尾加压素Ⅱ促兔肺动脉平滑肌细胞增殖及机理探讨

目的:探讨尾加压素Ⅱ(urotensin Ⅱ,U-Ⅱ)对兔肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的作用及机理。方法:采用植块法培养家兔PASMCs,以MTT测定和[³H]-胸腺嘧啶核苷([³H]-TdR)掺入法观察U-Ⅱ对PASMCs增殖的影响,加入不同浓度的几种细胞内信号转导阻断剂,观察对U-Ⅱ效应的影响。 结果:U-Ⅱ(10^-9 mol/L-10^-7 mol/L)浓度依赖地促进PASMCs的A值增加及 -TdR掺入,以10^-7 mol/L U-Ⅱ的作用最明显,A值和[³H]-TdR掺入量分别较对照组高42.9%和68.5%(P＜0.05) 。10^-10 mol/L U-Ⅱ对PASMCs增殖无作用。尼卡地平、W₇、H₇、PD₉₈₀₅₉在一定浓度范围内(10^-7 mol/L-10^-5 mol/L)均可以浓度依赖地抑制U-Ⅱ诱导的PASMCs的A值增加及[³H]-TdR掺入增加。在浓度为10^-5 mol/L时,其抑制作用最明显,A值的抑制率分别为42.3%、19.6%、23.2%和10.5%(P＜0.05), -TdR掺入量的抑制率分别为46.6%、9.8%、21.7%和14.7%(P＜0.05 )。 结论: U-Ⅱ具有较强的促PASMCs增殖的作用,其诱导PASMCs增殖是通过Ca²⁺、CaM、PKC、MAPK来介导的。     

apoE基因敲除小鼠主动脉尾加压素Ⅱ受体GPR14表达的变化

目的：观察apoE敲除小鼠主动脉组织尾加压素Ⅱ受体-GPR14表达的变化，以探讨UⅡ及其受体系统在动脉粥样硬化发病中的作用。 方法： 取不同周龄（18、28 和38周）的apoE基因敲除及同龄对照C57BL/6J小鼠（各亚组n=6只），取主动脉，提取mRNA，行竞争RT-PCR。 结果： apoE敲除小鼠GPR14表达分别较同龄对照增加54.2%（18周，P<0.05）、50.0%（28周，P<0.05）、97.0%（38周，P<0.01）。取28周apoE基因敲除及同龄对照小鼠（各8只）主动脉行［125I］-尾加压素Ⅱ放射性配基实验，apoE基因敲除组最大结合力（Bmax）较对照组增大64%（P<0.01），而解离常数Kd值无明显变化（P>0.05）。 结论： 尾加压素Ⅱ/GPR14通路可能参与动脉粥样硬化的发病过程。     

尾加压素II对大鼠损伤血管基质金属蛋白酶的影响

目的 观察外源性尾加压素 II（UII）及其拮抗剂 Urantide 对大鼠胸主动脉球囊拉伤模型损伤动脉基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、MMP-2 和组织基质金属蛋白酶抑制剂-2（TIMP-2）的影响。 方法 构建大鼠胸主动脉球囊拉伤模型,分为 4 组：假拉伤组、单纯拉伤组、拉伤术后持续皮下给予 UII （1 nmol&#8226;kg-1&#8226;h-1）的 UII 组、拉伤术后持续皮下给予 Urantide（10 nmol&#8226;kg-1&#8226;h-1）的 Urantide 组。21 d 后,采用 RT-PCR 方法检测各组 UII 受体 G 蛋白偶联受体-14（GPR-14）的表达,免疫组化和明胶酶谱法检测 MMP-1、MMP-2、TIMP-2 的表达水平与活性。 结果 ①单纯拉伤组血管 GPR-14 mRNA 相对表达量（0.66 ± 0.09）明显高于假拉伤组（0.42 ± 0.06）,为其 1.6 倍（P < 0.05）;②与单纯拉伤组相比,UII 组 GPR-14 mRNA 相对表达量增高（0.93 ± 0.06,P < 0.05）,MMP-1 表达降低（8.3 ± 1.8 vs. 3.3 ± 0.8,P < 0.05）,MMP-2 活性高至其 1.25 倍（137 ± 24 vs. 172 ± 8,P < 0.05）,TIMP-2 表达降低（14.8 ± 2.4 vs. 4.0 ± 0.8,P < 0.05）;③与单纯拉伤组相比,Urantide 组 GPR-14 mRNA 相对表达量降低（0.37 ± 0.08,P < 0.05）,MMP-1 表达差异无统计学意义,MMP-2 活性高至其 1.29 倍（177 ± 21,P < 0.05）,TIMP-2 表达降低 （6.6 ± 1.2,P < 0.05）。 结论 大鼠胸主动脉损伤后局部 GPR-14 mRNA 水平上调,外源性应用 UII 后,GPR-14 mRNA 水平进一步上调,MMP-1 表达下降,TIMP-2 表达减少,MMP-2 活性升高。应用 Urantide（10 nmol&#8226;kg-1&#8226;h-1）能抑制 GPR-14 mRNA 的水平上调,但对 MMP-1 的表达无明显影响,未能表现出拮抗胶原沉积的作用,甚至对 MMP-2/TIMP-2 平衡有类 UII 的作用,其意义有待进一步研究。     

尾加压素Ⅱ基因多态性与妊娠期糖尿病遗传易感性的关系

目的探讨尾加压素Ⅱ基因rs228648位点单核苷酸多态性与妊娠期糖尿病（GDM）发病的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性（PCR—RFLP）技术;采用病例一对照研究的方法,对中国北方地区无血缘关系的70例GDM孕妇（GDM组）和70例正常妊娠妇女（对照组）的尾加压素Ⅱ基因rs228648位点（G—A）进行单核苷酸多态性分析。结果（1）两组孕妇尾加压素Ⅱ基因rs228648位点各基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡榆验,具有群体代表性。（2）GDM组孕妇尾加压素Ⅱ基因rs228648位点G等位基因频率为70．7％,对照组为57．9％,两组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;GDM组孕妇尾加压素Ⅱ基因rs228648位点A等位基因频率为29．3％,对照组为42．1％,两组比较,差异也有统计学意义（P〈0.05）。而两组孕妇的G／G基因型频率比较（分别为52．9％和41．4％）,差异无统计学意义（P〉0．05）。（3）尾加压素Ⅱ基因rs228648位点的A／A基因型频率与GDM组呈负相关关系,经多因素logistie同归分析显示,其OR值为0．312,OR值的95％可信区间为0．108～0．900（P=0．031）。结论尾加压素Ⅱ基因rs228648位点单核苷酸多态性可能在GDM遗传易感性中起重要作用。G等位基因可能与GDM发生有关,而尾加压素Ⅱ基因rs228648位点的A型纯合子可能是GDM的重要保护因素。     

心肌肥大大鼠心肌尾加压素II受体的变化

目的:观察心肌浆膜上新发现的强缩血管活性肽尾加压素II(UII)的受体在压力超荷性心肌肥大中的变化及意义。方法:在腹主动脉缩窄复制的大鼠压力超荷性心肌肥大模型上,采用放射性配基结合技术,测定术后1d(早期组)和30d(晚期组)大鼠心肌浆膜上UII受体的结合位点。结果:早期组血压较正常对照组和假手术组分别高54%和43%(P＜0.01),心重/体重比值无明显差异,受体数目(Bmax)分别上调184%和159%(P＜0.01),亲和力下降(Kd值分别高224%和206%,P＜0.01)。晚期组血压较对照组和假手术组分别高85%和67%(P＜0.01),心重/体重比值分别高18%和22%(P＜0.05),受体数目分别下调35%和41%(P＜0.05),亲和力增强(Kd值分别低30%和33%,P＜0.05)。结论:压力负荷引起心肌浆膜UII受体先增加后减少的双相变化,其变化可能参与心肌肥大的发病过程。     

肾上腺髓质素对尾加压素Ⅱ刺激的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察肾上腺髓质素(ADM)对尾加压素Ⅱ(UⅡ)刺激的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法:贴块法培养大鼠胸主动脉VSMC;[³H]-胸腺嘧啶([³H]-TdR)掺入测定反映VSMCDNA合成;[γ-³²P]-ATP标记的同位素法测定丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性。结果:UⅡ(10^-8mol/L)显著促进VSMC-TdR掺入和激活MAPK比对照组分别高38%(P＜0.05)和260%(P＜0.01)。UⅡ加10^-10、10^-9、10^-8mol/LADM组VSMC-TdR掺入分别较UⅡ组低7%(P＞0.05)、32%(P＜0.05)和41%(P＜0.01)。MAPK活性分别低24%(P＞0.05)、32%(P＜0.05)和36%(P＜0.05)。结论:肾上腺髓质素抑制UⅡ诱导的VSMC增殖,可能与其抑制MAPK活性有关。     

大鼠主动脉球囊成形术后尾加压素II受体的变化

目的:观察大鼠主动脉球囊成形术后尾加压素II(UII)受体特征的变化及血管对UII收缩效应的改变。方法:测定大鼠主动脉球囊损伤后[¹²⁵I]-UII配体结合及血管张力。结果:球囊成形术后3d、21d时,血管对UII的反应性增强(P＜0.05),主动脉UII受体最大结合(Bmax)较对照组分别高44%及36%,受体与配体解离常数(Kd)无显著差异(P＞0.05)。结论:血管球囊损伤后UII受体发生上调,受体密度增加,血管对UII的反应性增强,表明UII可能在血管成形术后再狭窄过程中发挥重要作用。     

尾加压素Ⅱ的非血流动力学作用及其在某些疾病中的意义

尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ,UⅡ)是迄今发现的体内最强的缩血管活性肽,其缩血管效应是内皮素-1(ET-1)的10倍多[1]。1998年UⅡ首次被从人体中克隆出来[2]。1999年Ames等[1]首次发现人体中一种孤立的G蛋白偶联受体GPR14(UT)是UⅡ的特异性受体,两者结合可发挥多种生物学效应。由于UⅡ     

IL-10 对尾加压素Ⅱ诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:探讨白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)对血管活性肽尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ,UⅡ)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖的影响及其作用机制.方法:在培养的大鼠主动脉VSMC上,采用3H-胸腺嘧啶(3H-TdR)参入测定VSMC DNA合成速率,Western blot及免疫沉淀法测定粘着斑激酶(focal adhension kinase,FAK)的表达及活性.结果:IL-10(10-10～10-8g@ml-1)呈浓度依赖的方式抑制UⅡ(10-8mol@L-1)诱导的VSMC3H-TdR参入增加(P＜0.05或P＜0.01)和FAK的活性上调(P＜0.05),但各组间FAK的蛋白表达差异无显著性.结论:IL-10可能通过抑制FAK活性的上调,而拮抗UⅡ刺激的VSMC的增殖.     

尾加压素Ⅱ的促丝裂作用

为研究体内新发现的缩血管活性肽尾加压素Ⅱ对细胞的促丝裂作用,在培养的大鼠动脉血管平滑肌细胞和气道平滑肌细胞、心肌成纤维细胞以及肾系膜细胞上,采用^3H－胸腺嘧啶掺入法,观察了尾加压素Ⅱ对细胞DNA合成影响。结果显示尾加压素Ⅱ明显促进细胞^3H－胸腺嘧啶掺入增加,并在一定浓度范围内呈剂量依赖性。但同一剂量的尾加压素Ⅱ在不同细胞产生的作用强弱不同,10^-10mol/L的尾加压素Ⅱ公对心肌成纤维细胞和气道平滑肌细胞有刺激作用,且成纤维细胞＞气道平滑肌细胞,10^-9-10^-8mol/L尾加压素Ⅱ对诸细胞的效应则为心肌成纤维细胞＞气道平滑肌细胞＞肾系膜细胞＞血管平滑肌细胞,而高浓度尾加压素Ⅱ（10^-7mol/L）对心肌成纤维细胞增殖的刺激作用明显减弱。这些结果提示尾加压素Ⅱ是一种新发现的内源性丝裂原,其促丝裂效应在疾病发生中的作用值得进一步研究。