布鲁氏菌病感染与免疫研究近况(续前)

3 布氏菌在单核细胞内生存、繁殖和感染的可能因素 我们知道,布氏菌是胞内寄生菌,主要寄生于机体的单核细胞(包括巨噬细胞)内,在胞内生存、繁殖后才能发挥其在体内的致病作用。因此,将布氏菌能在胞内寄生能力视为其致病基础。3.1 不同血清对布氏菌调理及在胞内生存的作用血清对细菌调理吞噬作用的影响是肯定的,尤其     

壳聚糖与疫苗的黏膜递呈

具有良好生物相容性及生物降解性的壳聚糖已用于眼、口、鼻和生殖道黏膜的药物递呈以及DNA转染的研究。壳聚糖成本低，很容易制备成微粒，加栽容量大，具有与蛋白和DNA结合率高的特点，是疫苗黏膜递呈的首选对象。先进的微粒药物递呈系统的研究为壳聚糖用于抗原和药物的黏膜递呈开创了新思路，壳聚糖及其相关的最新研究在口腔防龋DNA疫苗和口腔药物递呈中有广阔的应用前景。本文就壳聚糖的特性、微粒的制备、黏膜递呈和免疫佐剂作用进行综述。     

黏膜免疫无毒性重组肠毒素嵌合蛋白诱导的免疫应答和免疫记忆

研究证实，经胃、鼻腔、阴道或皮肤免疫以霍乱毒素（CT）为代表的黏膜免疫佐剂可诱导机体产生对抗原的黏膜和系统免疫应答。美国布法罗大学Gockel等以变异链球菌表面蛋白AgⅠ／Ⅱ的唾液结合区（SBR）为抗原，以CT及其亚单位（CTB和CTA2／B）为佐剂，通过基因嵌合（构建无毒性的SBR—CTA2／B嵌合蛋白）、     

现代免疫佐剂研究

佐剂在广义上是指通过特异性或非特异性免疫增强作用提高血清中疫苗抗原特异性抗体水平的物质。可溶性纯化蛋白质疫苗或蛋白质亚单位疫苗的免疫激活作用通常较弱，不足以刺激机体产生足够的抗体，因此通常在疫苗制剂中加入佐剂。与单独应用抗原相比，抗原与佐剂联合应用所需的抗原量较少，机体产生的抗体量较多，并且还可以减轻免疫耐受。     

用PCR体外定点突变技术诱导霍乱毒素A亚基突变体的构建

目的： 有效去除霍乱毒素Ａ 亚基（ ＣＴ Ａ） 的毒性作用而保存其佐剂性能。方法： 采用ＰＣＲ 体外定点突变技术（ＰＣＲ ＳＤＭ） ,设计两对引物,引入一个突变位点,通过重叠延伸法两次ＰＣＲ 扩增,使ＣＴ Ａ 编码基因第６３ 位密码子由ＣＴＣ 突变为ＴＴＴ,亦将扩增片断克隆入ＰＵＣ１９ 载体。结果： ＤＮＡ 测序结果表明在预期位点已发生突变,用ＰＣＲ 诱导成功ＣＴ Ａ 突变体。结论： ＰＣＲ 诱导突变准确、简便,为深入研究ＣＴ 免疫佐剂的作用打下了基础     

牙周炎基因疫苗佐剂IL⁃15对SD大鼠肠系膜淋巴结B细胞增殖的影响

目的：观察牙周炎疫苗佐剂白细胞介素?15（interleukin?15,IL?15）对SD大鼠肠系膜淋巴结B淋巴细胞增殖的影响,初步探讨用IL?15提高基因疫苗免疫效应的可能性。方法：将牙周炎基因疫苗pVAX1?HA2?FimA/IL?15（A组）、pVAX1?HA2?FimA（B组）和生理盐水（C组）鼻滴免疫SD大鼠,采用磁珠分选法分离纯化肠系膜淋巴结B细胞,CCK?8法检测B细胞的数量,RT?qPCR法检测CKs2基因相对表达量变化,ELISA法检测培养液中特异性IgA的表达水平。结果：A组B细胞增殖水平高于B组和C组（P < 0.05）;A组B淋巴细胞CKs2 mRNA相对表达量稍高于B组,但差异无统计学意义（P＞0.05）。A组B淋巴细胞分泌的特异性IgA水平均高于B、C组（P＜0.05）。结论：IL?15是一种有效的基因疫苗佐剂,使用本课题组构建的牙周炎基因疫苗能够促进B细胞增殖,进而提高特异性IgA抗体的表达水平。     

免疫佐剂治疗慢性乙型肝炎的临床研究

目的 探讨免疫佐剂治疗慢性乙型肝炎（CHB）的疗效。方法 以免疫佐剂疗法为治疗组（120例），抗乙肝免疫核糖核酸为对照组（80例），进行前瞻性、多中心临床研究。采用续贯随机分组方法将入选200例慢性乙型肝炎患进行为期6mo的治疗。结果 免疫佐剂疗法中的治疗组的HBsAg、HBeAg、HBV DNA及HBV DNA与HBeAg双阳性患的阴转率分别达5．0％、19．1％、19．1％与18．3％，明显高于对照组（P＜0．01）。结论 免疫佐剂疗法可能是治疗慢性乙型肝炎安全有效的治疗方法，值得进一步研究。     

CpG-ODN免疫学功能及其应用研究

近年来研究表明,细菌DNA与人工合成的寡核苷酸含有非甲基化的CpG基序,均能激活机体的免疫系统、诱导和增强天然免疫和获得性免疫反应,尤其显示出有效的T_(h1)型免疫佐剂效应,在某些感染性疾病、过敏性疾病和肿瘤等的防治中具有重要的应用前景。本文就近年来关于CpG-ODN的免疫学效应以及CpG-ODN在疫苗研制中的应用等问题进行综述。     

小鼠IFN-γ基因的克隆及其分子佐剂作用的研究

目的通过融合表达小鼠IFN-γ（MuIFN-γ与猪脑心肌炎病毒（EMCV）结构蛋白VP1研究MuIFN-γ的分子佐剂作用。方法通过RT-PCR克隆IFN-γ的成熟肽基因，从pGEX-6p-1／vp1中亚克隆猪脑心肌炎病毒（EMCV）抗原基因VP1，分别构建原核表达菌株pET32-a／VP1／Rosetta（DE3）和pET32-a／VP1／MuIFN-γ，将VP1及VP1与MuIFN-γ在宿主菌Rosetta（DE3）中进行表达与共表达。将表达的VP1及MuIFN—γ／VP1蛋白分别免疫BALB／c小鼠。每次免疫2周后采血，分离血清，利用ELISA测定抗体效价。结果表达的VP1蛋白分子量为60kD，共表达蛋白MuIFN—γ/VP1分子量为73kD，VP1及MuIFN—γ／VP1蛋白免疫小鼠测定的抗体效价分别为1：32000和1：128000。结论表达的VP1蛋白具有良好的免疫原性，可刺激免疫小鼠产生明显的体液免疫反应。MuIFN—γ/VP1免疫小鼠后产生的佐剂效果要强于弗氏佐剂。MuIFN-γ/VP1蛋白能增强小鼠的体液免疫水平，MuIFN—γ具有一定的分子佐剂效应。