母血中胎儿有核红细胞的荧光原位杂交法在产前诊断中的可行性探讨

探讨荧光原位杂交法（FISH）对母血中胎儿有核红细胞（NRBC）进行无创性产前诊断的可行性。20例孕龄15-20周的孕妇外周血经不连续密度梯度离心、制片、显微镜下识别并共计数NRBC及定位，然后行Y染色体的FISH检测。结果发现10例孕男性胎儿的孕妇外周血细胞涂片中每例均有阳性杂交信号出现；阳性率为60％（24/40）。10例孕女性胎儿的孕妇外周血细胞涂片中1例出现阳性杂交信号；阴性率为95％（38/40），假阳性率仅为5％（2/40）。结果提示FISH法对于用母血中分离到的胎儿细胞进行染色体异常的无创性产前遗传学检查具有重要意义。     

慢性胎儿窘迫孕妇外周血中有核红细胞检测结果分析

目的探讨孕妇外周血中有核红细胞(nucleatedredbloodcells,NRBC)计数与慢性胎儿窘迫的关系。方法对57例年龄22～32岁,孕周32～41周之间的孕妇外周血进行NRBC计数,其中慢性胎儿窘迫组21例,正常妊娠组36例,并采集新生儿脐动脉血行血气分析。结果慢性胎儿窘迫组外周血中NRBC计数为(9.87±4.03)个/3ml,明显高于正常妊娠组的(4.05±1.88)个/3ml(P<0.01)。66.7%(14例)慢性窘迫组新生儿Apgar评分≤7分,显著高于正常组的8.3%(3例)(P<0.01);慢性窘迫组的脐动脉血血气分析结果pH,PO2,PCO2值与正常组比较亦有显著性差异(P<0.01)。结论慢性胎儿窘迫孕妇外周血中NRBC计数明显升高,可作为临床辅助监测指标之一。     

脐血有核红细胞数量与胎儿/新生儿围产期缺氧的关系

目的 探讨新生儿脐血中有核红细胞(NRBC)数量与胎儿/新生儿围产期缺氧的关系(HIBD).为探索评价胎儿/新生儿围产期缺氧的新方法提供实验依据.方法 取脐动脉血涂片染色显微镜下进行血分析和NRBC的计数,对80例围产期缺氧的新生儿(足月单胎急性胎儿窘迫28例,足月单胎慢性胎儿窘迫34例,单胎早产儿18例)与对照组38例(正常单胎足月儿23例,单纯单胎早产儿15例)进行NRBC百分数及绝对值的比较.结果 足月单胎慢性胎儿窘迫组脐血NRBC的数量为15.81±5.55/100个白细胞,绝对值为2.07±0.58×109/L,对照组分别为2.46±1.38/100个白细胞;绝对值为0.90±0.81×109/L;足月单胎急性胎儿窘迫组脐血NRBC数量为2.79±1.03/100个白细胞绝对值为1.16±0.41×109/L.缺氧早产儿组脐血NRBC为17.78±5.95/100个白细胞,绝对值为2.07±0.82×109/L,单纯早产儿组脐血NRBC为2.80±1.84/100个白细胞,绝对值为0.65±0.57×109/L.结论 1)脐血NRBC的数量可提示足月儿和早产儿围产期缺氧状况.2)围产期慢性缺氧可引起胎儿/新生儿脐血中的NRBC数量显著增加;围产期急性缺氧脐血中NRBC数量无明显增加;3)脐血NRBC的数量与胎儿/新生儿围产期缺氧程度和缺氧发生时间及持续时间长短有关.     

孕妇外周血中胎儿有核红细胞数量与妊娠高血压综合征的关系

目的 探讨孕妇外周血中胎儿有核红细胞数量（fetal nucleated red blood cells，FNRBC）数与妊娠高血压综合征的关系。方法 对128名孕龄32～42周，年龄24～35岁的孕妇外周血进行单密度梯度离心，对分离后的细胞进行制片、染色，显微镜下进行FNRBC计数，比较组间差异。结果 38名正常妊娠组孕妇外周血中FNRBC数目为（6．4667±2．5141）个／5ml，36名轻度妊高征组孕妇外周血中FNRBC数目为（9．5300±2．3286）个／5ml，28名中度妊高征组孕妇外周血中FNRBC数目为（13．7100±4．0286）个／5ml，26名重度妊高征组孕妇外周血中FNRBC数目为（31．5000±9．4086）个／5ml。四组间比较P值均小于0．05。结论 妊高征组孕妇外周血FNRBC数目明显升高，为妊高征的临床预测和评估提供了一条新思路。     

获取母血中纯化胎儿有核红细胞行产前基因分析

目的　探讨获取母血中纯化胎儿细胞的有效方法。方法　对 6 0名孕龄 7～ 40周、年龄 2 1～ 30岁的孕妇外周血进行不连续密度梯度离心 ,将分离后的细胞进行制片 ,显微镜下行显微操作分离胎儿有核红细胞 ,进行 Y染色体特异性DYZ1基因的聚合酶链反应 (PCR)。结果　 (1)早孕期母血中胎儿 NRBC检出率为 2 0 % ,中孕期母血中胎儿 NRBC检出率为 71.4% ,晚孕期母血中胎儿 NRBC检出率为 6 .6 5 % ,三者之间有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;(2 )用显微操作技术获得的胎儿细胞数量已满足 PCR扩增所需的模板量 ,对胎儿性别进行预测 ,男胎符合率为 11/ 13(84.6 % ) ,性别符合率为 2 6 / 2 8(92 .9% )。结论　不连续密度梯度离心合并显微操作技术对于无创性早期产前基因诊断意义重大。     

孕妇外周血中胎儿有核红细胞的富集纯化及在产前诊断中的应用

孕妇外周血中的胎儿细胞主要有三种:滋养叶细胞、有核红细胞和淋巴细胞。最适于富集纯化用于产前诊断的是胎儿有核红细胞。密度梯度离心富集结合胎儿有核红细胞特异性抗原标记CD71,γ珠蛋白阳性选择和白细胞抗原CD45阴性选择纯化是目前从孕妇外周血中分离胎儿有核红细胞的理想方法。已用于产前诊断胎儿性别和一些疾病。     

CD71和HbF用于流式细胞仪分选母血中的胎儿细胞

目的:比较CD71单染、HbF单染和CD71、HbF双染对单个核细胞的标记情况,同时探讨孕妇外周血中胎儿有核红细胞的含量与孕周的关系。方法:选用红细胞特异性抗体CD71、HbF对正常孕妇外周血和胎儿脐血单个核细胞进行标记,并结合流式细胞仪对有核红细胞进行分选。结果:用CD71和HbF进行双染色标记,正常孕妇和脐血单个核细胞的阳性标记率明显低于CD71和HbF单染色标记(t检验P<0.01)。孕早中期胎儿NRBC比例随孕周的增加呈上升趋势,至21~24周比例最大,约为1.92±0.84×10-2。结论:采用CD71和HbF双染色标记,可提高NRBC的特异性标记和分选纯度,分选胎儿细胞的最佳时间应在孕21~24周。     

基于免疫磁珠法的不同筛选方案对胎儿有核红细胞富集效果的比较

目的：将密度梯度离心(density gradient centrifugation,DGC)与免疫磁珠法(magnetic-activated cell sorting,MACS)相结合,应用4种不同的筛选方案,对脐血中的胎儿有核红细胞(fetal nucleated red blood cells,FNRBC)进行分离,评估不同策略富集FNRBC的效果。方法：对10例脐血标本(12 mL/例)按4种不同方案进行筛选：DGC;DGC⁺MACS阴性筛选(CD45^-);DGC⁺MACS阳性筛选(CD71⁺);DGC⁺MACS阴性/阳性筛选(CD45-/CD71⁺)。通过细胞计数板计数,K-B染色后显微镜下人工FNRBC计数,从获得总细胞量、FNRBC量和FNRBC比例经t检验后评估不同方案富集FNRBC的效果。结果：(1)与其他3组相比,DGC方案可获得的总细胞量(0.95×10⁷/mL)最多,FNRBC数量(39.87/mL)最多,F...     

孕妇外周血中胎儿细胞及胎儿DNA的检测

目的　建立从孕妇外周血中分离有核红细胞 (NRBC)及DNA的可靠方法 ,并鉴定其来源。方法　对88例孕妇外周血分别通过密度梯度离心法 ,流式细胞术 (FCM )和荧光激活细胞分离技术 (FACS)分离NRBCs。应用套式PCR技术对 6 5例孕妇血浆DNA进行正常男性SRY基因检测。结果　①NRBCs:2 7例样品经密度梯度离心 ,其中 14例分选到 1～ 10个NRBCs。FACS技术对 6 1例样品进行转铁蛋白受体阳性细胞 (CD71+ )分选 ,所有样品均有CD71+ 细胞 ,其浓度为 (0 35± 0 2 5 )× 10 -2 。②胎儿DNA :4 6例怀男胎孕妇血浆DNA中SRY基因检测出率为 6 5 2 2 % (30 / 4 6 ) ,怀女胎的 19例样品SRY基因未检出率为 94 74 % (18/ 19)。结论　从孕妇外周血中分选胎儿NRBCs和血浆中胎儿DNA的方法已取得较大进展。利用母血中胎儿细胞及DNA诊断遗传性疾病可望成为最佳非创伤性产前诊断技术     

再生障碍性贫血外周血出现有核红细胞的临床意义探讨

观察396例再生障碍性贫血（AA）,28例外周血出现有核红细胞（Eb1）,重型再障（SAA）11例,慢性再障（CAA）17例。作者将Eb1（＋）AA与Eb1（－）AA病人临床特点和实验室指标进行比较,发现Eb1（＋）SAA较Eb1（－）SAA有更低的Hb值。腔道出血、败血症的发生率及死亡率较高,Eb1（＋）CAA较Eb1（－）CAA有更高的网织红计数（Ret）,骨髓多为增生活跃,红系比例偏高,治愈率亦高。并对Eb1在AA中出现的机理作了探讨。