用氮源调控的FLD1启动子开发在毕赤酵母中生产外源蛋白的高细胞密度流加补料培养技术

构建了一株可在P．pastoris甲醛脱氢酶1基因的启动子（PFLD）转录控制下，表达稻根霉脂肪酶基因的毕赤酵母重组菌，以研究该表达系统可否用于无需甲醇诱导的高细胞密度流加补料培养技术生产重组蛋白。使用PFLD系统开发了简单可靠的流加补料技术，在诱导期分别用甲胺和山梨醇作为氮源和碳源。在3种恒定生长速率下分别进行3项流加补料发酵试验，     

昆明地区酵母样真菌致患儿腹泻结果分析

近年来，由于广谱抗生素、免疫抑制剂和皮质类固醇激素的大量应用，由细菌引起的患儿腹泻虽然被控制，但是由酵母样真菌引起的患儿腹泻却日益增多。同时，国内对酵母样真菌引起医院内感染的报道也不断增多。为进一步分析昆明地区酵母样真菌致患儿腹泻的相关情况，我们对2005年12月至2007年12月我院567份腹泻患儿粪便标本中分离出的106株酵母样真菌作回顾性探讨。     

临床标本的酵母样真菌分布及药敏分析

目的:探讨各种临床标本的酵母样真菌分布及常用抗真菌药氟康唑(大扶康)的耐药性.方法:收集2003年1月至2003年12月份临床标本怀疑真菌感染患者的标本分离菌株334株,用纸片扩散法测定其耐药性.结果:各种标本真菌感染以白色念珠菌和热带念珠菌为主,氟康唑(大扶康)对白色念珠菌的耐药率为1.3％,对热带念珠菌的耐药率为8.8％,对光滑念珠菌的耐药率为40％,对克柔念珠菌的耐药率为25％.结论:真菌感染已成为临床标本中的常见感染,而且耐药率也在逐渐增高,尤其是光滑念珠菌和克柔念珠菌,对氟康唑(大扶康)的耐药率分别为40％和25％.应引起临床和医院管理者的高度重视.     

念珠菌对7种常用抗真菌药物敏感实验结果分析

近年来酵母样真菌感染已成为医院内感染的重要部分，随着广谱抗菌素、糖皮质激素和免疫抑制剂的广泛应用；肿瘤结核等大量慢性消耗性疾病的出现；器官移植，各种导管介入治疗和手术增加；导致条件致病性真菌(念珠菌)感染日益增多。抗真菌药物相继问世和耐药菌株的出现，抗真菌药物敏感实验逐渐为人重视。我们分析了我院2003下半年住院患者128例真菌感染的鉴定及药敏实验的结果，目的为临床合理使用抗菌药，有效预防真菌感染提供依据。     

D2-43病毒E蛋白在酵母细胞表面的展示

目的：在酵母细胞表面展示登革2型病毒43株(D2—43)的E基因，探索利用酵母表面展示系统建立DNA改组筛选平台的可行性。方法：通过RT-PCR扩增获得D2-43的E基因，将该基因亚克隆至T载体后，再克隆至酵母表面展示载体pYDI，于酿酒酵母EBY100中利用半乳糖进行诱导表达。表达产物采用间接免疫荧光法和FACS进行检测。结果：酵母表面展示产物可与D2-43的腹水抗体特异性地结合；在半乳糖诱导后24h，展示E蛋白的酵母细胞百分数达22．07％。结论：本研究为建立基于酵母表面展示系统的DNA改组筛选平台奠定了基础。     

一种新的抗辐射性相关蛋白AAl2和CHKl相互作用研究

目的：研究AAl2蛋白与CHKl蛋白的相互作用。方法：用在大肠杆菌中表达纯化的AAl2(LG21)蛋白制备多克隆抗体，Western印迹检测抗体的特异性；用自制的抗体在A1-5和B4细胞中进行了免疫共沉淀实验；同时将AAl2与Chkl基因克隆入酵母双杂交载体中，将重组质粒导入酵母菌AH109中，检测报告基因的表达情况。结果：Western印迹结果表明该抗体可以与AAl2蛋白特异结合；并用免疫共沉淀实验验证了从12蛋白与CHKl蛋白在哺乳动物细胞体内的相互作用。同时用酵母双杂交实验验证了AAl2蛋白与CHKl蛋白在酵母体内的相互作用，β-半乳糖苷酶活性分析和α-半乳糖苷酶活性分析结果均为阳性。结论：AAl2蛋白和CHKI蛋白之间存在相互作用，此结果为进一步研究新基因AAl2的功能奠定了基础。     

硒与硒酵母的药理及临床研究概述

本文对我国近年来硒的基础研究和硒酵母片的临床研究作了简要的概述。     

二性霉素B体外抗酵母样真菌敏感试验方法的研究

本文对酵母样真菌体外药敏试验的方法进行研究，结果表明培养基，接种菌量，孵育时间，终点值判断标准对结果影响较大，其Ｐ〈０．０５，孵育温度对测定结果影响不大，Ｐ〉０．０５。     

粗糙脉孢菌漆酶基因的克隆及在毕赤酵母中的初步表达

采用连续延伸PCR方法克隆到粗糙脉孢菌（Neurospora crassa）漆酶基因，并将其克隆到表达载体pPIC9k，重组质粒经线性化、电激转化Pichia pastoris KM71，部分阳性克隆的PCR结果表明：漆酶基因已整合到巴斯德毕赤酵母染色体上，重组菌经甲醇诱导后3～5d产漆酶量最高，为2-3U／mL。     

酵母硒对小鼠EAC瘤生长和抗氧化机能的影响

目的观察酵母硒对小鼠艾氏腹水瘤(EAC)生长及机体氧化机能的影响。方法将30只小鼠分为3组(对照组、低剂量酵母组和高剂量酵母组),酵母硒组小鼠通过灌胃的方法分别灌注酵母硒溶液,剂量分别为107μg/kg.BW.d和214μg/kg.BW.d,灌胃第13 d接种EAC,第23 d后测定小鼠肿瘤重和血清中丙二醛(M DA)含量、谷胱甘肽过氧化酶(G SH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果酵母硒可抑制小鼠EAC的生长,同时显著提高血清G SH-Px活性(P<0.05),极显著提高血清SOD活力(P<0.01),高剂量酵母硒降低血清M DA水平(P<0.05)。结论酵母硒可抑制小鼠移植肿瘤的生长,显著提高机体抗氧化能力。