快速斑点酶标法检测抗核抗体

目的建立一种快速、简便的抗核抗体(ANA)检测方法。方法采用快速斑点酶标法(Rapid-DotELISA,R-Dot-ELISA)检测20份ANA阳性系统性红斑狼疮(SLE)患者血清和20份阴性正常健康者血清的ANA。检测中采用不同浓度的核抗原、不同的封闭液、不同浓度的酶标抗体、不同显色时间,摸索最佳检测条件。确定检测条件后,采用R-Dot-ELISA法、ELISA法和免疫荧光法检测190例系统性自身免疫性疾病患者和50例健康者血清的ANA,比较R-Dot-ELISA法与ELISA法和免疫荧光法检测的一致性。结果核抗原浓度为40~160mg/L、封闭液为含1%牛血清白蛋白和10%~20%小牛血清的PBS,酶标抗体稀释度为1∶80~1∶320,显色时间3~5min。R-Dot-ELISA与ELISA法相比,检测结果一致率为95.4%(r=0.907,P0.05),与免疫荧光法相比,检测结果一致率为96.7%(r=0.932,P0.05)。结论 R-Dot-ELISA检测ANA具有较高的敏感性及特异性,且快速、简便,适用于基层流行病学调查和临床快速诊断。     

快速斑点酶标法检测抗丝聚蛋白抗体

目的 建立一种快速、简便的抗丝聚蛋白抗体(anti-filaggrin antibody,AFA)的检测方法。方法 采用快速斑点酶标法(Rapid-Dot-ELISA,R-Dot-ELISA)检测15份AFA阳性的类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者和15份AFA阴性的正常健康者血清的AFA。检测中采用不同浓度的丝聚蛋白、不同的封闭液、不同浓度的酶标抗体,摸索检测条件。确定检测条件后,采用R-Dot-ELISA和ELISA法检测100例RA患者和150例包括系统性红斑狼疮(SLE)、强直性脊柱炎等非RA的自身免疫病患者和50例健康者血清的AFA,比较两种方法检测AFA的一致性,并判断R-Dot-ELISA检测AFA对RA的诊断价值。结果 丝聚蛋白浓度为40~160 μg/mL,封闭液为含1%BSA和10%小牛血清的PBS,酶标抗体稀释度为1∶80~1∶320是较合适的检测条件。R-Dot-ELISA与ELISA法检测AFA,结果一致率为98％(r=0.947,P＜0.05),对RA诊断的敏感度、特异度等统计学指标无差异。结论 R-Dot-ELISA检测AFA快速、简便,且对RA的诊断具有较高的敏感性及特异性,适用于基层流行病学调查和临床快速诊断。