马甲子对LPS刺激下人牙髓细胞炎性因子表达影响的初探

目的:研究马甲子提取物对体外培养HDPCs生长及对P.g-LPS诱导HDPCs合成分泌的炎症相关细胞因子IL-1β、IL-6及TNF-α的影响.方法:体外培养人牙髓细胞,建立炎症状态的体外HDPCs,检测不同浓度梯度马甲子提取物对HDPCs生长的影响,以及对炎症状态下的HDPCs各炎性因子mRNA表达及蛋白表达的影响....     

磷酸化cAMP反应元件结合蛋白对发育期人牙乳头细胞增殖和分化的影响

目的 构建CBP抑制表达慢病毒载体,探讨CBP有效表达沉默后对体外培养人牙乳头细胞(human dental papilla cells,HDPC)的增殖及分化影响.方法 利用基因重组技术构建重组慢病毒建立牙乳头细胞沉默稳转细胞,采用CCK-8检测细胞增殖的变化,采用检测分化相关蛋白的表达评价CBP对HDPC分化能力的影响.结果 测序结果提示成功构建四组人CBP基因的重组慢病毒;转染HDPC后,通过RT-PCR和蛋白质印迹法筛选获得有效靶点的重组慢病毒;CCK-8检测结果表明HDPC在CBP表达下调后增殖活性受到抑制;慢病毒介导CBP沉默后影响了HDPCs相关分化蛋白ColI、OCN、OPN的表达,较对照组显著下调(P＜0.05);牙乳头细胞的ALP活性在转染重组慢病毒后5,7,14 d后显著降低(P＜0.05);结论 成功构建了高效CBP抑制表达载体,CBP沉默可抑制HDPCs的增殖和分化.     

体外培养人毛乳头细胞特异性标记物表达的分析

目的 探讨人毛乳头细胞(human dermal papilla cells,HDPCs)经过体外长期的传代培养后,其与诱导毛囊生成能力相关的细胞特异性标记物的表达.方法 使用一步酶消化法将人毛乳头分离后,在体外进行HDPCs传代培养,取第1～8代HDPCs,在倒置显微镜下观察不同传代时期的生长情况;使用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色方法和实时定量基因扩增荧光检测系统(real-time quantitative PCR detecting system,QPCR),检测第1～8代HDPCs在不同传代时期其特异性标记物ALP和胰岛素样生长因子-1(insulin like growth factor-1,IGF-1)的表达.结果 HDPCs在体外传代培养过程中,不但逐渐丧失其聚集性、旋涡状生长的特性,而且ALP和IGF-1表达水平逐渐下降.第1代HDPCs的ALP和IGF-1表达水平分别是第8代的6.8倍和3.5倍.第1代和第2代HDPCs的ALP染色表达较明显,但是随着传代代数的增加,阳性表达的细胞逐渐变少,并且染色逐渐变浅.结论 HDPCs经过体外长期的传代培养后,其与诱导毛囊生成能力相关的特异性标记物ALP和IGF-1的表达水平逐渐下降,HDPCs失去聚集性、旋涡状生长的特性,从而导致高传代的HDPCs丧失诱导毛囊生长的能力.     

血清饥饿法对人牙髓细胞周期同步化的研究

目的:探讨不同的血清饥饿方法和饥饿时间对人牙髓细胞(HDPCs)细胞周期的影响.方法:血清直接饥饿和梯度饥饿处理人牙髓细胞.倒置显微镜观察细胞形态;CCK-8检测血清饥饿处理对HDPCs增殖能力的影响;流式细胞术检测细胞周期验证HDPCs同步化的效果.结果:血清直接饥饿处理或梯度饥饿处理后其G0/G1期HDPCs的比例...