极速实时荧光聚合酶链反应与常规方法对新型布尼亚病毒检测的评价

目的探讨极速实时荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)、实时荧光PCR、酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和胶体金免疫层析法(gold immunochromatography assay,GICA)4种方法检测新型布尼亚病毒的特异度和灵敏度,为发热伴血小板减少综合征的早期诊断提供依据。方法采集2017年6月1日至9月30日山东大学附属济南市传染病医院86例临床诊断为发热伴血小板减少综合征患者的血清样本,分别应用极速实时荧光PCR、实时荧光PCR、ELISA和GICA 4种方法进行检测。统计学分析采用χ^2检验。结果86份患者血清标本中,极速实时荧光PCR、实时荧光PCR、IgM-ELISA、IgG-ELISA、IgM-GICA、IgG-GICA的新型布尼亚病毒阳性分别为82份(95.34%)、79份(91.86%)、41份(47.67%)、8份(9.3%)、19份(22.09%)和3份(3.49%)。极速实时荧光PCR特异度为100%,灵敏度达到1×103拷贝/mL,3次重复扩增试验显示其Ct值变异系数均<2%。在发热伴血小板减少综合征进展的1期、2期、3期病程中,极速实时荧光PCR的阳性检出率为41份(97.62%)、34份(94.44%)、7份(87.50%),实时荧光PCR的阳性检出率为39份(92.86%)、33份(91.67%)、7份(87.50%),在1期和2期两个病程,极速实时荧光PCR阳性检出率略高;IgM-ELISA阳性检出率从1期(28.57%)到3期(87.50%)显著增高,2期、3期与1期相比,差异均有统计学意义(χ^2=8.347、7.561,均P<0.01);IgM-GICA的阳性检出率从1期(14.29%)到2期(33.33%)也有增高,差异有统计学意义(χ^2=3.962,P<0.05),但与其他方法相比,其检出率偏低。1期,实时荧光PCR阳性检出率显著高于ELISA(IgM和IgG)和GICA(IgM和IgG),差异均有统计学意义(χ^2=33.740、55.080、49.010、64.340,均P<0.01)。2期,实时荧光PCR的阳性检出率高于ELISA(IgM和IgG)和GICA(IgM和IgG),差异均有统计学意义(χ^2=7.700、46.720、23.700、50.630,均P<0.01)。3期,极速实时荧光PCR、实时荧光PCR和IgM-ELISA表现出同样高的阳性检出率,远高于IgG-ELISA和GICA(IgM和IgG)。实时荧光PCR阳性检出率和IgG-ELISA、IgM-GICA、IgG-GICA之间差异均有统计学意义(均χ^2=6.250,P<0.05)。结论极速实时荧光PCR在新型布尼亚病毒的早期检测中有更高的灵敏度和特异度,且重复性好、稳定度高,与传统实时荧光PCR相比大大缩短了扩增时间,对发热伴血小板减少综合征的早期快速诊断具有重要价值。     

Occult hepatitis C virus infection among haemodialysis patients

Background and study aims

Hepatitis C virus (HCV) infection is a severe problem among patients on maintenance haemodialysis who are at particular risk for blood-borne infections because of prolonged vascular access and potential for exposure to contaminated equipment. Occult hepatitis C virus infection (OCI) is defined as the presence of HCV RNA in liver or peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) in the absence of detectable HCV antibody or HCV RNA in the serum. In this study, we aimed to investigate the existence of occult hepatitis C virus infection in PBMCs of haemodialysis (HD) patients in one center. Moreover, we tried to link the condition to risk factors associated with HCV infection in those patients.

高密度脂蛋白对HepG2细胞代谢综合征相关新基因MSRG表达的影响

目的:观察高密度脂蛋白对HepG2细胞代谢综合征相关新基因MSRG表达的影响。方法:实验于2006-03/10在四川大学华西基础医学与法医学院医学分子生物学省级重点开放实验室完成。设计MSRG引物及Taqman探针,构建标准质粒,建立RealtimePCR定量检测MSRG表达的方法。以含5%无脂蛋白血清的低糖DMEM培养基培养HepG2细胞,分别加入不同浓度的高密度脂蛋白(0,25,50,100,200mg/L)孵育24h;以含100mg/L高密度脂蛋白的5%LPDS低糖DMEM培养基孵育HepG2细胞不同时间(0,6,12,24,36h),分别以0mg/L及0h为对照,通过RealtimePCR检测MSRG的表达。结果:①不同浓度高密度脂蛋白孵育细胞时,在0～100mg/L范围,MSRG表达随高密度脂蛋白浓度的增加有下降趋势;与0mg/L组相比,MSRG在50,100mg/L组表达差异具有显著性意义(P<0.05);与100mg/L组相比,高密度脂蛋白200mg/L组基因表达有所回升,但差异无显著性意义(P>0.05)。②不同高密度脂蛋白孵育时间0～24h组,MSRG表达随时间延长有下降趋势;与0h相比,12,24,36h组基因表达降低(P<0.05),24h组MSRG表达最低;与24h组相比,MSRG在高密度脂蛋白孵育36h组表达有所回升,但差异无显著性意义(P>0.05)。结论:在低浓度(0～100mg/L)及短时间内(0～24h)高密度脂蛋白可以抑制HepG2细胞MSRG的表达。     

应用抑制性消减杂交技术筛选HCV p7TP2反式调节基因

目的 应用抑制性消减杂交技术筛选HCV p7TP2反式调节基因.方法 采用实时定量PCR验证HCV p7下调p7TP2基因的表达,并应用抑制性消减杂交技术筛选并构建p7TP2下调表达基因的消减文库.用活细胞发光法检测p7TP2基因抑制Huh-7细胞系的增殖.结果 经同源性分析p7TP2下调表达的基因主要位于线粒体,并与细胞凋亡有关.p7TP2 基因转染的Huh-7细胞的活性被显著抑制.结论 p7TP2基因功能的研究为HCV致病机制的研究奠定了基础.     

眼部疾病的实时三维超声成像研究

目的探讨实时三维(three dimensional,3-D)超声评价眼部疾患的应用价值.方法应用实时3-D技术对28只分别患视网膜脱离、眼内异物、眼外伤及玻璃体积血等疾病的患眼进行三维超声成像,并与二维(two dimensional,2-D)超声检查结果、手术所见进行对比分析.结果所有患眼均能获得清晰的3-D图像,患眼内视网膜脱离的空间形态及范围、玻璃体积血、眼内异物的位置和形态、泪道囊肿均清晰可见.2-D测量的视网膜脱离高度和3-D的比较差异有显著性意义(P＜0.05),3-D和术中所见视网膜脱离的起止点比较无差异(P＞0.05).结论 3-D超声可以明确快速地显示眼部病变的立体结构和空间分布,与2-D超声比较,3-D可为手术提供更明确的诊断信息和空间定位信息.     

2009～2011年济南市流感样病例哨点监测资料分析

[目的]了解济南市流感病毒流行规律及变异特点,为流感防控提供依据。[方法]对2009年8月至2011年3月济南市2所流感哨点医院监测资料和病原学检测资料进行分析。[结果]2009年8月至2011年3月2所哨点医院门诊累计报告流感样病例7 207例,占同期门诊就诊病人总数的2.45%。7 207例流感样病例中,0～4岁占34.23%;5～14岁占24.45%。检测1 766例流感样病例咽拭子标本,阳性460例,阳性检出率为26.05%。流感样病例阳性检出率,2月为36.80%,9月为33.07%,10月为34.50%,11月为38.07%。460例阳性者中,H1型占0.43%,H3型占29.13%,甲型H1N1型占41.52%,B型占28.91%。[结论]秋、冬、春季为济南市流感高发季节,冬季以甲型H1N1为主。     

梓醇上调NGF、BDNF及mRNA表达伴随缺血性脑卒中大鼠神经功能恢复

目的:观察梓醇对缺血性脑卒中大鼠恢复早期神经功能恢复及缺血周围区大脑皮质神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。方法:建立大鼠大脑中动脉永久性局灶性缺血模型,行为学观察各组大鼠姿势反射、横木行走和抓握力量;HE染色观察大脑皮质神经元的病理改变;免疫组织化学染色和Realtime PCR检测缺大脑皮质NGF、BDNF蛋白及其mRNA基因表达。结果:假手术组无明显神经功能障碍;与模型组比较,梓醇30、60mg/kg给药组能明显改善缺血性脑卒中大鼠姿势反射,增强横木行走的能力和抓握力量(P<0.05,P<0.01);明显增加完整神经细胞的数量(P<0.01);且梓醇30、60mg/kg给药组NGF、BDNF及mRNA的表达比模型组明显上调(P<0.05,P<0.01)。结论:梓醇可上调缺血性脑卒中大鼠大脑皮质NGF、BDNF及mRNA基因表达,促进神经元存活、修复再生,加速其神经功能恢复。     

比格犬骨髓基质细胞和牙周韧带成纤维细胞体外再生组织能力的比较

目的 通过比较比格犬牙周韧带成纤维细胞(PDLFs)和骨髓基质细胞(BMSCs)体外促进牙周相关组织再生潜能,为牙周组织的再生治疗提供依据.方法 通过体外ELISA、免疫细胞化学染色、Von Kossa染色分别比较BMSCs和PDLFs这两种细胞的碱性磷酸酶(ALP)、骨保护素(OPG)和胶原Ⅻ、形成的钙化结节,用实时...     

Significant impact of pneumococcal conjugate vaccination on pediatric parapneumonic effusion: Italy 2006–2018

Etiology and serotyping of parapneumonic effusion (PPE) and the impact of vaccination was evaluated over a 12-year period, before and after the PCV13 introduction (2011) for Italian children From 0 to 16 years of age.Five hundred and two children were evaluated; 226 blood and 356 pleural fluid samples were obtained and tested using Realtime-PCR and culture. In the pre-PCV13 era S. pneumoniae was the most frequent pathogen identified (64/90; 71.1%) with a large predominance of serotypes 1 (42.4%), 3 (23.7%), 7F (5.1%) and 19A (11.9%).The impact of vaccination, calculated on children 0–8 years of age, demonstrated a significant reduction of PPE: with an incidence rate of 2.82 (95%CL 2.32–3.41) in the pre-PCV13 era and an age-standardized rate (ASR) of 0.66 (95% CL 0.37–1.99) in the post-PCV13 era, p < 0.0001. No increase in non-PCV13 serotypes was recorded. S. pneumoniae remained the most frequent pathogen identified in the post-PCV13 era in unvaccinated children with an unchanged serotype distribution: respectively 26/66 (39.4%), 25/66 (37.9%), 5/66 (7.6%), and 4/66 (6.1%) for 1, 3, 7F and 19A. On the other hand 7F and 19A disappeared in vaccinated children and serotype 1 and 3 decreased by 91.8% and 31.5%, respectively. Realtime PCR was significantly more sensitive than culture both in pleural fluid (79.7% vs 12.5%) and in blood (17.8% vs 7.4%).In conclusion, our findings indicate that routine immunization with PCV13 has significantly reduced the burden of childhood PPE in vaccinated children, without increasing PPE due to other bacteria and without serotype shift. Moreover, the impact of PCV13 may be underestimated due to the increase in pneumococcal surveillance in Italy. Data has also shown that Real-time PCR is an essential tool to better define the etiology of PPE and to monitor vaccination plans. Longer studies will be necessary to evaluate the role of herd protection in PPE prevention.     

基于微机的心电信号实时自动分析系统

作者介绍了在３８６微机上研制开发的心电信号实时自动分析系统，着重介绍了ＱＲＳ复合波的帝时检测算法和心律失常自动分析软件。该系统能实时显示任一导联心电波形，同时显示心率（ＨＲ）和早搏（ＰＶＣ）累积数；能自动识别十余种心律失常并报警；具有ＳＴ段分析功能，能实时检测ＳＴ段电平和斜率，经用美国ＭＩＴ心电数据库的部分数据对该系统进行测试，准确率达９５％以上。