肝细胞核因子6在小鼠肝内胆管发育过程中的表达

目的 探讨肝细胞核因子6(HNF6)在肝内胆管发育过程中的作用. 方法 用RT-PCR及免疫组织化学等方法 检测HNF6在小鼠胚胎发育的各个阶段以及成年肝中的表达. 结果 RT-PCR结果 显示,HNF6 mRNA的表达在E9d开始出现,与肝芽形成的时间吻合,E13d HNF6 mRNA的表达消失,E15d又重新出现,并一直维持到出生.免疫组织化学显示,CK19免疫反应在E13d开始出现,此时免疫反应阳性细胞在肝索内散在分布.E15d时在近肝门处的门管区丌始出现由单层的、CK19阳性细胞组成的胆管板,之后,阳性细胞反应主要分布于胆管板和小叶间胆管.E9～11d,多数肝索细胞呈HNF6阳性反应,E13d的肝索中未观察剑HNF6的表达.E15～17d,HNF6阳性反应的分布与CK19相似,成年小鼠肝的胆管上皮细胞仍呈HNF6阳性反应. 结论 HNF6可能与肝干细胞的特化关系不大,而与肝发育的启动、肝干细胞向胆管上皮细胞的分化及其分化状态的维持有关.     

多重RT-PCR检测儿童急性髓细胞性白血病融合基因的临床与实验研究

目的研究儿童急性髓细胞性白血病(AML)染色体畸变所形成融合基因的临床和实验关系。方法采用多重巢式RT_PCR方法对38例儿童AML的融合基因联合染色体核型分析、免疫表型、临床资料进行研究。结果38例儿童AML中有23例(60.53%)具有4种融合基因:MLLex7/AF9、TLS/ERG、AML1/ETO、PML1RARα。8例患儿有HOX11原癌基因活化,7例为单纯表达HOX11原癌基因活化,1例同时伴有其他融合基因表达。伴AML1-ETO、PML-RARα的20例患儿中接受化疗的11例全部达CR,且无复发。结论基因分型是儿童AL最精确的分型方法,为临床化疗提供方向:AML表达HOX11者预后不良;伴MLL基因重排者预后极差。采用多重RT-PCR方法可快速同时检测儿童急性白血病29种染色体畸变所形成的融合基因,完善白血病的MICM分型、指导临床个体化治疗。     

3种重要虫媒病毒的RT-PCR检测

目的：建立快速、敏感、特异的虫媒病毒RT-PCR检测方法。方法：采用改进的核酸制备方法，分别从感染的乳鼠脑和细胞培养上清液中提取病毒RNA，再用RT-PCR和套式PCR方法进行检测。结果：通过对肌PCR反应条件的优化，用3种虫媒病毒的特异引物均可从不同稀释度的感染小鼠脑和细胞上清中提取的病毒RNA扩增出特异的目的基因片段。甲病毒属的东部马脑炎病毒和西部马脑炎病毒之间，及与黄病毒属的黄热病毒均无交叉反应，表明建立的RT-PCR检测方法特异性强。套式PCR与肝PCR比较可提高检测敏感性10～10000倍。结论：建立的肝PCR和套式：PCR法可用于3种虫媒病毒的快速检测。     

实验性脾虚证平滑肌细胞VIP受体信号传导障碍

[目的]以血管活性肠肽 (VIP)受体为研究对象,在胃肠肽平滑肌细胞受体 (信号接收系统)水平测定实验性脾气虚证大鼠胃肠动力紊乱的信号传导障碍以及香砂六君子汤治疗机制。[方法]逆转录聚和酶链反应 (RT-PCR)法测定胃、空肠和降结肠的VIP两种受体VIPR1和VIPR2mRNA的分布及半定量分析。[结果]在胃窦部,仅有VIPR2表达。与对照组相比,脾气虚组VIPR2mRNA含量降低;治疗组VIPR2含量明显升高。在空肠和降结肠,各组VIPR1和VIPR2均有表达,各组VIPR1mRNA含量均明显高于VIPR2。脾气虚组VIPR1、VIPR2mR NA含量低于对照组;治疗组VIPR1、VIPR2mRNA含量明显高于自然恢复组。[结论]VIP受体在胃肠道不同部位的分布差异可能与脾气虚所致胃与肠道肠动力紊乱表现的截然不同有一定关系,香砂六君子汤在大鼠实验性脾气虚胃肠肽受体水平的异常有调理作用机制之一。     

庚型肝炎病毒(HGV RNA)基因的定量检测

目的 :建立庚型肝炎病毒基因 (HGVRNA)的定量检测方法。方法 :采用荧光转换原理 ,应用特异荧光物质标记的引物进行逆转录PCR(RT_PCR) ,检测 4 1例临床血清标本的HGVRNA。结果 :与巢式定性PCR结果比较 ,两者具有相关显著性。以定量实验为标准定性实验的阳性漏检率为 3.33% ,阴性漏检率为 18.1% ,两者相对符合率为 92 .6 8%。结论 :定量检测HGVRNA在定性的基础上提供了量的结果 ,而且具有特异性强、结果稳定、操作简便等特点     

牛m1和m5受体内环3区的克隆及主动脉内皮细胞上两种受体mRNA表达的检测

目的 :克隆牛m1和m5受体亚型特异性区域内环 (innerloop) 3区 ,并检测牛主动脉内皮细胞上两种受体mRNA的表达。方法 :根据人、小鼠的m1和m5受体序列 ,设计并合成针对两种受体内环 3区的特异性引物。采用RT_PCR法从牛海马组织中扩增牛m1和m5受体内环 3区 ,并通过半定量RT_PCR法检测两种受体mRNA在传代培养前后的牛主动脉内皮细胞中的表达。结果 :序列测定与对比表明克隆得到了牛m1和m5受体内环 3区。半定量RT_PCR结果显示 ,原代牛主动脉内皮细胞表达m1受体mRNA而未检测到m5受体mRNA ,两种受体mRNA在传 10代的培养牛主动脉内皮细胞中均未检测到有表达。结论 :本研究为探讨血管内皮细胞上介导乙酰胆碱诱发血管舒张反应的受体与M受体的关系提供了线索     

TrkA及PPTA mRNA在咬合创伤犬三叉神经节内的表达变化

目的：观察咬合创伤时犬三叉神经节（TG）中神经生长因子受体TrkA mRNA及前速激肽原－A（PPTA） mRNA的表达变化，探讨咬合创伤导致口面痛的可能机制。方法：将高出咬合面1.5mm的镍铬合金嵌体粘固于10只杂种犬右侧上颌第一，二磨牙咬合面的一类嵌体洞形内，造成对He牙的创伤。粘固嵌体后3，7，14，30，60天时取双侧TG。用反转录－聚合酶链式反应（RT＿PCR）检测 TG中Trk A及PPTA mRNA的表达变化并与无咬合创伤的对照组作比较。结果：（1）创伤后3－60天内创伤侧TG的Trk A和PPTA mRNA表达水平比对侧明显上调。（2）创伤侧TrkA mRNA的表达量在3－60天内均高于对照组，7－30天内维持较高水平。（3）3－30天内PPTA mRNA水平明显高地对照组，3－14天达到最高，60天组与对照无差异。结论：咬合创伤能导致TG内TrkA mRNA及PPTA mRNA表达水平的上调。Trk A和PPTA可能参与了咬合创伤所导致的口面痛。     

人甲状腺过氧化物酶抗原决定簇的基因克隆与序列分析

应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ＿ＰＣＲ）方法快速克隆人甲状腺过氧化物酶（ｈＴＰＯ）抗原决定簇基因１７０２～２６２２（编号相对于起始密码，编码ＡＡ５６８～ＡＡ８７４）。将此片段重组入ＰＵＣ１８质粒，并用ＰＣＲ＿双链ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）方法测定全部顺序。结果表明确实克隆到ｈＴＰＯ（１７０２～２６２２）区的基因片段，有两个单碱基，但未造成编码氨基酸改变     

CK19在乳腺癌外周血中表达的意义

[目的]研究外周血中CK19与原发性乳腺癌病理特征和分期的相关性。[方法]用RT_PCR法检测32例乳腺癌患者外周血中CK19的表达。常规病理检查32例患者的脉管瘤栓状况、分期 ,用Fish精确检验法检验其差异。[结果]CK19与脉管瘤栓形成或软组织浸润具有明显相关性 (P<0.05) ,与分期呈正相关。[结论]采用RT_PCR检测乳腺癌患者外周血中肿瘤细胞具有高灵敏度 ,对乳腺癌的治疗具有重要应用价值。对乳腺癌血道微转移灵敏 ,可作为临床判断预后的参考指标。     

实验性脾虚证平滑肌细胞VIP受体信号传导障碍

【目的】以血管活性肠肽(VIP)受体为研究对象，在胃肠肽平滑肌细胞受体(信号接收系统)水平测定实验性脾气虚证大鼠胃肠动力紊乱的信号传导障碍以及香砂六君子汤治疗机制。【方法】逆转录聚和酶链反应(RT—PCR)法测定胃、空肠和降结肠的VIP两种受体VIPRl和VIPR2mRNA的分布及半定量分析。【结果】在胃窦部，仅有VIPR2表达。与对照组相比，脾气虚组VIPR2mRNA含量降低；治疗组VIPR2含量明显升高。在空肠和降结肠，各组VIPRl和VIPR2均有表达，各组VIPRlmRNA含量均明显高于VIPR2。脾气虚组VIPRl、VIPR2mRNA含量低于对照组；治疗组VIPRl、VIPR2mRNA含量明显高于自然恢复组。【结论】VIP受体在胃肠道不同部位的分布差异可能与脾气虚所致胃与肠道肠动力紊乱表现的截然不同有一定关系，香砂六君子汤在大鼠实验性脾气虚胃肠肽受体水平的异常有调理作用。