogenetic Characterization of Novel Papillomaviruses Isolated from Oral and Anogenital Neoplasms of Japanese Macaques (Macaca fuscata)

Papillomaviruses (PVs) are a diverse group of host species-specific DNA viruses, etiologically linked with various benign and malignant neoplasms of cutaneous and mucosal epithelia. Here, we describe the detection and characterization of the first two PVs naturally infecting Japanese macaques (Macaca fuscata), including the determination of their etiological association(s) with the development of original neoplasms. The molecular and phylogenetic analyses were performed on complete genome sequences of Macaca fuscata PV types 1 (MfuPV1) and 2 (MfuPV2), which were completely sequenced in samples of a malignant oral tumor and benign anogenital neoplasm of Japanese macaques, respectively. Subsequently, two type-specific quantitative real-time PCRs were developed to estimate viral loads of MfuPV1 and MfuPV2 and to evaluate their etiological roles. The in silico molecular analyses revealed that both viral genomes encode characteristic PV proteins with conserved functional domains and have a non-coding genomic region with regulatory sequences to regulate and complete the viral life cycle. However, additional experimental evidence is needed to finally confirm the presence and biological functionality of the molecular features of both novel PVs. While MfuPV1, together with PVs identified in other macaques, is classified into the Alphapapillomavirus (Alpha-PV) species 12, MfuPV2 is most likely a representative of the novel viral species within the Alpha-PV genus. Their relatively high viral loads suggest that both PVs are etiologically linked with the development of the original neoplasms.     

荧光原位杂交检测宫颈上皮脱落细胞人端粒酶基因表达与人乳头瘤病毒的临床应用

目的研究宫颈癌人端粒酶基因(TERC)的表达情况和宫颈癌人乳头瘤病毒(HPV)感染的相关性,评估荧光原位杂交(FISH)技术检测TERC基因的表达对子宫颈上皮内瘤样病变(CIN)发展到宫颈癌的预测价值。方法采用FISH技术进行子宫颈上皮脱落细胞TERC基因的检测,实验对象81例,病理正常组20例,CIN1组28例,CIN2组12例,CIN3组9例,宫颈癌组12例。同时利用实时荧光定量聚合酶链反应技术(FQPCR)检测这81例病人的HPV(16/18)感染情况。并进行宫颈癌与TERC基因和HPV的相关性分析。结果在不同病理分组中TERC基因检测和HPV检测的阳性率差异有统计学意义(P<0.05),TERC基因检测的阳性率在不同病理分组中的差异有统计学意义(P<0.05),HPV的阳性率在不同病理分组中的差异也有统计学意义(P<0.05),恶性程度越高差异越显著(P<0.01);宫颈癌组TERC基因异常表达阳性率是100%,HPV为91.7%。结论 TERC基因异常表达与宫颈癌的发生发展及HPV感染密切相关。TERC基因和HPV联合检测,有助于提高宫颈癌的早期诊断有重要价值。     

锌指蛋白A20和NF-κB在皮肤鳞状细胞癌的表达及其与人乳头状瘤病毒感染的关系

目的 探讨皮肤鳞状细胞癌（皮肤鳞癌）组织中锌指蛋白A20、核因子κB（NF-κB）的表达及其与人乳头状瘤病毒（HPV）感染的关系。 方法 收集43例皮肤鳞状细胞癌和21例健康人皮肤组织,利用基因芯片法检测21种HPV亚型,免疫组化法检测锌指蛋白A20和NF-κB表达水平,分析临床病理特征及其与HPV感染的关系。 结果 锌指蛋白A20、NF-κB的表达水平在皮肤鳞癌患者不同年龄、性别、肿瘤原发部位和组织学分级组间差异均无统计学意义（P ＞ 0.05）;皮肤鳞癌临床不同分期组间锌指蛋白A20、NF-κB的表达水平（Ⅰ + Ⅱ级组39例和Ⅲ级组4例锌指蛋白A20分别为25.85 ± 3.84和48.34 ± 7.69,NF-κB分别为46.64 ± 8.93和57.34 ± 10.02）以及有无淋巴结转移组间（有转移组3例和无转移组40例锌指蛋白A20分别为35.34 ± 6.02和26.51 ± 4.09,NF-κB分别为57.53 ± 13.32和45.45 ± 9.64）差异均有统计学意义（P ＜ 0.05或 ＜ 0.01）。在低危型HPV、高危型HPV、高危型/低危型混合感染的皮肤鳞癌组织中,A20表达分别为8例中2例、13例中5例和3例中1例阳性,NF-κB p65表达分别为3、10和2例阳性,经Fisher精确概率法计算,NF-κB p65与A20在3组中表达的阳性率差异均无统计学意义（P > 0.05）。HPV感染的鳞癌组织中锌指蛋白A20和NF-κB p65染色积分呈显著正相关（r = 3.14,P ＜ 0.05）。 结论 A20与NF-κB高表达在HPV感染致皮肤鳞癌形成过程中发挥了重要的作用。     

p73第2外显子第4和14位基因多态性与人乳头状瘤病毒易感性的相关性研究

【摘要】 目的 探讨人乳头状瘤病毒（HPV）易感性与p73基因第2外显子第4和14位碱基多态性的相关性。 方法 收集南京地区尖锐湿疣患者83例、Bowen样丘疹病患者11例的皮损和血样,以在性病门诊进行健康体检的性病高危人群150例为阴性对照,采用直接测序法检测皮损中感染的HPV-DNA序列,并在Genbank Blast上进行比对,鉴定HPV型别,抽提尖锐湿疣和Bowen样丘疹病患者以及阴性对照组的血样DNA,以shP73引物对p73基因片段进行扩增和测序,检测患者和阴性对照组的p73第2外显子第4和14位基因的多态性,分析HPV易感性和宿主p73基因多态性之间的相关性。 结果 83例尖锐湿疣患者皮损中HPV-6型35例占42.2%,HPV-11型34例占41.0%;11例Bowen样丘疹病患者皮损中HPV-16型5例（5/11）,HPV-6型3例（3/11）。p73基因多态性检测,83例尖锐湿疣患者血样测序阳性83例,11例Bowen样丘疹病患者血样测序阳性11例,对照组150例血样测序阳性132例。与对照组相比,三种基因型中,A4T14/A4T14 基因型感染HPV患尖锐湿疣（OR = 4.89,95% CI = 1.50 ~ 15.91）或Bowen样丘疹病（OR = 7.11,95% CI = 1.144 ~ 44.20）的风险更高。G4C14/G4C14基因型与其他两种基因型相比,感染HPV后患Bowen样丘疹病的风险较低（OR = 0.16,95% CI = 0.04 ～ 0.65）。 结论 p73第2外显子携带A4T14基因增加了Bowen样丘疹病和尖锐湿疣的患病风险,但其第4和14位碱基的多态性与罹患高危型与低危型HPV之间并无明显的相关性。     

宫颈人乳头瘤病毒联合液基细胞学检测在宫颈疾病筛查中的价值分析

目的 探讨宫颈人乳头瘤病毒(HPV)和液基细胞学(TCT)检测在不同级别宫颈病变筛查中的临床应用价值。 方法 选取就诊于该院妇科门诊的5 419例患者同时行HPV和TCT检测,对HPV阳性或(和)TCT检测异常,或HPV和TCT检测正常但妇检高度可疑病变的1 936例患者予以阴道镜下宫颈组织活检并行病理检查。根据HPV、TCT检测及阴道镜活检病理结果分析,比较HPV、TCT检测在宫颈病变筛查中的价值。结果 5 419例患者中,HPV感染率为20%,感染率由高到低的前五种亚型依次为HPV16、52、18、58、53；>30～≤40岁组HPV感染率最高；TCT阳性率随年龄段增长而升高；HPV感染率随TCT分级升高而升高；HPV联合TCT检测灵敏度为99.23%,特异度为62.05%,单独使用HPV检测的灵敏度为72.43%,特异度为56.56%,单独使用TCT检测的灵敏度为73.51%,特异度为47.09%。结论 HPV联合TCT检测在宫颈病变筛查中具有较高的灵敏度和特异度,值得临床推广应用。     

HPV病毒检测联合液基细胞学和鳞状细胞癌抗原检测在筛查宫颈癌中的价值

目的探讨HPV病毒阳性患者联合应用液基细胞学检测(TCT)、鳞状细胞癌抗原检测(SCCAg)检测在筛查宫颈癌中的价值。方法 1125例常规门诊体检HPV病毒阳性的患者,按照1:1:1比例随机分为三组(TCT组、SCC-Ag组和TCT+SCC-Ag组),所有患者行阴道镜检查并取活检,以病理诊断为金标准,计算各组筛查宫颈癌的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测者,评价各方法的诊断价值。结果 TCT联合SCC-Ag筛查宫颈癌的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测者分别为0.68、0.96、0.89和0.85,与单独TCT筛查宫颈癌相比,有明显优越性,差异有统计学意义(P0.05)。结论 HPV病毒检测联合TCT和SCC-Ag明显降低筛查宫颈癌的假阳性率,提高特异度和诊断符合率,在宫颈癌筛查中有推广价值。     

尖锐湿疣患者外周血Toll样受体7、髓系分化因子88、肿瘤坏死因子受体相关因子6的表达

【摘要】 目的 探讨Toll样受体7（TLR7）及其相关信号转导分子在人类乳头瘤病毒（HPV）感染和尖锐湿疣复发机制中的作用。方法　用双色免疫荧光抗体染色流式细胞仪检测30例健康人、35例初发尖锐湿疣患者,32例复发尖锐湿疣患者和30例使用咪喹莫特联合氨基酮戊酸光动力疗法（ALA-PDT）治疗的复发性尖锐湿疣患者外周血不同亚群T细胞内TLR7的表达,使用SPSS 13.0软件进行t检验。用Western印迹方法检测各组尖锐湿疣患者及健康人外周血CD3+ T细胞内接头蛋白MyD88及相关信号分子TRAF6、PI3K、AKT、p42/44和核因子κB（NF-κB）等表达的变化。结果　健康人外周血CD3+ CD4+ T细胞和CD3+CD8+ T细胞内均可检测到TLR7的表达。与健康对照组比较,初发和复发尖锐湿疣患者外周血CD3+CD8+ T细胞内TLR7的表达水平无显著改变,而CD3+CD4+ T细胞内TLR7的表达明显增加（健康对照组为12.6% ± 6.3%,初发尖锐湿疣组为23.3% ± 8.4%,t = 4.72,P ＜ 0.01;复发尖锐湿疣组为32.8% ± 8.9%,t = 10.76,P ＜ 0.01）;与复发尖锐湿疣患者比较,咪喹莫特联合ALA-PDT治疗组尖锐湿疣患者外周血CD3+CD4+ T细胞内TLR7的表达水平显著降低（20.3% ± 5.7%,t = 5.41,P ＜ 0.01）。初发和复发尖锐湿疣患者外周血CD3+ T细胞内MyD88、TRAF6、PI3K、p42/44和NF-κB蛋白表达显著增加,而AKT蛋白表达变化不明显;咪喹莫特联合ALA-PDT治疗组尖锐湿疣患者外周血CD3+ T细胞内MyD88、TRAF6、p42/44和NF-κB蛋白表达显著降低。结论　尖锐湿疣患者外周血CD3+CD4+ T细胞内表达上调的TLR7可作为HPV病毒感染的识别受体,参与机体的抗HPV免疫应答。 【关键词】 尖锐湿疣; α乳头状瘤病毒属; Toll样受体7; T淋巴细胞; 肿瘤坏死因子受体相关肽和相关蛋白质类; 髓系分化因子88     

人乳头瘤病毒分型联合液基细胞学检测在宫颈病变筛查中的意义

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)分型联合细胞学检测在子宫颈病变筛查中的意义。方法收集疑似宫颈病变患者408例,分别进行细胞学和HPV基因芯片分型检测,了解各亚型HPV感染率及其与细胞学结果的相关性,判断HPV感染与年龄的关系,进行统计学分析。结果在高危型感染中居于前3位的分别是HPV 16、58、52。单一高危型HPV感染率随宫颈病变级别升高呈增加趋势,且差异有统计学意义(r=0.879,P0.05)。高危型HPV感染率在年龄分布上呈两端高的趋势(25岁和50岁),但各年龄组间差异无统计学意义。结论 HPV分型检测宜联合细胞学应用于宫颈病变的筛查及临床治疗和随访。     

人乳头瘤病毒载量和人端粒酶RNA组分基因与子宫颈病变的关系

目的研究子宫颈脱落细胞中人乳头瘤病毒（HPV）载量和人端粒酶RNA组分（hTERC）基因的表达与子宫颈上皮内瘤样病变（CIN）之间的关系。方法北京大学深圳医院子宫颈癌早诊早治中心诊断CINⅠ、CINⅡ/Ⅲ及浸润癌的患者分别为105例、59例、10例,并以51例非CIN（病理正常或炎症）者为对照。所有研究对象均取宫颈脱落细胞行HC-Ⅱ法高危型HPV（HR-HPV）和检测荧光原位杂交（FISH）法hTERC基因检测。结果 （1）根据组织学结果分为非CIN、CINⅠ、CINⅡ/Ⅲ和浸润癌组,各组HPV的阳性率分别为58.82%、67.62%、98.31%和100.00%,组间差异有统计学意义（P〈0.01）;非CIN、CINⅠ、CINⅡ/Ⅲ和浸润癌组病毒载量均值分别为135.67、345.04、535.08和612.62,CINⅡ/Ⅲ和浸润癌组的HPV病毒载量均值高于非CIN组（P〈0.05）。随着病变程度加重,HPV阳性率和病毒载量均增加。（2）非CIN、CINⅠ、CINⅡ/Ⅲ和浸润癌组hTERC扩增率分别为3.92%、5.71%、57.63%和90.00%,各组间hTERC差异存在统计学意义（P〈0.01）;在CINⅡ/Ⅲ及浸润癌组hTERC扩增率显著增高,为非CIN和CINⅠ的10～15倍。各组hTERC扩增均数分别为6.50、9.00、17.81、36.50,扩增均数随病变加重明显升高,CINⅠ与非CIN组之间差异无统计学意义（P〉0.05）,其余各组间差异均有统计学意义（P〈0.01）。CINⅡ/Ⅲ及浸润癌组hTERC扩增均数为非CIN和CINⅠ的2～4倍。（3）hTERC扩增在HPV阳性与阴性组分别为28.99%与3.57%,两组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;非CIN组51例中,不伴有HPV感染的21例无hTERC扩增;CINⅠ与CINⅡ/Ⅲ组不伴HPV感染者各仅有1例hTERC扩增。结论 HPV载量和hTERC扩增均与CIN病变程度密切相关;hTERC扩增主要发生在HPV阳性病例,且与高度宫颈上皮内瘤变的关系更为密切,有望作为早期子宫颈癌及癌前病变的生物学标记物。     

Relationship between polymorphisms in the FAS/FASL death receptor system and progression of low-grade precursor lesions infected with high-risk human papilloma virus

Squamous intraepithelial lesions (SIL) and cervical cancer are primary due to suboptimal immune response against human papillomavirus (HPV). The FASL/FAS system is a trigger of extrinsic pathway apoptosis. The distribution of polymorphisms rs1800682 (−670 A > G) FAS and rs763110 (−844C > T) FASL was studied in cervical smears from 372 females (182 with stable or regressed low-grade SIL (LSIL) (groupI) and a group of 190 high-grade SIL (HSIL) (groupII). No significant differences were observed for rs1800682 in FAS between the study groups. In contrast, rs763110 CC genotype of FASL was found in 35.7% of group I females, and in 50.5% of group II (p = 0.0027; OR = 1.83 (95% CI = 1.21–2.79)). When only females infected with high-risk HPV were analysed, these differences were even higher (p = 0.0024; OR = 2.21 (95% CI = 1.30–3.75)). CC genotype in FASL seems to be associated with increased risk of LSIL to HSIL progression suggesting a role in HPV tolerance, persistent infection, and HSIL development.