重庆地区肝细胞癌P53基因突变类型的研究

重庆地区肝细胞癌ｐ５３基因突变类型的研究肖文华刘为纹吕有勇李诤肝癌的病因存在明显的地区差别［１］。目前研究表明，突变是抑癌基因ｐ５３失活的重要机理［２，３］。肝癌ｐ５３基因突变存在２种类型：（１）突变散在于各外显子的散在型；（２）位点特异突变型。我们...     

人SNCA基因真核表达载体的构建及其在PC12细胞中的表达

目的:构建含人野生型及致病突变A30P、A53TSNCA基因的重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA,并通过稳定转染获得过表达人野生型及致病突变A30P、A53T α-synuclein(SNCA)的单克隆PC12细胞株.方法:通过RT-PCR方法扩增SNCA基因,T-A克隆后测序.在此基础上利用单核苷酸差异引物定点诱变法相继构建含SNCA基因编码区EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ两酶切位点的同义突变及其致病突变G88C(Ala30Pro)、G209A(Ala53Thr)的重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA,并以PCR、双酶切、测序鉴定.以重组质粒pEGFP-C3-SNCA通过脂质体转染方法转染PC12细胞;以G418进行筛选;以有限稀释法进行亚克隆获得稳定过表达人野生型及致病突变A30P、A53T α-synuclein的单克隆PC12细胞株,并以稳定转染pEGFP-C3的PC12细胞作为对照组细胞,通过RT-PCR、Western blot及荧光显微镜鉴定各单克隆PC12细胞株.结果:PCR、酶切及测序证明重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA构建成功.RT-PCR、Western blot及荧光显微镜确认目的基因序列在PC12细胞稳定过表达.结论:成功地构建SNCA基因WT及A30P与A53T突变型的重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA;成功获得过表达人野生型及致病突变A30P、A53T α-synuclein的单克隆PC12细胞株.     

30例胃癌p53,雌孕激素受体测定分析

应用免疫组织化学方法（Ｓ－Ｐ法）检测３０例胃癌组织中突变型基因ｐ５３、雌激素受体（ＥＲ）、孕激素受体（ＰＲ）表达。结果表明：胃癌组织ｐ５３总阳性率为２７．６％，ＥＲ、ＰＲ总阳性率为３６．０％；ｐ５３、ＥＲ、ＰＲ在低分化癌中表达率高；ｐ５３与ＥＲ，ＰＲ阳性一致率达６０％。提示ｐ５３、ＥＲ、ＰＲ阳性者胃癌细胞脑分化、预后差。     

iNOS、p53在幽门螺杆菌相关胃病中的表达

目的 :研究幽门螺杆菌 (H pylori)感染时不同胃粘膜病变中诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)与p5 3的表达情况 ,探讨H pylori感染与胃癌形成的分子机制。方法 :采用免疫组化法检测 12 6例患者胃粘膜iNOS与p 5 3的表达情况。H pylori检测采用尿素酶试验法和Warthin—Starry银染法。结果 :12 6例患者中H pylori阳性 72例 ,H pylori阴性 5 4例。iNOS在炎性细胞的表达率CSG和CAG组明显高于DyS和GC级 (P <0 0 5 )。iNOS在腺上皮细胞的表达率DyS和GC组明显高于CSG和CAG组 (P <0 0 5 )。结论 :炎性细胞来源的iNOS起引发凋亡的作用 ,而腺上皮细胞产生的iNOS有抑制凋亡的作用。H pylori感染激活iNOS通过p5 3介导凋亡可能是H pylori诱发癌变的机制之一。     

槲皮素对NB4细胞株p53及蛋白的影响

目的研究治疗白血病的有效药物。方法将槲皮素作用于培养的NB4细胞株,应用RT-PCR及Westem bolt方法,研究不同浓度槲皮素(30、60、90μmol/L)诱导细胞24、48、72、96、120h后,急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株中突变型p53基因及蛋白表达的情况。结果证实其在30～90μmol/L浓度时对突变型p53基因无影响,而对突变型p53蛋白的表达有抑制作用。结论本研究为槲皮素应用于急性早幼粒细胞白血病的研究提供了有效手段。     

正常及突变MyBPC与肌凝蛋白结合功能的对比研究

目的　比较正常及突变 My BPC与肌凝蛋白的结合功能 .方法　重叠 PCR法制备正常及突变 My BPC的表达载体 ,大肠杆菌 BL- 2 1中表达并提纯蛋白 . 10 0 μL 含 2 .2 μmol· L- 1肌凝蛋白溶液中 ,分别加入不同浓度 My BPC蛋白 ,经离心、 SDS- PAGE,密度法测定两者的结合率 .结果　3774D1 8,32 2 3S1 4 0 结合率分别为 (6 8.2 0± 1.72 ) % ,(2 4.41±2 .10 ) % ,较正常 My BPC (82 .70± 2 .44 ) %显著降低 (n=5 ,P<0 .0 1) .结论　为家族性肥厚型心肌病突变基因的“肽类毒剂”致病学说提供了依据     

突变型人白细胞介素-2基因在大肠杆菌中的表达

目的：建立突变型人白细胞介素-2（rhIL-2）基因大肠杆菌表达系统，为rhlL-2的生产及临床应用奠定基础。方法：自人胎盘组织中提取总RNA，逆转录PCR（RT-PCR）扩增突变型人IL-2基因cDNA，通过对下游引物的设计将编码125位半胱氨酸（c125）的密码子TGT更改为编码丝氨酸的密码子TCT。构建表达型重组质粒pBV-IL-2，温度诱导表达．表达产物行SDS一聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）及WesternBlot鉴定。结果：DNA序列分析证实，重组质粒pBV-IL-2含有突变型人IL-2编码序列及正确的开放读码框架。SDS-PAGE显示，诱导表达碎菌后的沉淀中有分子质量大小约为16．5ku的外源蛋白产生。经Western印迹（WesternBlot）证明为rhlL-2。结论：成功构建了突变型人白细胞介素-2大肠杆菌表达系统。表达产物主要以包涵体的形式存在于碎菌后的沉淀中。     

Ser-125突变型人白细胞介素-2在山羊乳腺中的瞬时表达

用定点突变法得到Ser125突变型人白细胞介素2(Ser125hIL2)cDNA,然后与山羊β乳球蛋白(BLG)基因的上游调控序列融合,构建了pBLG—Ser125hIL2乳腺定位表达载体。表达载体经脂质体包裹后,经乳腺导管注入妊娠后期山羊乳腺内,进行瞬时表达。分别于山羊分娩后1～10d采奶,ELISA方法检测乳汁中Ser125hIL2含量。山羊乳汁中的含量为0.83～6.45μg/L。     

弥漫性中线胶质瘤伴H3K27M突变的MRI表现

【摘要】目的：探讨弥漫性中线胶质瘤伴H3 K27M突变的MRI影像学特点。方法：回顾性分析经手术或活检病理证实的37例弥漫性中线胶质瘤伴H3 K27M突变患者的临床及影像资料。对肿瘤的部位、形态、囊变坏死、出血、瘤周水肿、扩散受限、强化程度及脑脊液播散等影像学特点进行分析。结果：15例位于脑干,7例位于丘脑,1例位于第三脑室,6例中线部位多发病灶并累及一个或多个脑叶,8例位于脊髓。18例形态较为规则,边界较清楚;19例形态不规则,边界不清楚。18例可见不同程度囊变或坏死,6例内部可见出血。3例可见轻度瘤周水肿。12例行DWI检查,3例无明显扩散受限,9例轻度不均匀扩散受限。增强后强化方式不一,9例无强化,15例呈斑点、斑片状轻度强化,9例呈花环状明显强化,4例呈条片状明显强化。8例髓内肿瘤,5例存在脑脊液播散。结论：弥漫性中线胶质瘤伴H3 K27M突变的MRI表现具有一定共性特征,肿瘤多位于中线结构,囊变或坏死多见,瘤周水肿少见,增强后多无强化或点片状轻度强化,坏死可见环形强化。这些磁共振征象可为临床诊断提供参考。