Mast cell corticotropin-releasing factor subtype 2 suppresses mast cell degranulation and limits the severity of anaphylaxis and stress-induced intestinal permeability

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Dinitrophenyl (DNP) hapten sandwich staining (DHSS) procedure : A 10 year review of its principle reagents and applications

Over the past 10 years an immunoperoxidase method using dinitrophenyl (DNP) hapten-labelled primary or secondary probes has been devised. Its widely successful application in research and diagnostic work has depended upon the development of certain key reagents. These include a novel non-deleterious DNP labelling compound, a unique multivalent monoclonal bridge antibody, and an efficient DNP hapten substituted or anti-DNP linked marker enzyme. In this article the development of these reagents and various modifications of the basic technique are reviewed in conjunction with the special applications accruing from their use.     

半抗原DNP修饰自体肿瘤疫苗治疗晚期恶性黑色素瘤的临床研究

目的 探讨半抗原二硝基氟苯（dinitrophenyl,DNP）修饰自体肿瘤疫苗在晚期恶性黑色素瘤治疗中的作用。方法 84例Ⅲ期或Ⅳ期可切除恶性黑色素瘤患者随机分为半抗原DNP修饰瘤苗组和半抗原DNP未修饰瘤苗组,每组42例,分别采用半抗原DNP修饰的自体肿瘤疫苗和半抗原DNP未修饰的自体瘤苗联合化疗进行治疗,采用流式细胞技术检测两组患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞（regulatory T cell,Treg）数量及淋巴细胞亚群的变化,观察迟发型超敏反应（delayed type hypersensitivity,DTH）及随访生存情况。结果 治疗后半抗原DNP修饰瘤苗组患者CD4＋-IFN-γPE、CD8＋-IFN-γPE淋巴细胞亚群较治疗前及半抗原DNP未修饰瘤苗组明显升高（P均〈0.05）,而CD4＋CD25＋Treg数量减少（P〈0.05）,半抗原DNP未修饰瘤苗组治疗前后无明显变化（P〉0.05）;半抗原DNP修饰瘤苗组患者较半抗原DNP未修饰瘤苗组DTH明显增强,硬结明显增大,两组DTH达到阳性结果（≥5 mm）的百分比分别为94.6%和45.0%（P〈0.05）。半抗原DNP修饰瘤苗组患者1年、2年和3年生存率分别为95.0%、73.0%和65.5%,总生存率（overall survival,OS）为79.3%,无疾病生存率（disease free survival,DFS）为81.1%;半抗原DNP未修饰瘤苗组患者1年、2年和3年生存率分别为90.1%、59.0%和43.5%,OS为64.2%,DFS为74.0%,两组患者生存时间差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 半抗原DNP修饰的自体瘤苗可增强恶性黑色素瘤患者特异性细胞介导的免疫反应,抑制机体免疫耐受,从而延长患者生存时间。     

瘤内缓释治疗对B16黑色素瘤小鼠影响的实验研究

目的：探讨肿瘤内缓释治疗对B16黑色素瘤的影响及其机制。方法:将皮下接种B16肿瘤细胞后的成瘤小鼠随机分成4组进行治疗：①生理盐水（NS）对照组,瘤内注射NS;②阿糖胞苷（Ara-C）对照组,瘤内注射Ara-C;③单纯缓释治疗组,瘤内注射Ara-C+缓释液;④免疫缓释液治疗组,瘤内注射Ara-C+缓释液+二硝基苯 (DNP)。4d后重复治疗,观察各组小鼠肿瘤的生长情况。两次治疗后1周分离瘤体,HE及网状纤维、弹力纤维、胶原纤维染色,观察瘤体病理改变,用流式细胞术检测脾内CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞浸润情况。结果:缓释治疗能够控制肿瘤的生长;HE染色显示,两缓释治疗组瘤内出现大片坏死区域,纤维特殊染色显示,两缓释治疗组三种纤维含量均明显增加(P＜0.01);流式细胞术检测表明,缓释治疗组的CD4+T细胞数量明显增多(P＜0.05),但CD4⁺/CD8⁺T比值无明显变化。结论:瘤内缓释治疗通过直接破坏肿瘤细胞及增加肿瘤抗原性,从而发挥明显的抗肿瘤作用,为肿瘤治疗提供了新的思路。     

二硝基苯修饰B16细胞对黑色素瘤小鼠疗效的实验研究

目的：探讨半抗原——二硝基苯（DNP）修饰的恶性黑色素瘤（恶黑）细胞激活树突状细胞（DC）后,对转移性黑色素瘤小鼠的抗肿瘤效应。方法：采用DNP修饰恶黑细胞B16（H-2^b）,在体外激活C57BL/6小鼠（H-2^b）外周血来源的DC,用于激发自体的T细胞,观察其对T细胞的增殖和特异性T细胞杀伤功能。在由B16细胞接种产生的荷瘤C57BL/6小鼠实验中,将小鼠随机分为5组,于左背部注射及于左耳背面涂抹DNP修饰B16瘤苗联合DC（DNP-B16-DC组）、B16激活DC（B16-DC组）、单纯DC（DC组）、单纯DNP（DNP组）和生理盐水（生理盐水组,每组6只）,观察各组抑瘤率和迟发型超敏反应。结果：经DNP修饰的B16细胞激活的DC,诱发的T细胞增殖能力和对B16细胞的特异性杀伤效应均明显高于未其修饰的B16细胞组和DC组。荷瘤小鼠实验显示,DNP-B16-DC组和单纯DNP组小鼠耳肿胀明显增加,其迟发型超敏反应明显强于其他各组。实验中DNP组有1只小鼠用药后20d死亡,其余小鼠DNP-B16-DC组抑瘤率（96.16%）明显高于B16-DC组（50.11%）、DC组（22.12%）和DNP组（57.79%,P〈0.01）,显示DNP-B16-DC具有更强的抑瘤作用。结论：DNP修饰B16所激活的DC可以诱导更强的特异性抗肿瘤作用。     

Inhibitory checkpoint receptors control CD8+ resident memory T cells to prevent skin allergy

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