姜黄素类似物D33对大鼠机体免疫耐受的影响及机制

目的 姜黄素类似物D33对同种异体肢体移植原位再植模型大鼠的免疫功能的作用及机制。方法 构建SD/Wistar大鼠的同种异体肢体移植原位再植模型,随机分为对照组和D33组,D33组每日腹腔注射20mg/kg D33,对照组注射等体积生理盐水。另选择正常Wistar大鼠作为正常组。流式细胞术分析各组T细胞亚型分布以及血液中炎性因子TNF-α、IL-1、IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-5和IL-10 的含量。从D33组大鼠的胰岛和淋巴组织中分别分选受者来源DC细胞和供者来源DC细胞,Western blot法检测DC细胞中NF-κB、p38/MAPK、ERK/MAPK和Ⅰ型 IFN（IFN-α/β）通路的激活情况。结果 D33的大鼠的移植手术效果较佳。D33组受鼠血液中CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺/CD8⁺的比例均低于对照组,但高于正常组。D33组中TNF-α、IFN-γ、IL-1、IL-2和IL-5水平均低于对照组,而IL-4和IL-10水平高于对照组。受者来源DC细胞中,D33可明显抑制NF-κB、p38/MAPK、ERK/MAPK和Ⅰ型IFN（IFN-α/β）通路的激活,在供者来源DC细胞中,D33的影响并不明显。结论 D33通过抑制TLR4相关通路诱导机体免疫耐受。     

对可溶性TOLL样受体2判断脓毒症患者血流感染病原菌临床价值的研究

目的为脓毒症菌血症患者寻求可指导病原菌的标记物,以指导早期抗生素的合理使用。方法前瞻性观察天津市第一中心医院ICU 2012年8月至2015年3月的脓毒症患者147例,记录入住ICU确诊为脓毒症且血培养阳性时的常规检查：年龄、性别、生命体征、血常规、尿常规、便常规、出凝血项、血生化、 C反应蛋白（CRP）、降钙素原（PCT）、（1,3）-β-葡聚糖等,留取中心外周血培养, ELISA法测定可溶性TOLL样受体2（ sTLR2）及白细胞介素-8（ IL-8）表达量,计算急性生理学及慢性健康状况评分Ⅱ（ APACHEⅡ评分）等。计量资料假设检验采用单因素方差分析,计数资料采用χ2检验,绘制ROC曲线（受试者工作特征曲线）判断特异度和敏感度,以P＜0.05为差异具有统计学意义。结果依据血培养结果分为3组： GP组[革兰阳性（ G＋）球菌组]、 GN组[革兰阴性（ G-）杆菌]组、 FG组（真菌组）,3组患者年龄、 APACHEⅡ评分、生命体征指标和炎性指标体温、白细胞等基线水平相比,在血培养阳性时差异无统计学意义（P＞0.05）,所得结果亦显示本科致病菌以阴性菌为最常见。 sTLR2的表达量在GP组与GN组中相比,在GP组中的表达量明显高于GN组,且差异具有统计学意义, P＝0.000; sTLR2的表达量在在GP组与FG组中相比,差异无统计学意义, P＝0.187,但（1,3）-β-葡聚糖的表达量在 FG 组明显高于GP 组,且差异具有统计学意义, P＝0.000; sTLR2的表达量在GN组与FG组中相比, FG组中的表达明显高于GN组,且差异具有统计学意义, P＝0.000。 PCT、 CRP及IL-8在三组患者中两两比较差异无统计学意义（ P＞0.05）。诊断阴性菌感染时, sTLR2的曲线下面积为0.768,敏感度及特异度依次为88.90％及59.60％,最佳截断点为8.083 pg／mL,即sTLR2表达量高于8.083 pg／mL时,阴性菌感染的可能性较小, G＋球菌、真菌等可激活细胞膜表面TLR2受体的病原菌可能性较大。 PCT、 CRP、（1,3）-β-葡聚糖及IL-8在诊断G-杆菌感染时差异无统计学意义,曲线下面积小于0.5。结论 sTLR2结合（1,3）-β-葡聚糖等炎性指标,可提示脓毒症患者病原菌类型。     

小剂量脂多糖诱导血管内皮细胞TLR4的表达

目的:观察小剂量脂多糖(LPS)对人脐静脉内皮细胞(ECV304)TOLL样受体4(TLR4)表达的影响。方法:体外培养ECV304细胞,分别与LPS及LPS+TLR4抗体进行孵育。MTT法检测细胞的增殖活性,免疫组化染色法检测细胞表面TLR4的表达,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞核核内TLR4-mRNA及IL-8mRNA的表达。结果:LPS(10～50ng/mL)刺激ECV304细胞24h内,细胞增殖活性无明显变化(P>0.05);而以100ng/mL刺激24h后,细胞增殖活性明显降低(P<0.05),TLR4抗体对此无明显拮抗作用。LPS能明显上调ECV304表达TLR4、TLR4-mRNA及IL-8mRNA,其中10ng/mL的LPS在24h时、50ng/mLLPS在6～24h时,TLR4表达具有统计学意义(P<0.05);50ng/mL的LPS刺激ECV304细胞在4h及8h时,细胞核内TLR4mRNA表达均明显升高(P<0.05),而IL-8mRNA表达在8h时明显升高(P<0.05)。TLR4抗体对ECV304表达TLR4及TLR4-mRNA有拮抗作用(P<0.05),对IL-8mRNA表达无明显拮抗作用(P>0.05)。结论:小剂量LPS可诱导ECV304细胞表达TLR4并引起细胞活化,TLR4抗体可抑制TLR4的表达,但不能抑制细胞的活化。