抗rhNDPK-A单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :研制抗rhNDPK A (recombinanthumannucleosidediphosphatekinase A)单克隆抗体 (mAb) ,并鉴定其特性。 方法 :以纯化的rhNDPK A免疫BALB/c小鼠 ,采用杂交瘤技术制备抗rhNDPK AmAb ;用免疫双扩散鉴定Ig亚类 ;West ernblot鉴定mAb的特异性 ;间接ELISA检测mAb的腹水效价、亲和常数 ,并进行表位分析。结果 :获得 6株可分泌特异性mAb的抗rhNDPK A的杂交瘤细胞系 2D9、8C7、13E2、15D9、15E3和 2 0D9,Ig亚类均为IgG1;其效价为 1× 10 -4～5× 10 -6;亲和常数为 4 .5× 10 -9～ 2 .8× 10 -10 mol/L ;共有3个抗原表位。结论 :获得抗rhNDPK A的mAb ,为进一步用于临床诊断和实验研究创造了条件     

人脐静脉血管内皮细胞的体外培养及rhNDPK-A对其增殖的作用

目的：建立一种体外培养人脐静脉血管内皮细胞的方法，初步探讨rhNDPK-A蛋白对内皮细胞生长的影响。方法：采用胶原酶对新生儿脐带静脉血管进行消化，从中分离出血管内皮细胞，体外传代培养，通过MTS／PMS法测定不同浓度的rhNDPK-A蛋白对HUVEC体外增殖的影响。结果：成功获得体外培养的人脐静脉血管内皮细胞，从0．0610μg／m1到250μg／ml的rhNDPK-A蛋白对人脐静脉血管内皮细胞的增殖既没有抑制也没有促进作用。结论：建立了分离培养人脐静脉向管内皮细胞的方法，rhNDPK-A蛋白不是通讨抑制内皮血管细胞的增殖而抑制血管新生的。