慢性乙型肝炎患者外周血及肝组织中T淋巴细胞受体β链互补决定区3谱系分析

目的 分析慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血及肝组织T淋巴细胞受体(TCR)β链各家族互补决定区3(CDR3)谱系的变化,了解CHB患者T淋巴细胞克隆增生的情况.方法 采用荧光定量PCR(FQ-PCR)溶解曲线法分析4例健康对照者及11例CHB患者外周血单个核细胞(PBMC)及肝组织T淋巴细胞受体β链可变区(TRBV)基因各家族CDR3谱系漂移情况,比较11例CHB患者TCR β链可变区各家族外周血及肝组织CDR3谱系漂移异常率.率的比较采用卡方检验.结果 11例CHB患者PBMC及肝组织TRBV各家族CDR3溶解曲线谱型图出现数量不等、形态不一的单峰、寡峰、偏峰及极低水平或缺失等现象,肝组织TRBV家族CDR3的谱系漂移异常率明显高于外周血的异常率(x2=23.246,P＜0.01),在同一患者的外周血及肝组织中发现部分相同的TRBV亚家族表达,TRBV13.1、BV17和BV22同时被多例CHB患者的外周血及肝组织限制性取用.结论 CHB患者PBMC及肝组织中的T淋巴细胞均存在不同程度的克隆增生,部分TRBV亚家族被多例CHB患者外周血及肝组织同时限制性取用.     

肿瘤特异性TCRαβ基因转染诱导记忆性T细胞分化及其免疫功能的研究

目的研究特异性TCR基因转染T细胞被肿瘤抗原激活后,记忆性T细胞的分化情况,并明确其表型特征和免疫功能。方法密度梯度离心法分离PBMC,重组TCR腺病毒感染T细胞,流式细胞术检测外源TCR表达效率。AFP表位肽刺激T细胞,流式细胞术检测TCR基因转染T细胞经抗原刺激后,记忆性T细胞标志分子表达。MTT法检测T细胞对不同肿瘤细胞株的杀伤活性。Annexin V-PI双染法检测靶细胞凋亡比例。ELISA法检测T细胞作用于靶细胞后IFN-γ与IL-2分泌水平。结果重组腺病毒载体感染3 d后,外源TCR表达比例接近30%。特异性TCR基因转染可有效促进T细胞识别肿瘤抗原后活化,CD45RO+细胞比例逐渐上升至接近50%。CD45RO+细胞以CD62L–CD44+表型为主。此后CD62L+细胞比例逐渐上升。最终出现分群明显的CD62L+CD44+TCM表型细胞。特异性TCR基因转染能够促进T细胞杀伤AFP+靶细胞,诱导靶细胞凋亡,并促进IFN-γ分泌。抗原预先刺激能够进一步增强TCR基因转染T细胞抗肿瘤免疫效应。结论 TCR基因转染能够有效促进T细胞识别肿瘤抗原后活化。经肿瘤抗原预先刺激的TCR基因转染T细胞将启动记忆性T细胞分化,在再次遭遇表达相同抗原的肿瘤细胞时发挥更为强烈的免疫效应。     

基于家庭的原发ANCA相关性小血管炎与TGFβ1-509C/T及TCRCα-575A/G的相关性

目的 以家庭为基础,利用传递不平衡原理研究TGFβ1-509 C/T及TCRCα-575 A/G的SNP与AAV的相关关系.方法 采用PCR-RFLP和直接测序法,鉴定88例原发AAV患者及其父母、兄弟姐妹基因型,获得88个核心家庭中264人的基因型,采用传递不平衡检验和HRR分析的方法观察TGFβ1-509 C/T及TCRCα-575 A/G在患病子代的不平衡传递.结果 32个满足TGFβ1-509C/T的传递不平衡检验的AAV患者核心家庭中,杂合子父母传递给患病子代的等位基因频率为C/T=36/28,期望值为C/T=33.5/30.5,两者相比,差异无统计学意义(x2=0.51,P＞0.05);34个满足TCRCα-575 A/G的传递不平衡检验的AAV患者核心家庭中,杂合子父母传递给患病子代的等位基因频率为A/G=29/39,期望值为A/G=33.5/34.5,两者相比,差异无统计学意义(x2=1.59,P＞0.05).38个满足HRR分析的AAV患者核心家庭中,TGFβ1-509 C/T多态性传递的基因型为CC/CT/TT=12/20/6,等位基因为C/T=44/32,未传递基因型为CC/CT/TT=10/19/9,等位基因为C/T=39/37,两者基因型、等位基因相比,差异均无统计学意义(基因型和单体型x2值分别为0.81、0.66,P均＞0.05),HRR=1.30,HRR系数末过度偏离(1.00);39个满足TCRCα-575 A/G的HRR分析的核心家庭中,TCRCα-575 A/G多态性传递的基因型为AA/AG/GG=9/18/12,等位基因为A/G=36/42,未传递的基因型为AA/AG/GG=15/15/9,等位基因为A/G=35/33,两者基因型、等位基因相比,差异均无统计学意义(基因型和等位基因x2值分别为2.20、0.41,P均＞0.05),HRR=0.81,HRR系数未过度偏离(1.00).结论 广西汉族人群中,TGFβ1-509 C/T及TCRCα-575 A/G可能与原发AAV的遗传易感性不相关.

Abstract：

Objective To investigate the relationship between TGFβ1-509 C/T, TCRCα-575 A/G SNPs and primary AAV using a transmission disequilibrium theory based pedigree analysis Methods Genotypes of 264 individuals from 88 AAV families include patients, their parents, brothers and sisters were determined by PCR-RFLP and direct sequencing. Transmission disequilibrium test(TDT) and HRR were employed for the data analysis to observe the transmission disequilibrium of TGF31-509 C/T and TCRCα -575 A/G polymorphisms. Results No transmission disequilibrium from heterozygous parents onto the patients was found in the trios analyzed by TDT for either TGFβ1-509 C/T (observed C/T = 36/28, expected C/T =33. 5/30. 5, x2 =0.51, P＞0.05) or TCRCo-575 A/G ( observed A/G = 29/39, expected A/G = 33.5/34. 5, x2 = 1. 59, P ＞ 0. 05 ). The genotype-based HRR and haplotype-based HRR showed there was no increased risk of AAV in the observed trios for either -509 C/T polymorphism of TGFβ1 (transmitted genotype CC/CT/TT =12/20/6, allele C/T = 44/32; nontransmitted genotype CC/CT/TT = 10/19/9,allele C/T =39/37, genotype-based HRR x2 =0.81, P ＞0. 05, haplotype-based HRR x2 =0. 66, P＞0. 05,HRR = 1.30) or -575 A/G polymorphism of TCRCα ( transmitted genotype AA/AG/GG = 9/18/12, allel A/G = 36/42; nontransmitted genotype AA/AG/GG = 15/15/9, allel A/G = 35/33, genotype-based HRR x2=2. 20, P ＞0. 05. Haplotype-based HRR x2 =0. 41, P ＞0. 05, HRR =0. 81 ). The deviation of HRR coefficient was not excessive(1.00). Conclusion TGFβ1-509 C/T and TCRCo-575 A/G polymorphism may not be associated with the genetic susceptibility of primary AAV in Guangxi Han population.     

bcr-abl多肽诱导健康人外周血αβ+T细胞克隆性增殖

目的 分析bcr-abl多肽诱导健康人外周血T细胞TCR Vα和TCR Vβ基因选用和克隆性增殖情况,了解bcr-abl多肽相关的αβ+T细胞克隆.方法 利用T细胞液体培养法,应用bcr-abl多肽(KQSSKALQR)联合IL-2+抗CD3单抗+抗CD28单抗体外诱导T细胞(HLA-A0201限制性)扩增,同时设不...     

Quantitative EEG and functional outcome following acute ischemic stroke

Objective

To identify the most accurate quantitative electroencephalographic (qEEG) predictor(s) of unfavorable post-ischemic stroke outcome, and its discriminative capacity compared to already known demographic, clinical and imaging prognostic markers.

重症肌无力患者循环T细胞受体β链3号互补决定区的研究

目的研究重症肌无力(MG)患者循环T细胞受体(TCR)β链基因亚家族的优先表达,以及β链3号互补决定区(CDR3)基因片断的长度谱型特征,以探讨MG患者体内是否存在病理性T细胞的单克隆或寡克隆增殖。方法收集64例初诊MG患者和16名健康献血者外周静脉血,通过反转录多聚酶链反应(RT PCR)扩增样本中不同亚家族含CDR3的大片段,分析TCRVβ6、8、12、15亚家族的表达,用长度谱型技术研究CDR3谱型特征。结果64例MG患者中, 41例优先表达TCRVβ6、8、12、15中1~2种亚家族,且部分为单克隆或寡克隆性T细胞增殖,另一部分为多克隆增殖;而16名健康对照外周血表达TCRVβ6、8、12、15中3 ~4种亚家族,且全部为多克隆分布。结论TCRVβ6、8、12、15亚家族在MG患者中呈优势表达、优先表达或倾斜性分布,并出现T细胞的克隆性扩增(单克隆或寡克隆),提示这些亚家族参与MG的致病。     

结核分枝杆菌感染对Ⅰ型干扰素受体基因表达的影响及其在结核病患者外周血表达的意义

目的 研究结核分枝杆菌感染对工型干扰素受体（IFNAR）基因表达的诱导作用及其在结核病患者外周血中表达的临床意义.方法 选取2013年1月至2013年5月在深圳市第三人民医院确诊的痰菌阳性的肺结核患者（TB组）15例;结核分枝杆菌潜伏感染（latent tuberculosis infection,LTBI）者（LTBI组）15例、健康对照（HC组）15例,均为同期医院体检人员.应用免疫磁珠从健康人外周血单个核细胞（PBMCs）中分选CD14＋单核细胞,在巨噬细胞集落刺激因子（M CSF）刺激下诱导分化为巨噬细胞,随后感染不同毒力结核分枝杆菌（H37Ra、H37Rv）,应用实时定量PCR检测巨噬细胞中IFNAR1和IFNAR2基因表达情况,以2-△△Ct值表示IFNAR1和IFNAR2基因拷贝数.观测HC组、LTBI组、TB组患者各15例,分析不同人群PBMCs中IFNAR基因表达的差异.采用GraphPad 4.0软件对数据进行统计处理.多组计量资料数据首先进行齐性检验以判断是否符合正态分布,若符合正态分布,则用-x±s表示,并通过方差分析进行两两比较,从而计算q值.计数资料进行“行×列”表x2检验,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 经H37Rv刺激后,IFNAR1基因表达水平（5.95±0.41）显著低于空白对照（7.53±0.41）,差异有统计学意义（q=4.15,P＜0.05）;而H37Ra刺激后IFNAR1基因表达水平为（6.54±0.33）,与空白对照（7.53±0.41）、H37Rv感染（5.95±0.41）相比差异均无统计学意义（q值分别为2.56、1.57,P值均＞0.05）;而IFNAR2基因在H37Ra和H37Rv刺激后表达水平分别为（8.81±0.85）、（8.84±0.80）,均显著低于空白对照组（12.67±1.15）,差异具有统计学意义（q值分别为4.10、4.13,P值均＜0.05）;而H37Ra和H37Rv刺激后IFNAR2的基因表达差异无统计学意义（q=0.02,P＞0.05）.IFNAR1基因在TB、LTBI、HC三组人群之间表达水平分别为（5.39±0.64）、（6.59±0.86）、（7.08±1.10）,两两比较差异均无统计学意义（TB vs HC,q=1.91;TB vs LTBI,q=1.53;HC vs LTBI,q=0.87;P值均＞0.05）,而TB患者IFNAR2基因相对表达量为（5.96±0.58）,显著低于健康对照组（10.01±1.58）,差异有统计学意义（q=3.67,P＜0.05）.结论 结核分枝杆菌感染可以诱导巨噬细胞IFNAR基因表达下调,且与菌株毒力无关.在结核病患者外周血中IFNAR2基因表达下调,具有潜在诊断价值.