地高辛标记探针检测重组白细胞抑制因子-水蛭肽嵌合蛋白宿主DNA残留量的研究

重组白细胞抑制因子-水蛭肽嵌合蛋白(recombinant neutrphil inhibitory factor and hirulog hybrid,TNHH)是一种通过基因工程技术改造的新型嵌合蛋白,临床上可用于急性脑栓塞后的脑组织损伤修复,减少脑水肿,防止微小血栓形成从而改善微循环,是一种有前景的心脑血管疾病治疗创新药物,目前已进入临床I、II期研究[1-2]。由于在生产过程     

天麻素生物合成的研究进展

天麻素是我国名贵中药材天麻中的一种主要活性成分,具有降血压、抗癫痫、抑制肿瘤、保护神经等多方面的药理活性。随着市场对天麻素需求的不断增长以及传统获取方法固有的问题,导致急需新的方法来解决天麻素生产实际中面临的各项困难。生物合成法是一种有别于传统获取法的新方法,已在天麻素获取上取得了较大进展和成果,故现阶段有必要从天麻素生物合成途径、植物转化法和微生物转化法3个方面,对天麻素生物合成进行系统地阐述,从而为进一步改进和完善天麻素生产方法,以满足人们对其不断增长的需求提供有价值的参考。     

DNA疫苗安全性探讨

DNA疫苗安全性问题主要来自DNA疫苗元件与疫苗工程菌，包括DNA疫苗与细胞基因组整合、接种后诱导宿主产生免疫耐受和自身免疫疾病、质粒DNA非目的基因编码蛋白所带来的负作用、抗性基因的转移问题、疫苗中内毒素和抗生素及其他有害物质残留问题、宿主菌体内DNA复制与纯化过程中基因稳定性问题。     

结核分支杆菌14KDa蛋白的基因克隆、表达、纯化及其抗原性的研究

目的基因克隆、表达、纯化结核分枝杆菌14KDa蛋白,研究其抗原性,评价其在血清学诊断中的价值。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,应用PCR技术扩增14KDa蛋白基因片断,将其插入到高效表达载体PET-22b（＋）上,构建重组质粒PET-22b（＋）/14KDa,重组质粒在大肠杆菌中由IPTG诱导表达,表达产物经金属离子鳌合亲和层析方法纯化,免疫印迹和酶联免疫吸附（ELISA）试验分析重组蛋白的抗原性。结果构建了具有正确基因序列的14KDa蛋白重组质粒,在大肠杆菌BL21（DE3）中以可溶性蛋白形式表达,重组蛋白的表达量占菌体蛋白的40.8%,经过一步金属离子鳌合亲和层析后得到纯度为94.3%的目的蛋白。免疫印迹试验结果表明该蛋白能与羊抗结核血清发生特异免疫结合反应。应用ELISA方法对结核血清参考品进行检测,敏感性和特异性分别为75.6%和96.0%。结论获得了能高效表达14KDa蛋白的大肠杆菌工程菌,目的蛋白以可溶性形式表达,该重组蛋白具有良好的免疫原性,可望成为结核血清学的诊断抗原之一。     

高密度培养工程菌生产谷肽甘肽

分析了一株具有高ＧＳＨ合成活性的重组大肠杆菌在摇瓶培养中对葡萄糖的利用能力,继而在２Ｌ发酏罐中研究了不同流加方式对该工程菌高密度培养生产ＧＳＨ的影响。结果发现,采用指数流加模式,发酵２５ｈ,细胞密度（干重）、ＧＳＨ总量和生产强度可分别达到８０ｇ／Ｌ,８８０ｍｇ／Ｌ和３．２ｇ／（Ｌ·ｈ）。     

大肠杆菌工程的高密度培养

本文列举了大肠杆菌工程的高密度培养技术在重组异源蛋白的工业大生产中所处的重要地位，阐述了大肠杆菌进行高密度培养所需克服的主要障碍及其成原因，总结了高密度培养技术在近年来所取的一些进展。     

以基因重组技术开发木聚糖类半纤维素资源

木聚糖类半纤维素是一类取之不尽而又亟待开发利用的碳水化合物，经生物降解后所产生的木糖和少量其它单糖，可以用作基本碳源生产各种发酵产品，包括有机酸、氨基酸、单细胞蛋白、糖醇、工业酶类、溶剂或燃料醇。有关半纤维素酶及其基因的研究已经积累了很多资料，其中包括木聚糖酶、木糖苷酶、阿拉伯糖苷酶、葡萄糖醛酸酶、木聚糖乙酰酯酶以及它们的基因。通过基因重组技术可以使发酵工程菌获得降解半纤维素的能力，或者把能有效降解半纤维素的微生物构建成发酵工程菌，从而把半纤维素转化为所需求的生物工程产品。     

G—CSF工程菌包涵体洗涤方法探讨

Ｇ－ＣＳＦ工程菌发酵后，经超声破碎和酶裂解后，分别用尿素、盐酸胍、ＦｒｉｔｏｎＺＸ－１００洗涤包涵体，并对其结果进行比较，寻找出一条比较适合工业化的洗涤方法。