正交设计银翘散抗流感病毒作用的实验研究

目的 通过对银翘散各配伍与抗流感病毒药效之间关系来探讨其配伍规律.方法 用流感病毒滴鼻造成小鼠感染模型,以小鼠肺组织中病毒的血凝滴度作为观察指标,运用正交设计方法 ,观察银翘散各配伍与药效之间的关系.结果 银翘散降低流感病毒感染小鼠肺组织匀浆血凝滴度的必要因素有连翘、金银花、牛蒡子、荆芥穗、竹叶、生甘草、桔梗、薄荷,而淡豆豉的作用不明显（P＞0.05）.连翘与金银花、连翘与牛蒡子、连翘与荆芥穗、牛蒡子与薄荷、荆芥穗与桔梗有交互作用.结论 从降低流感病毒滴鼻感染小鼠肺组织匀浆血凝滴度的角度看,银翘散最佳组合为连翘2,金银花2,牛蒡子2,荆芥穗1,竹叶2,生甘草2,桔梗1,薄荷2,淡豆豉1.     

重组腺相关病毒介导的血红素加氧酶1基因和绿色荧光蛋白基因在肝移植大鼠肝脏中的表达

目的 构建提纯重组腺相关病毒介导的血红素加氧酶1基因(HO-1)和绿色荧光蛋白基因(GFP),并探讨其在肝移植大鼠肝脏中的表达情况.方法 克隆大鼠HO-1,构建重组腺相关病毒-HO-1(rAAV-HO-1)载体,酶切鉴定并进行测序,氯化钙共沉淀法与辅助质粒Virus helper、AAV-cap-rep转染包装细胞,应用肝素层析柱法纯化浓缩病毒,实时荧光定量PCR测定病毒滴度.应用二套管法建立Wistar→Wistar大鼠原位肝移植模型.将提纯的重组腺相关病毒-GFP(rAAV-GFP)在供肝冷保存阶段经门静脉靶向转染并孵育2 h后行大鼠原位肝移植,分别于术后1、3个月处死大鼠取材,冰冻切片荧光显微镜下观察不同组织GFP的表达情况及转染效率.结果 rAAV-HO-1重组子经酶切电泳检测表明插入片段大小正确,测序结果与Genbank一致.rAAV-GFP靶向转染供肝1、3个月冰冻切片荧光显微镜下观察,移植肝GFP表达效率均＞80%,且在心、肺、脾、肾、肠等组织中未见报告基因的表达.结论 成功构建并提纯了携带HO-1、GFP基因的高滴度的腺相关病毒,验证了腺相关病毒介导的GFP在肝移植大鼠肝脏中稳定高效的表达.