垂直坠落

<正>世界爱恨难测,灵魂在沉沦的这一刻,我们,垂直坠落。[序幕]你听说过那传说中的论坛了吗?传说中的论坛?对啊,那个只要你在里面倾诉自己内心最隐蔽肮脏的秘密,再许下一个愿望,那么你的愿望就会被实现的论坛。就是要有等价交换的勇气噢!论坛名称:我们的世界我们的梦论坛宣言:谁说爱就是好的?善良就是伟大的?宽容就是应该的?背叛,仇恨,冷漠,欺辱,迫害,排挤,明明都生生不息地植根在空气里。伪善的布道者一手翻着《圣经》,一     

幽门螺杆菌BabA2/UreI融合基因表达质粒的构建

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）疫苗被认为是控制Hp感染有效的方法之一。本研究联合应用Hp BabA2和UreI基因作为构建Hp DNA疫苗的目的基因，成功构建了pcDNA3．1／BabA2/UreI真核表达质粒。     

p21WAF1与p27KIP1真核双表达载体的构建鉴定及在胃癌细胞中的表达

目的 构建p21WAF1与p27KIP1真核双表达载体,体外转染胃癌7901细胞,观察其在胃癌细胞中的表达及相关特性.方法 提取人全血总RNA,利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增p21WAF1和p27WAF1基因并将其分别克隆到真核双表达载体pIRES中构建重组质粒pIPES-p27KIP1-p21WAF1,经酶切和测序鉴定重组质粒.脂质体介导重组质粒plRES-p27KIP1.p21WAF1"转染胃癌7901细胞,收集并提取转染后12、24、48、72 h和5 d各细胞的总RNA,逆转录成cDNA,荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测各细胞中p21WAF1和p27KIP1在RNA水平的表达.带有绿色荧光蛋白的pIRES-EGFP作为对照.结果 RT-PCR扩增分别获得约500和600 bp大小的产物,重组质粒pIRES-p27KIP1.p21WAF1经酶切和测序鉴定证实为p21WAF1和p27KIP1基因.转染胃癌7901细胞48 h时转染率为68%.与空质粒对照组比较,重组质粒转染胃癌7901细胞12、24、48、72 h和5 d后FQ-PCR证实p27KIP1的Ct值(cycle threshold,Ct)分别减少8.2、10、10、7.4和6.7,p21WAF1的Ct值分别减少7.4、8.2、8.2、6.3和5.70其中24 h和48 h的Ct值减少最大.结论 真核双表达载体pIRES-p27KIP1.p21WAF1构建成功并能在胃癌7901细胞内高效表达.     

凋亡素基因序列重组及其真核表达载体的构建

目的:提高凋亡素基因在肿瘤细胞中的表达效率,增强其诱导肿瘤细胞凋亡的生物学活性.方法:通过两次PCR,以pcDNA-VP3质粒为模板,扩增出带Kozak序列(真核核糖体结合位点)的凋亡素基因VP3.将其克隆到真核表达载体pRevTRE的多克隆位点,构建成凋亡素的真核表达载体pRevTRE-VP3,将该质粒分别以限制性内切酶BamHI和XhohI进行酶切鉴定,将初步鉴定显示可能克隆有目的基因的质粒进行测序鉴定.结果:测序结果表明,本研究合成的凋亡素基因与Noteborn报告的凋亡素基因序列一致,同源性为l 00%.在其起始密码子前添加了Ko zak序列的凋亡素基因已成功克隆到真核表达载体pRevTRE.结论:采用两次PCR法可提高表达效率的真核核糖体结合位点添加到凋亡素基因序列起始密码子前端,并构建成凋亡素真核表达载体.     

HBV转录激活蛋白HBx、MHBst78MHBst155真核重组载体构建

目的分别构建人乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白、羧基端截断的中分子表面蛋白MHBst78、MHBst155编码基因的真核重组表达载体,以便进一步研究其转录激活功能及对宿主细胞信号传导通路的影响。方法设计合成3对寡核苷酸引物,以adr亚型HBV质粒pHBVDNA为模板,采用PCR法分别扩增HBVX基因、MHBst78与MHBst155编码基因片段;用HindⅢ,KpnⅠ双酶切HBVⅩ基因;用HindⅢ和BamHⅠ双酶切MHBst78与MHBst155编码基因片段后,分别定向插入到真核表达载体pcDNA3.1相应酶切位点,转化宿主菌JM109,提取质粒,分别用上述内切酶酶切及DNA测序鉴定重组质粒。结果酶切重组体显示所切下的片段大小均与预计相符,测序结果与文献报道序列及预计结果一致。结论成功构建了HBVX基因、羧基端截断的HBV中分子表面蛋白MHBst78、MHBst155编码基因的真核重组表达载体,为进一步研究HBV转录激活蛋白HBx、MHBst78MHBst155对宿主细胞信号转导通路的影响奠定基础。     

大鼠维生素D受体蛋白表达载体的构建及遗传性高钙尿性结石大鼠十二指肠维生素D受体cDNA序列分析

目的构建大鼠维生素D受体（VDR）蛋白表达载体，测定并分析遗传性高钙尿性结石（GHS）大鼠VDRcDNA序列。方法采用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法扩增含VDR蛋白编码基因序列，将扩增产物克隆至真核表达载体pcDNA3．1／Zero（＋），对5只GHS大鼠和4只正常尿钙对照（NC）大鼠十二指肠VDRcDNA序列进行测序分析。结果琼脂糖凝胶电泳示PCR扩增产物碱基数目与目的片段大小一致。对重组质粒的分析表明，插入片段的序列与发表的VDR基因编码序列相同。5只GHS鼠和4只NC鼠肠VDR cDNA序列均有3个相同的位点不同于已公布的大鼠肠VDR cDNA序列：在256bp位点：C取代G；569bp位点：G代替A；1658位点：A替代G。另外，GHS鼠在1795bp位点发生改变，G取代A，而NC鼠则无改变。结论大鼠维生素D受体蛋白编码序列被成功地克隆至表达载pcDNA3．1／Zero（＋）上。GHS大鼠基因编码区的序列组成同NC大鼠相一致，但GHS鼠1795bp位点的碱基改变未见于NC鼠。     

第二届哈尔滨国际消化内镜及消化疾病学术研讨会通知

结肠镜检查是大肠疾病最可靠、有效的检查方法，我院自1997年10月至2002年9月，以单人操作法行结肠镜检查1832例次，现就单人操作手法探讨如下。     

用翻边瓶塞制作气管切开堵管用具

常规气管切开患者在拔管前先试行堵管，观察24～48h无呼吸困难可拔管，但无论是塑料、硅胶还是金属气管套管，目前都没有配备成套的堵管用具，给堵管带来不便。临床常用的堵管用具有软木塞、胶布缠绕棉棒等，以上方法存在制作麻烦、安全性不强、不够美观等缺陷。我科在临床实践中就地取材，利用玻璃瓶翻边瓶塞制作气管套管堵管用具，取得较好的效果，报告如下。