分枝菌酸诱导巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立及鉴定

目的探讨分枝菌酸(MA)包被聚苯乙烯微球诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞泡沫细胞化的条件及特性。方法将RAW264.7细胞分为空白对照组和分别包被(0、25、50、75、100)μg/mL MA的聚苯乙烯微球实验组,分别将细胞与聚苯乙烯微球混匀、共同孵育24、48、72 h、5 d和8 d后,油红O染色后显微镜下观察细胞形态,采用总胆固醇试剂盒和游离胆固醇试剂盒测定各组泡沫细胞内胆固醇酯的含量,采用MTT法检测细胞增殖水平。结果当包被MA浓度为75μg/mL、吞噬时间为24 h时,RAW264.7能形成典型的泡沫细胞,其细胞内胆固醇酯相对含量为60.98%±1.32%;随着吞噬时间延长,形成泡沫细胞所需的MA的浓度逐渐递减;且随着细胞泡沫化程度增加,细胞增殖活力逐渐减弱。结论 MA包被聚苯乙烯微球可快速诱导巨噬细胞形成泡沫细胞,MA浓度与细胞泡沫化程度呈正相关,且有时间依赖性。     

SMIS检测分枝菌酸在分枝杆菌菌种鉴定中的作用

目的 评估用SMIS检测分枝菌酸在分枝杆菌菌种鉴定中的作用.方法 收集北京市结核病胸部肿瘤研究所2007年1-12月的分枝杆菌118株,通过PNB培养基初筛,其中结核分枝杆菌复合群25株,非结核分枝杆菌93株.同时用测序方法和SMIS分析分枝菌酸方法鉴定118株分枝杆菌,以16S rDNA和16-23S rDNA ITS测定作为菌种鉴定的标准,评估利用SMIS分离分枝菌酸鉴定分枝杆菌菌种的符合率及一致性;并验证以上两种方法鉴定结果分别与PNB初筛分结核分枝杆菌复合群和非结核分枝杆菌结果的符合率及一致性.结果 SMIS与测序鉴定分枝杆菌相比的符合率为92%(108/118),其中结核分枝杆菌复合群鉴定的符合率为95%(35/37),非结核分枝杆菌为90%(73/81),Kappa分析显示两种方法鉴定结果的一致性很好(Kappa=0.%).回顾验证初筛结果显示,SMIS与PNB培养基方法鉴定结果符合率90%(106/118),一致性较好(Kappa=0.73);测序方法与PNB培养基方法鉴定结果符合率也为90%(106/118),一致性较好(Kappa=0.74),但有11株测序和分枝菌酸菌种鉴定方法结果相同的结核分枝杆菌复合群与PNB实验结果不一致.结论 利用分枝菌酸对临床分离的分枝杆菌进行菌种鉴定是一种快速、简便和准确的方法,对处置应急和突发公共卫生事件中的分枝杆菌菌种鉴定具有一定的参考价值,是分枝杆菌菌种多相鉴定策略的重要组成部分.

Abstract：

Objective To evaluate the usefulness of mycolic acid for identification of Mycobacterium species using SMIS. Methods One hundred and eighteen clinical Mycobacterium isolates collected from Beijing Tuberculosis and Thoracic Tumor Research Institute through whole year of 2007 were analyzed. The 118 isolates contain 25 isolates of Mycobacterium tuberculosis and 93 non tuberculosis Mycobacterium identified by PNB method. Mycolic acid analysis using SMIS is evaluated for identification of a broad range of Mycobacteria in comparison with 16S rDNA , 16-23S rDNA ITS sequencing to measure the concordance rate and agreement, and verify the concordance rate and agreement among results of mycolic acid, sequencing and PNB in identifying Mycobacterium tuberculosis and non tuberculosis Mycobacterium. Results The concordance rate between mycolic acid method analysis and DNA sequencing is 92% ( 108/118), of which concordance rate in Mycobacterium tuberculosis complex and non tuberculosis Mycobacterium are 95% (35/37) and 90% (73/81) respectively, agreement of both is great( agreement Kappa value is 0. 96). Through retrospective analysis, the concordance of results between SMIS and PNB method analysis is 90% (106/118)and agreement is well( agreement Kappa value is 0. 73 ), the concordance of results between sequencing and PNB method analysis is also 90% ( 106/118 ) and agreement is well (agreement Kappa value is 0. 74 ),despite the identification results of 11 isolates by PNB method are discordant. Conclusion Mycolic acid analysis by SMIS enables rapid identification of a broad range of clinical Mycobacterium species, which could play an important role in polyphasic identification of Mycobacterium species.     

基于分枝菌酸分析法鉴定分枝杆菌临床株

非结核分枝杆菌(NTM)病具有与结核病临床表现相似的全身中毒症状和局部损害,在无菌种鉴定的情况下,与结核病难以区别。NTM与TB对抗结核药物的敏感性大不相同,不同的NTM对药物的敏感性也不相同,根据不同菌种化疗方案应有所不同。     

结核分枝杆菌耐药机制研究进展

结核分枝杆菌(M.tuberculosis,MTB)是结核病的病原菌,是一种抗酸阳性棒状杆菌,主要包括人型、牛型、非洲型和鼠型,其中对人致病的主要是人型[1]。本菌可侵犯全身各组织器官,但以肺部感染最多见。随着抗结核药物的不断发展和卫生生活状况的改善,结核病的发病率和死亡率曾一度大幅下降,但近10年来,全球结核病疫情死灰复燃。     

18种分枝杆菌标准菌株的分枝菌酸指纹谱比较

目的 用本实验室所建立的高效液相色谱分枝菌酸分析方法，构建18种分枝杆菌标准菌株的分枝菌酸指纹谱库，并对该库的分枝菌酸指纹谱进行比较。方法 标准菌株按常规方法，分别转种到改良罗氏培养基斜面上培养，待菌落形成后，用化学法从培养物中提取细胞壁的分枝菌酸，经皂化、酸化和衍生后，制备出良好的分析样品，用于色谱检测分析。结果 成功地构建了18种分枝杆菌标准菌株的分枝菌酸指纹谱库，该指纹谱的重复性日内变异系数为0．20％-0．83％，均〈1％。每种分枝菌酸的指纹谱都具有各自的特征，峰形也有一定规律，根据峰形的特点将其分为3类：A类（单组峰）包括结核、牛、戈登、爱知、堪萨斯、海分枝杆菌和卡介苗，B类（2组峰）包括蟾蜍、土地、新金色、不产色和浅黄分枝杆菌，C类（3组峰）包括胞内、鸟、金色、偶然、副偶然、脓肿和耻垢分枝杆菌。结论 依据18种分枝杆菌标准菌株的分枝菌酸指纹谱，即可对分枝杆菌菌种进行鉴定。卡介苗与牛分枝杆菌的分枝菌酸指纹谱的峰形存在很大差别，该现象很可能作为结核病潜伏感染和分枝杆菌耐药机制的一种新理论依据。     

结核病发病原因

结核分枝杆菌复合群包括结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌和田鼠分枝杆菌,引起人类疾病的主要是结核分枝杆菌。结核分枝杆菌大小为(0.3～0.6)um×(1～4)um,细小而略弯,两端略钝。抗酸染色是其重要     

胞内分枝杆菌临床株分枝菌酸指纹谱变异性研究

近年来,非结核分枝杆菌(NTM)病较常见,分枝杆菌菌种鉴定不仅在流行病学上,而且在临床诊断和治疗上均有重要意义[1-3]。在前期工作的基础上[4-5],用本实验室所建立的HPLC分析分枝菌酸(Mycolic acids,MA)的方法及所构建的50种分枝杆菌标准菌株的MA HPLC指纹谱库,鉴定了部分分枝杆...     

结核分枝杆菌中的分枝菌酸

肺结核是一种由结核分枝杆菌感染引起的呼吸道传染病,比较容易在密集的人群中传播而导致公共卫生问题。20多年前肺结核已经得到了基本控制,但是,近年来结核病发病率逐年上升,死灰复燃,又成为全球范围内潜在的致病源,每年可以导致200万人死亡。由于无法提供充足的临床药物及不正...     

50种分枝杆菌标准株分枝菌酸指纹谱特征性研究

目的:构建50种分枝杆菌标准菌株的分枝菌酸(MA)指纹图谱库,并对该库指纹图谱进行比较研究.方法:选择50种标准分枝杆菌,经过接种、培养、皂化及酸化,提取到MA.MA衍生化后,采用高效液相色谱法(HPLC)进行分析,得到相应的指纹图谱.依据谱图的峰族数、相对保留时间及相对峰高详细分析与比对其特征性,并对所选92个临床分离株用本法进行鉴定.结果:通过对分枝杆菌MA的色谱分析,构建了50种分枝杆菌标准菌株的MA指纹谱库.图谱可分为3组,即单族峰型、两族峰型、三族峰型.每组分别包括10、23及17种.在92个临床分离株中,有89株的鉴定结果与已知结果一致,一致率为96.74%.结论:本研究所构建的指纹图谱全部具有特征性,对分枝杆菌的种间鉴定具有一定的参考价值.     

高效液相色谱法分析分枝菌酸鉴定分枝杆菌

分枝杆菌菌种的鉴定不仅在流行病学上十分重要，在临床诊断和治疗上均有重要意义。目前分枝杆菌菌种的传统鉴定方法复杂、费时，需要40-60d．影响临床诊断和治疗。PCR方法结果假阳性高。近年来，美国的一些临床实验室采用高效液相色谱法分析分枝菌酸(Mycolic acid，na)鉴定分枝杆菌。该方法目前国内未见文献报道，我们根据有关的文献资料建立了具有自己技术特点的色谱法分析方法，