人胚雪旺细胞组织工程神经修复坐骨神经缺损的实验研究

目的：探索人胚雪旺细胞作为组织工程的种子细胞修复周围神经缺损的可行性。方法：通过组织工程方法用PLGA导管和polyglactin 910纤维负载人胚雪旺细胞预先构置好人工神经，然后用于修复大鼠20mm的坐骨神经缺损，并与神经切断后原位缝合以及用单纯的PLGA导管进行修复的实验组进行对照。通过活体肢体功能观察、靶器官肌肉测量、电生理检测、辣根过氧化物酶示踪、连续组织切片图像分析以及透射电镜等检查神经再生情况。结果：人工神经修复组神经再生良好，效果接近于神经原位缝合组，明显优于单纯的PLGA导管修复组。结论：人胚雪旺细胞构建的人工神经可以修复20mm的周围神经缺损。     

雪旺细胞源运动神经营养蛋白对周围神经再生的影响

目的：研究雪旺细胞源运动神经营养蛋白对周围神经再生的影响。方法：６０只ＳＤ大鼠均分为３组，Ａ和Ｂ组分别在桥接于大鼠右侧坐骨神经断端之间的硅胶管内加入２６ＫＤ和５０ＫＤ的雪旺细胞源运动神经营养蛋白，Ｃ组加ＰＢＳ液作为对照。术后１～６月每隔半月测定实验侧坐骨神经功能指数，术后３月测定实验侧坐骨神经的电生理和形态学指标。结果：Ａ和Ｂ组实验侧坐骨神经的功能指数、电生理和形态学指标与Ｃ组比较，差别有非常显著性。结论：２６ＫＤ和５０ＫＤ雪旺细胞源运动神经营养蛋白对周围神经再生有促进作用。     

脱细胞异体神经材料复合雪旺细胞的体外三维构建的活性研究

目的探讨雪旺细胞在AECM支架材料上体外三维培养的生长活性.方法将培养的雪旺细胞悬液接种在支架材料上,用MTT法、倒置相差显微镜、流式细胞仪、扫描电镜、RT-PCR、测定雪旺细胞的活性.结果 AECM上的雪旺细胞各项指标与正常培养的雪旺细胞活性比较,差异无显著意义(P>0.05),实验组雪旺细胞DNA无损伤,且能合成分泌GDNF.结论 AECM适于构建具有雪旺细胞活性的组织工程化人工神经.     

失神经骨骼肌提取液对雪旺细胞体外增殖的作用

目的：观察去神经支配骨骼肌粗提液在体外培养条件下对雪旺细胞（Schwann cells,SCs)增殖的作用,了解外周神经损伤后SCs大量增殖的机理。方法：将新生大鼠SCs培养标本分为加正常骨骼肌提取液组,加失神经支配骨骼肌提取液组和正常对照组,每组10个标本。通过活细胞计数和S－100免疫细胞化学染色证实,观察两种肌肉提取液对SCs增倍时间的影响。结果：对照组SCs增倍时间为8天,正常骨骼肌提取液组为7天,而去神经支配骨骼肌提取液组为5．5天。结论：周围神经损伤后SCs可能受失神经支配骨骼肌产生的某些物质的刺激而增殖加快。     

成年兔坐骨神经雪旺细胞的分离纯化培养

目的：探讨从成年新西兰兔坐骨神经分离培养获得大量雪旺细胞的有效手段,方法：利用成年免发生Wallerian变性的坐骨神经用植块法进行培养,通过相差显微活细胞计数和S－100细胞化学标记相结合鉴定了雪旺细胞增值和纯化程度。结果：通过上述方法获得大量雪旺细胞纯度达95％,并绘制其生长曲线,体外培养的雪旺细胞倍增时间为8d。结论：本方法能获得大量高纯度的雪旺细胞,为组织工程修复周围神经缺损打下基础。     

pSVPoMcat微基因修饰雪旺细胞移植对损伤脊髓功能恢复的影响

目的观察pSVPoMcat微基因修饰雪旺细胞(SC)移植对损伤脊髓功能恢复的影响. 方法采用切割法制备脊髓半横断损伤模型(T8平面),实验动物随机植入pSVPoMcat微基因的 SC组(A组)、SC组(B组)和明胶海绵组(C组),每组10只.用皮层体感诱发电位(CSEP) 及图像分析方法比较各组间诱发电位潜伏期、波幅,再生轴突计数.同时,行电镜观察及联合行为(CBS)记分. 结果 A,B两组潜伏期和波幅呈恢复趋势,且A组已接近正常,与CBS结果一致.再生轴突计数A组为388±163,B组为109±16(P＜0.01),与电镜观察一致. 结论 pSVPoMcat微基因修饰SC移植对脊髓损伤(SCI)后的神经功能恢复有明显的促进作用.     

雪旺细胞和纤连蛋白对脊髓损伤后功能恢复的初步研究

目的：观察雪旺细胞和纤连蛋白对大鼠损伤的脊髓的功能的影响。方法：将体外培养的雪旺细胞结合纤连白植入大鼠半切损伤的脊髓内,用脊髓诱发电位及图像分析方法比较治疗组和对照组诱发电位潜伏期,再生轴突计数及二者间的关系。结果;雪旺细胞结合纤连蛋白治疗纽脊诱发电位潜伏期显著缩短,再生轴突明显增多,二者呈负相关。结论：雪旺细胞结合纤蛋白移植具有促进脊髓损伤后轴突再生的作用,并能够分恢复体髓的传入功能.     

雪旺细胞在局灶性脑损伤大鼠脑内的存活和迁移

目的 :了解雪旺细胞移植入局灶性脑损伤大鼠脑内后的存活、迁移情况。方法 :SD大鼠采用 Feeney's自由落体撞击法制成局灶性脑损伤模型。雪旺细胞以 Hoechst33342荧光素进行荧光标记 ,在大鼠损伤后即刻移植入脑损伤区。移植后 3天、7天、14天、2 8天、6 0天、90天处死大鼠 ,观察细胞标记荧光情况。结果 :3天、7天时移植的雪旺细胞大量存活于损伤区、海马、侧脑室的脉络丛组织中。 14天后可观察到细胞沿软脑膜、室管膜、血管周间隙迁移 ,并在胼胝体部位排列成索条状。 6 0天时雪旺细胞的标记荧光减弱 ,细胞密度减少。 90天时已观察不到荧光。并在雪旺细胞存活区有巨噬细胞浸润。结论 :雪旺细胞移植入大鼠脑损伤区后可存活并沿特定部位迁移 ,可能由于血脑屏障破坏等因素 ,机体对其有免疫排斥反应     

表面复合微/纳拓扑化丝素/壳聚糖/沙蒿籽胶水凝胶的制备及对雪旺细胞的影响

本研究构建了表面具有复合微/纳拓扑结构的丝素/壳聚糖/沙蒿籽胶(SF/CS/AS)水凝胶,并初步探讨该复合水凝胶对雪旺细胞生长行为的调控作用.配制沙蒿籽胶溶液,筛选最优条件,利用微模塑技术,将具复合微/纳拓扑结构的PDMS印章压印到水凝胶上,制成具有微图形结构的SF/CS/AS水凝胶膜.脱酸处理后,培养雪旺细胞,评价微...     

黄芪、丹参、山药及其复方对高糖所致雪旺细胞凋亡的保护作用

目的:观察中药对高葡萄糖条件下与内皮细胞(以下简称EC)共培养的雪旺细胞(以下简称SC)凋亡的干预作用。方法:建立大鼠SC与EC的共培养模型,根据存活率(形态学和MTT)筛选药物最有效作用浓度。将细胞分为正常共培养SC组、高糖共培养SC组、高糖黄芪组、高糖丹参组、高糖山药组、高糖复方组,通过凋亡率(流式细胞仪)和凋亡相关基因Bcl-2和Casepase-3的mRNA(Realtime PCR)和蛋白(Western Blot)的表达观察细胞凋亡。结果:与正常共培养组相比高糖共培养组SC凋亡率明显增高、Bcl-2mRNA和蛋白表达量明显减少,Casepase-3mRNA和蛋白表达量显著增加。加中药干预后SC凋亡率都明显降低,Bcl-2mRNA和蛋白表达量都明显增加,除高糖山药组Casepase-3mRNA减少和高糖丹参组Casepase-3蛋白减少无明显统计学意义,其余各组Casepase-3mRNA和蛋白表达量均显著减少。中药干预组之间比较,高糖复方组作用最显著。中药干预组与正常组相比,SC凋亡率无明显增高,Bcl-2mRNA和蛋白表达量明显减少,Casepase-3mRNA和蛋白表达量显著增加。结论:中药对高糖环境下与内皮细胞共培养的雪旺细胞的凋亡有保护作用,不同中药作用效果不同,复方效果最佳。