Shh、Gli-1在经低浓度MNNG转化的GES-1细胞中的表达及意义

目的研究经低浓度MNNG转化的GES-1细胞（MC细胞）中Shh、Gli-1mRNA及蛋白的表达,以探讨Shh信号通路与胃癌前病变的关系。方法低浓度MNNG（N-甲基-N＇-硝基-N-亚硝基胍）诱导GES-1（人永生化胃黏膜上皮细胞）转化为MC细胞,对照组为GES-1细胞。用RT-PCR检测ShhmRNA与Gli-1mRNA的表达,免疫细胞化学法检测Shh与Gli-1蛋白的表达。结果 Shh、Gli-1mRNA及蛋白在GES-1细胞中无表达,在MC细胞中表达阳性。结论 Shh信号通路可能参与了胃癌前病变过程。     

Gli-1信号通路对TGF-β1诱导的人胃癌细胞上皮间质转化和侵袭的影响

目的:探讨核转录因子神经胶质瘤关联癌基因同源物1（glioma associated oncogene homolog 1,Gli-1）对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人胃癌SGC-7901细胞发生上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的作用机制。方法:体外采用10 ng/ml TGF-β1对胃癌SGC-7901细胞进行处理,使用倒置显微镜观察细胞形态变化,RT-PCR和Western blot检测EMT上皮表型蛋白E-cadherin和间质表型蛋白Vimentin的表达水平;Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力变化,检测TGF-β1 对SGC-7901细胞发生EMT 的影响;同时采用RT-PCR和Western blot检测Gli-1的mRNA和蛋白表达水平。随后进一步采用Gli-1基因特异性阻断剂GANT 61阻断Gli-1表达,并使用TGF-β1（10 ng/ml）对SGC-7901细胞进行处理,RT-PCR 和Western blot检测Gli-1、E-cadherin和Vimentin mRNA 及其蛋白表达水平的改变,并使用Transwell细胞侵袭实验检测阻断Gli-1对SGC-7901细胞侵袭能力的影响。结果:TGF-β1可以诱导人胃癌SGC-7901细胞发生上皮间质转化并促进细胞侵袭。TGF-β1可以在mRNA和蛋白水平下调上皮表型蛋白E-cadherin的表达、提高Gli-1和间质表型蛋白Vimentin的表达。TGF-β1可以明显提高SGC-7901细胞侵袭,而阻断Gli-1后可以抑制TGF-β1诱导的人胃癌SGC-7901细胞上皮间质转化和细胞侵袭。结论:胃癌SGC-7901细胞中Gli-1 可能参与TGF-β1 介导的EMT 的发生,Gli-1 可能作为胃癌基因治疗中的有效靶点发挥作用。     

原发性肝细胞癌组织Shh和Ptch-1与Gli-2表达及生物学意义的研究

目的:探讨原发性肝细胞癌(HCC)Sonic hedgehog信号通路信号肽Shh、膜受体Ptch-1和核转录因子Gli-2的表达及其生物学意义.方法:将44例HCC组织及其相应的癌旁肝组织制成含88个微组织的组织芯片,采用免疫组织化学方法分别检测了Shh、Ptch-1和Gli-2在两种组织中的表达情况.结果:在HCC组织中,Shh与Ptch-1阳性率(63.6%和45.5%)均显著高于癌旁肝组织(36.4%和25.0%),P均<0.05.Gli-2在HCC中表达阳性率(68.2%)显著高于癌旁肝组织(38.6%),P<0.01;且与HCC的组织学分级以及侵袭性相关,P均<0.05;与肿瘤大小和HBV感染无关.结论:增强的Gli-2活性导致细胞异常增殖,其所引起的Shh信号通路的过度激活可能促进HCC的发生和发展.     

Gli抑制剂诱导胃癌细胞凋亡作用的研究

目的 研究Gli抑制剂GANT61对人胃癌细胞AZ521和AGS凋亡的作用.方法 应用不同浓度(0、10、20μmol/L)的GANT61处理AZ521和AGS细胞24 h后,蛋白免疫印迹法(Western blot)观察GANT61作用于AZ521和AGS细胞后对Gli-1、Gli-2、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达的影响.流式细胞术观察细胞凋亡及Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达.结果 Western blot结果显示GANT61可以剂量依赖性显著下调AZ521和AGS细胞Gli-1、Gli-2和Bcl-2蛋白表达和增加Caspase-3蛋白表达.流式细胞术检测显示10 μmol/L GANT61作用AZ521,AGS细胞后凋亡率为(19.37±0.81)％和(16.1±0.26)％,显著高于0 μmol/L GANT61凋亡率(4.23±0.35)％和(6.00±0.87)％(P＜0.05);10 μmol/L和20 μmol/L GAN761的AZ521细胞中Bcl-2蛋白表达水平分别为355.33±10.12、312.67±7.37,与0μmol/L GANT61 423.33±11.37相比显著降低(P＜0.05);10μmol/L和20 μmol/L GAN761的AGS细胞中Bcl-2蛋白表达水平分别为306.67±4.16、273.33±8.02,与0 μmol/L GANT61388.33±11.06相比显著降低(P＜0.05);10 μmol/L和20 μmol/L GANT61的AZ521细胞中Caspase-3蛋白表达水平分别为305±9.64、360.24±8.54,与0 μmol/L GANT61 261.12±11.53相比显著增高(P＜0.05);10 μmol/L和20 μmol/L GANT61的AGS细胞中Caspase-3蛋白表达水平分别为255.00±6.56、310.67±8.50,与0μmol/L GANT61 198.33±2.50相比显著增高(P＜0.05).结论 GANT61通过特异性抑制Gli-1,Gli-2蛋白表达从而调节AZ521和AGS细胞中Bcl-2和Caspase-3蛋白表达水平,诱导细胞凋亡.     

SHH和Wnt在人子宫内膜癌组织中的表达及意义

目的:探讨SHH和Wnt信号及其下游信号分子Gli-1和Axin2在人子宫内膜癌中的表达及相关性,分析其在子宫内膜癌发生发展中的作用。方法:应用免疫组织化学方法检测正常人子宫内膜、内膜增生和子宫内膜癌37例中SHH和Wnt信号的表达,采用RT-PCR方法检测上述组织中Gli-1和Axin2的表达情况。结果:内膜增生组和癌组SHH和Wnt的表达均强于正常组(P<0.05)。Gli-1的表达在正常组和子宫内膜增生组类似,在癌中表达较低;Axin2的表达在3组中类似都较低,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:SHH和Wnt的表达均与子宫内膜癌的发生密切相关,Gli-1主要参与子宫内膜癌进展变化。     

Gli-1在肺癌患者的癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨Gli-1蛋白在肺癌患者癌组织中的表达及其临床意义。方法:通过免疫组织化学法检测60例肺癌患者的癌组织及50例癌旁组织中Gli-1的表达,并分析Gli-1在肺癌组织中的表达与临床资料的关系。结果:Gli-1蛋白在肺癌组织中的阳性表达明显高于癌旁组织(P<0.05),Gli-1在肺癌中的表达与患者的年龄和性别无明显相关(P>0.05),但与淋巴结转移、远处转移、侵袭范围及临床分期显著相关(P<0.05)。结论:Gli-1可能在肺癌的发生、发展、侵袭和转移过程中具有重要作用,检测肺癌组织中Gli-1表达水平可能为肺癌的早期诊断提供依据。并对肺癌的恶性程度评估及预后判断有一定参考价值。     

口腔鳞状细胞癌中Hh通路关键分子

[目的]探讨Hh通路关键分子Shh、Ptch、Gli-1在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义.[方法]采用免疫组织化学方法分别检测40例口腔鳞状细胞癌组织和30例口腔黏膜正常组织中Shh、Ptch、Gli-1的表达.[结果]Shh、Ptch、Gli-1在30例正常口腔黏膜中均无表达,在口腔鳞状细胞癌中,Shh、Ptch、Gli-1阳性率分别为62.5％、60.0％和65.0％.Shh、Gli-1的阳性表达与肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期相关(P＜0.05),Ptch表达与淋巴结转移相关(P＜0.05).Spearman等级相关分析显示Shh、Ptch和Gli-1的表达间均存在正相关(rs=0.527、0.406、0.578,P＜0.01).[结论]Shh、Ptch、Gli-1蛋白在口腔鳞状细胞癌组织中均过表达,三者可能通过配体依赖途径被激活并参与口腔鳞癌的发生发展、转移.     

乳腺癌组织中Hedgehog相关蛋白的表达及其临床意义

目的 探讨Hedgehog相关蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法 从334例乳腺癌 组织中制备组织块。免疫组织化学法检测六种Hedgehog信号蛋白（Shh、ptch、Smo、Gli-1、 Gli-2和Gli-3）的表达。结果 Hedgehog信号蛋白表达与一些预后因素显著相关,包括淋巴结转 移与Shh（P=0.001）、Gli-3 (P<0.001)、Ptch(P=0.025)的相关性、分期与Shh和Ptch表达（P分别 为0.007和0.037）的相关性,核分级与Smo(P=0.004)和Gli-3（P=0.026）的相关性,组织学分级与 Smo(P=0.007)的相关性。Shh、Ptch、Smo、Gli-1、Gli-2和Gli-3表达在表型之间差异有统计学意义 （P分别为<0.0001、<0.0001、0.004、0.039、0.031和0.003）。Gli-2表达与较差的整体生存结果相关 （P=0.012）。结论 Hedgehog通路表达激活与乳腺癌的侵袭性相关,可能是乳腺癌的一个有效的治 疗靶点。Gli-2可作为乳腺癌的一个预后指标。