基于微流控核酸等温扩增的 登革病毒现场快速检测技术研究

[摘要]?目的?结合环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification, LAMP）和微流控芯片技术，建立一种适合现场快速检测登革病毒的方法。方法?利用RT-LAMP，针对登革病毒基因组中3’非编码区中特异性序列进行扩增，建立基于微流控芯片技术的LAMP检测方法，优化检测体系，并对该方法的灵敏性和特异性进行评估。结果?基于LAMP 和微流控芯片技术的登革病毒检测方法，通过对病毒模板进行扩增，发现与其他病毒无交叉反应，特异性良好；同时，结果显示该方法对登革病毒检测灵敏性可达61.2 pg/μl，与实时荧光定量PCR仪所达到的检测灵敏性一致。结论?基于LAMP和微流控芯片技术的登革病毒检测方法具有操作简单、快速、对设备要求低等优势,并且灵敏性、特异性均较好，是一种便于开展现场快速检测的方法。     

一腓骨肌萎缩症家系临床及基因分析

目的分析一腓骨肌萎缩症家系的临床表现及不同基因检测方法的特点。方法收集一CMT家系8名成员临床资料,并应用等位基因特异性PCR-双酶切方法及多重连接依赖的探针扩增技术(MLPA)检测PMP22基因突变情况,同时选择60名性别、年龄无明显差异的健康人做为对照组。结果该家系中患病者以行走不稳、跨阈步态,伴有弓形足为主要临床表现。该家系中5名成员经等位基因特异性PCR-双酶切及MLPA方法均检测出PMP22基因重复序列,其中出现临床症状的有4名(Ⅱ3、Ⅱ9、Ⅱ11、Ⅲ7),未出现临床症状但基因检测结果示PMP22基因重复序列的为携带者有1名(Ⅲ5),家系中余3名成员及对照组60名均未见重复序列。结论基因检测在明确CMT诊断中起重要作用,且MLPA法筛查基因时操作更简便、灵敏度更高、特异性更好。     

临床基因扩增检验实验室信息管理系统的建立及应用

借助电子计算机强大的数据处理功能和文本编辑功能,建立一套监测、记录和分析测定前、中、后全过程中各个环节和步骤等一系列质量活动信息流的管理系统,以避免检测过程中假阳性和假阴性事件的发生,以及应对临床及病人抱怨的客观举证。     

人端粒酶RNA的cDNA探针制备及其对胃粘膜细胞端粒酶RNA表达的检测

目的 建立人端粒酶RNA表达的检测方法。方法 制备人端粒酶RNA，(human telomeraseRNA，hTR)的cDNA探针，分别应用RNA斑点杂交与端粒重复序列扩增法(TRAP)分析检测不同胃粘膜的端粒酶RNA的表达与端粒酶活性。结果 人端粒酶RNA的cDNA探针制备成功。18例活检胃癌组织及45例手术胃癌组织RNA斑点杂交检测的阳性率均为l00％，相应TRAP分析的阳性率分别为88．89％、86．67％，低于RNA斑点杂交(P＜0．05)。同时RNA斑点杂交结果提示在非癌胃组织中随着肠化程度增高人端粒酶RNA表达也增强。结论 RNA斑点杂交检测人端粒酶RNA，具有高度的敏感性和特异性，弥补了TRAP分析敏感性不足的缺点。     

噬菌体生物扩增法对结核性胸膜炎的诊断价值

目的 探讨噬菌体扩增法对结核性胸膜炎的临床诊断价值。方法 采用上海金浩科技发展有限公司提供，英国BIOTEC（生物技术实验室有限公司）生产的FASTPlaque试剂盒，并执行其实验流程和结果判读标准。结果 123例胸腔积液患者中，临床上符合目前结核性胸膜炎的诊断标准且抗痨治疗有效的患者共108例，其中只有44例噬菌体生物扩增法呈阳性；病理学确诊恶性和其他性质的胸腔积液共15例，其中7例出现了假阳性。噬菌体扩增法诊断结核性胸膜炎的灵敏度为40．74％，特异度为53．33％，阳性预测值为86．27％，阴性预测值为11．11％。     

淋病的诊治及对抗生素的敏感性分析

进入20世纪80年代，我国早在60年代初就已消灭的性病开始蔓延，发病人数以淋病居多，以往青霉素是治疗淋病的有效药物，但近年青霉素耐药菌株的出现和流行给淋病的防治带来了困难。临床上由于延误治疗诊断也使病情加重。淋病诊断必须结合病史、临床症状以及实验室检查进行综合分析才能做出正确诊断，一些男性淋病患者仅有少量病原体，尤其是耐药多种抗生索的淋病双球菌，主要潜在后尿道皱襞及前列腺内等，这些病人以前尿道分泌物检查、培养等不易查出阳性结果，就是前列腺按摩液作淋球菌培养也难成功。而前列腺按摩液淋菌PCR扩增技术，通过体外扩增检测，靶基因成百倍地物异性扩增人们所需要的某段DNA片断，1小时即可将所需的DNA序列放大月百万倍，使患者得到正确诊断。     

Spinal arteriography: a primer

Spinal arteriography is an esoteric procedure that is seldom nerformed by peripheral interventionalists. This presentation is intended to outline some of the essential points that the interventionalist performing the procedure should be aware of,especially about spinal dural arierioyenous fistulae (SDAVF).     

脐血CD34~+细胞体外短期培养扩增研究

为寻找更有效的体外扩增脐血CD34 + 细胞的造血细胞因子组合 ,采集健康产妇脐带血 ,用免疫磁珠法分选CD34 + 细胞。采用SCF、FLT3 L、TPO和IL 34种具有早期作用的细胞因子的不同组合进行脐血CD34 + 细胞短期无血清液体培养 ,观察培养前后有核细胞、CD34 + 细胞、CD34 + /CD38- 细胞、CFU GEMM、CFU GM和BFU E数量的变化。结果在 3种不同的细胞因子组合中 ,同时应用SCF、FLT3 L、TPO和IL 34种细胞因子培养 7d的扩增效果最好。突出的发现是在这种条件下CD34 + /CD38- 细胞亚群达到平均 1 97.9倍的扩增效果。提示 :SCF、FLT3 L、TPO和IL 34种细胞因子是脐血CD34 + 细胞体外扩增理想的细胞因子组合