蛙皮素对PC-3细胞骨架及细胞内游离Ca~(2+)的影响

目的:观察蛙皮素(BBS)对前列腺癌PC-3细胞骨架形态及细胞内游离Ca2+([Ca2+]i)浓度的影响。方法:①利用免疫荧光法(IH),结合激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测10-5mol/L浓度BBS处理的PC-3细胞角蛋白(CK)的表达,以反映其对细胞骨架形态的影响;②应用Fluo-3/AM荧光标记技术和LSCM检测不同浓度BBS(10-9、10-7、10-5mol/L)处理的PC-3细胞[Ca2+]i浓度。结果:①10-5mol/L浓度的BBS可促进PC-3细胞CK表达及伪足形成;②BBS可提高PC-3细胞[Ca2+]i浓度,并具有浓度依赖性。结论:实验证明一定浓度的BBS可明显提高PC-3细胞[Ca2+]i浓度及CK表达,进而影响PC-3细胞骨架形态。本研究为探索BBS应用于肿瘤研究以及BBS作用后细胞内信息传递途径提供了基础。     

HBeAg时间分辨荧光免疫分析法的建立

采用平衡饱和法建立了乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)时间分辨荧光免疫分析法.以针对HBeAg的单克隆抗体G8包被板,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu3+及标记C4单抗,发光增强系统为以β-二酮体为主的增强液.数据采用Log-Logit法函数和四参数Logitc函数数据处理程序处理.结果表明方法的批内和批间CV分别为2.39%和5.28%,平均回收率为97.62%,灵敏度为0.58NCU/mL,可测范围为12.01-529.84NCU/mL,ED20、ED50和ED80分别为6.36NCU/mL、26.85NCU/mL和136.7NCU/mL.本方法与HBsAg有13.1%的交叉反应.Eu3+标记抗体-30℃保存6个月免疫反应性基本无损失,同批试剂连续5个月应用分析结果稳定.HBeAg时间分辨荧光免疫分析的质量参数优于EIA和IRMA.     

The role of phospholipase A2 in human acute pancreatitis

Summary Several studies suggest that the activation of pancreatic phospholipase A₂ (PLA₂) and its release from injured acinar cells play an important role in the pathogenesis of acute pancreatitis. Elevated catalytic activity of PLA₂ in serum is associated especially with severe forms of the disease. PLA₂ has been purified from human cadaver pancreas and an antiserum raised against the enzyme in rabbits. Immuno-histochemical localization of PLA₂ in pancreatic tissue was abnormal in acute pancreatitis. A time-resolved fluoroimmunoassay for human pancreatic PLA₂ has been developed. Increased serum concentrations of immunoreactive PLA₂ were found in acute pancreatitis during the first week after hospital admission. The values returned to normal somewhat more slowly than corresponding serum amylase values. The immunochemical determination of PLA₂ in serum provides a fast and specific detection of injury to pancreatic acinar cells. The pancreas is not the only source of PLA₂ in acute pancreatitis. The nonpancreatic PLA₂ may originate from various inflammatory cells, but this hypothesis remains to be proven.     

鼠抗人单克隆抗体LH7：2在营养不良型大疱性表皮松解症诊断中的应用

目的 探讨鼠抗人单克隆抗体LH7：2诊断营养不良型大疱性表皮松解症的意义。方法 采用间接免疫荧光法对临床诊断为营养不良型大疱性表皮松解症（DEB）,分别来源于3个不同家系各1名患者,包括2名显性遗传型营养不良型大疱性表皮松解症（dominant DEB,DDEB)和1名隐性遗传型营养不良型大疱性表皮松解症（recessive DEB,RDEB)进行皮肤基底膜带（BMZ）Ⅶ型胶原检测,同时选择单纯型大疱性表皮松解症（EBS）、大疱性类天疱疮及正常人各1名做对照。结果 3名对照BMZ免疫荧光阳性,2名DDEB荧光均减弱,RDEB荧光阴性。结论 鼠抗人单克隆抗体LH7：2诊断营养不良性大疱性表皮松解症有重要意义。     

Effects of tank color on melanin-concentrating hormone levels in the brain, pituitary gland, and plasma of the barfin flounder as revealed by a newly developed time-resolved fluoroimmunoassay

A pleuronectiform fish, the barfin flounder Verasper moseri, reared in a white tank had a smaller ratio of pigmented area of the skin on non-eyed side, grew faster, and had greater melanin-concentrating hormone (MCH)-immunoreactive cell bodies and MCH gene expression in the brain than in the black tank, indicating that synthesis and release of MCH are higher in fish from a white tank. In the present study, a time-resolved fluoroimmunoassay for MCH was developed. MCH levels were assessed in the brain, pituitary gland, and plasma of barfin flounders reared in a white or black tank. A competitive assay using two antibodies was performed among secondary antibodies in the solid phase, MCH antibodies, samples, and europium-labeled MCH. Displacement curves of serially diluted extracts (brain, pituitary gland, and plasma) of the barfin flounder paralleled that of the MCH standard. MCH levels in the brain and plasma were higher in fish reared in the white tank for 5 months than in the black tank. These results suggest that synthesis and secretion of MCH are enhanced with the white background and that MCH is involved in both somatic growth and the skin pigmentation in the barfin flounder.     

TrFIA检测CA242对结直肠癌的临床价值

目的：观察采用时间分辨荧光免疫分析检测的CA242在恶性肿瘤普查、诊断和预后的应用价值。方法：收集我院2004年10月～2006年3月的住院病例。包括恶性肿瘤组共226例,良性病变组共74例,正常组50例。采集患者静脉血,常规离心分离血清进行检测。CA242采用TrFIA,CA242正常值为〈20U／ml。结果：使用TrFIA检测CA242在恶性肿瘤组表达水平较良性病变组与正常对照组的表达水平及阳性例数明显升高,其差别明显,P〈0．05,有统计学意义。CA242与其他肿瘤标记物比较,以CEA的灵敏度（45．21％）和CA242的特异度（92．86％）最高。当CA242与另外一项肿瘤标志物联用时,采用平行联检CA242-CEA诊断的灵敏度（59．57％）最高,而采用系列联检CA242-CAl99和CA242-CA50的特异度可以达到100％。当CA242与其他其二项肿瘤标志物联用时,CA242-CEA-CA50平行联检灵敏度最高达67．74％。三项联合应用时,系列联检特异度都是100％。当CA242与其他三项指标联合时,平行联检在本文所用方法中灵敏度最高（69．23％）,系列联检特异度是100％。结论：采用TrFIA检测糖链抗原CA242对直肠癌等的普查、诊断、预后的判断提供了一定的应用价值。     

游离雌三醇时间分辨免疫荧光分析法的建立

目的建立游离雌三醇（uE3）时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）方法。方法采用竞争抑制一步法建立检测uE3的TRFIA分析方法，并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果该方法的灵敏度为0．14nmol／L，线性范围为0．14—120nmol／L，回收率为97．7％。分析内和分析间变异系数分别为1．6％-4．1％和4．4％-8．8％。与E2、孕酮和睾酮的交叉反应率分别为0．24％、0．36％和0．40％。149份血样用本试剂与进口的同类试剂同时检测，其相关系数为0．925。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求，可替代国外同类产品试剂盒。     

血浆同型半胱氨酸和血清叶酸、维生素B12检测及其在糖尿病肾病中的临床意义

应用荧光偏振免疫分析法和时间分辨荧光免疫分析法分别测定血浆同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)和血清叶酸(FA)、维生素B12(VitB12)的水平,探讨其在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)中的临床价值。选择137例糖尿病(DM)患者,并根据尿微量白蛋白(uMA)的排泄率及血肌酐(SCr)水平将其分为糖尿病无肾病组、DN初期组、临床DN组和氮质血症组,同时测定以40名健康人作对照组,检测其Hcy、FA和VitB12。采用SPSS10.0统计软件,进行直线回归相关分析。结果显示:四组DM患者血浆Hcy水平分别与对照组比较均显著性增高(P<0.05~0.01),并随DN患者肾脏损伤程度的加重而升高,每两组间相比有显著性差异(P<0.01)。四组DM患者血清FA、VitB12水平分别与对照组比较,除糖尿病无肾病组无显著性差异(P>0.05)外,其余三组均有显著性差异(P<0.01),每两组间比较均有显著性差异(P<0.01)并与血浆Hcy水平呈现负相关。结论:高Hcy血症是DM和DN患者的危险因素,血浆Hcy水平可作为DM和DN病情监测的有效指标,FA、VitB12的降低可能是诱发高Hcy血症的一个重要因素。     

双标记前列腺特异性抗原时间分辨荧光免疫分析试剂盒研究

目的研制钐（Sm）标记检测总前列腺特异性抗原（tPSA）及铕（Eu）标记检测游离前列腺特异性抗原（fPSA）的双标记时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）试剂盒。方法以抗PSA单克隆抗体101^#包被96孔微孔板，用Sm^3＋标记抗tPSA单克隆抗体102^#、Eu^3＋标记抗fPSA单克隆抗体201^#，采用双抗体夹心法建立t／fPSA双标记TRFIA。标准曲线由TRFIA检测仪自带的Log-Log_B函数处理。结果tPSA批内和批间变异系数（CV）分别为2．38％和3．91％，最低检测下限0．02μg／L，可测范围为0．02～250μg／L，回收率为101．3％；fPSA批内和批间CV分别为3．16％和3．34％，最低检测下限0．05μg／L，可测范围为0．05～250μg／L，回收率为103．2％。t／fPSA TRFIA试剂盒测定健康组、前列腺良性疾病组和前列腺癌组（Pca）的tPSA平均值为1．4μg/L、4．3μg/L、14．2μg/L，fPSA平均值为0．3μg/L、1．5μg/L、6．2μg/L。tPSA3．6μg/L、f／tPSA〈0．21为Pca与良性疾病的鉴别阈值。自制试剂盒与PE公司进口试剂盒同时测定血清样本，二者tPSA与fPSA的相关系数分别为0．99和Q97。结论自制t／fPSA TRFIA试剂盒的各项指标均达到临床检测要求，可替代国外同类产品。     

时间分辨免疫荧光法定量检测癌胚抗原(CEA)试剂临床应用研究

目的对自制时间分辨免疫荧光法定量检测癌胚抗原(CEA)试剂盒进行临床应用研究,为该试剂盒临床应用及临床疗效评价提供科学依据。方法收集血清标本326份,用自制试剂盒按试剂盒操作说明书对血样进行测定,并以化学发光法(R oche)为对照方法,W ALLAC公司的CEA时间分辨免疫测定药盒(A u toDELF IATMhCEA)作为复核试验,获取相关目标实验数据,并计算得“真实性”和“可靠性”等统计学数据。结果以化学发光法为对照试验,其阳性符合率为95.83%,阴性符合率为98.73%,检验无显著性差异;自制试剂盒的定量测定值与化学发光法的测定值较为一致,相关系数达0.93,相关性好。结论试剂盒检测性能与现在临床广泛应用的方法相仿,能满足临床应用的需要。