补体对免疫沉淀的抑制作用与小儿肾脏疾病的关系

以辣根过氧化物酶（PO）和抗-PO作为免疫沉淀中的抗原和抗体，用光电比色法，对78例小儿肾脏疾病血清补体对免疫沉淀的抑制作用（IIPC）进行了研究，并同时检测补体成分C3、C4。结果，正常对照IIPCOD值为0．505±0．085，急性肾小球肾炎（0．137±0．108）显著降低（P＜0．001）；慢性肾小球肾炎（0．470±0．053）改变不明显（P＞0．05）；肾病综合征（0．401±0．038）明显低下（P＜0．05）。IIPC低下的发生率依次为急性肾小球肾炎（83％）、肾病综合征（43％）、慢性肾小球肾炎（32％）。表明小儿肾小球疾病时IIPC大多降低并与疾病的活动性有关。因此认为IIPC低下在肾脏病的发生和发展中起一定作用。     

染色质免疫沉淀技术在人巨细胞病毒即刻早期蛋白研究中的应用

染色质免疫沉淀(ChIP)技术是目前研究体内DNA与蛋白质相互作用的最好方法,该技术不仅可以检测体内反式因子与DNA的动态作用,还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。在研究人巨细胞病毒及其他病毒的基因调控和病毒蛋白与宿主细胞DNA相互作用方面,该技术亦有很好的应用前景。利用该技术研究表明,人巨细胞病毒IE1-72和IE2-86蛋白对组蛋白乙酰化的影响可能是调控病毒转录的重要机制之一。     

CTLA-4在重症肌无力患者中的表达及其多态性导致的无效转录研究

目的 探讨重症肌无力(MG)患者细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)的表达状况及由CTLA-4基因启动区多态性导致的不同遗传易感性机制。方法 ELISA法测定MG患者血清中sCTLA-4的水平；限制性片段长度多态性分析用于检测启动区-1772、-1661位点的多态性；转录因子NF-1和c／EBPβ结合位点通过染色质免疫沉淀实验(CHIP)得以验证。结果 MG患者血清sCTLA-4的表达水平与等位基因的突变相关，携带T→C^1772突变基因的患者可表达高水平的sCTLA-4。TC^1772基因型的频率在MG患者尤其是胸腺瘤亚组明显高于对照组，而G^-1661等位基因和GG^-1661基因型的频率在MG患者则显著降低。当-1772位点的等位基因是T而非C时，存在转录因子NF-1结合位点；同样，当-1661位点的等位基因是G而非A时，存在转录因子c／EBPβ结合位点，刀豆蛋白A(Con A)、植物血凝素(PHA)能促进NF-1和c／EBPβ的这种位点特异性转录活性。结论 MG患者CTLA-4表达异常，启动区C／T^1772和A／G^-1661多态性可导致无效转录，T→C^1772的突变能影响基因的剪接，干扰蛋白的表达和功能，阻止了负性调节信号的传递而致发病。     

β淀粉样肽22-35单克隆抗体的制备和应用

目的制备稳定分泌Aβ22-35单克隆抗体的杂交瘤细胞,以Aβ22-35单克隆抗体建立Aβ检测方法。方法以人工合成的Aβ22-35连接匙孔槭血蓝蛋白,免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,制得能稳定分泌Aβ22-35单克隆抗体的杂交瘤细胞,采用Western blotting增强化学发光技术观察大鼠脑内Aβ含量。结果得到2株能稳定分泌Aβ22-35单克隆抗体的杂交瘤细胞,Aβ22-35单克隆抗体的Ig亚类为IgG3,青年组和老年组大鼠脑Aβ含量分别为9.8±2.8和13.36±2.65pmol/12mg脑组织。结论制备得到的Aβ22-35单克隆抗体特异性强,效价高,测得的老年大鼠脑Aβ含量显著高于青年大鼠。     

K562细胞中N-乙酰基转移酶10的RNA结合图谱分析

目的 对N-乙酰基转移酶10 (NAT10)在人慢性髓原白血病细胞系K562中的RNA结合图谱进行描绘。方法 利用紫外交联免疫沉淀技术(eCLIP)捕获NAT10在K562细胞中结合的转录本集合,对其进行高通量测序,并对数据进行生物信息学分析。通过peak-calling分析和对peaks进行注释,鉴定NAT10结合位点。并对所结合基因的类型和结合区域进行分析。进一步通过基因功能富集分析,探索其结合的RNA的功能。结果 NAT10主要结合于蛋白质编码基因的转录本,并在3′非翻译区域(3′UTR)富集,预测显示其结合的转录本与DNA损伤修复等功能相关。结论 NAT10可能通过与DNA损伤修复相关信使RNA(mRNA)的3′UTR区域结合,实现基因表达调控作用。     

乙型肝炎患者补体对特异性免疫沉淀的抑制作用

目的 了解乙型肝炎患者补体介导ＨＢｓＡｇ特异性免疫沉淀的抑制作用（ＩＩＰＣ）氏下在乙型肝炎发病中的作用。方法 采用ＰＥＧ沉淀法测定患者血清循环免疫复合物（ＣＩＣ）、以ＨＢｓＡｇ和抗－ＨＢｓ制备特异性免疫复合物（ＩＣ）,加入补体（血清）抑制其沉淀,并定量检测定上清中的ＨＢｓＡｇ,确定ＩＩＰＣ功能,同时用单用琼脂扩散法测定Ｃ３、Ｃ４。结果 患者组ＣＩＣ检出阳性率为４５．０％￣８２．６％,均显著高于正常     

甲基化DNA免疫沉淀-荧光实时定量PCR检测人精浆游离DNA睾丸和附睾特异性甲基化启动子

目的:建立检测精浆游离DNA(cfsDNA)启动子甲基化水平的甲基化DNA免疫沉淀-荧光实时定量PCR(MeDIP-qPCR)方法。方法:提取精液参数正常(6例)和输精管结扎(6例)男性的cfsDNA,将两组不同个体的cfsDNA分别进行混合,超声处理后形成DNA片段,通过MeDIP分离甲基化DNA片段,然后用qPCR方法检测启动子甲基化水平。结果:精液参数正常组的PRAME、PEG10、MORC1、GML、HOXA5、DNMT3L、SNURF、MSH4、DAZ1和CLPB启动子甲基化水平分别为14.93%、2.64%、0.69%、2.66%、17.50%、21.10%、5.98%、2.28%、13.50%和3.86%,明显低于输精管结扎组的121.25%、73.62%、16.25%、42.90%、76.74%、112.40%、59.79%、25.85%、91.90%和64.53%。其中,PRAME、MORC1、GML、HOXA5、DNMT3L、SNURF、MSH4和DAZ1等8个启动子MeDIP-qPCR的检测结果与启动子甲基化芯片结果一致。结论:通过MeDIP-qPCR方法可以定量检测到cfsDNA中的特异性启动子甲基化,为确定cfsDNA中睾丸和附睾特异性甲基化启动子提供了有效途径。     

人大肠癌细胞PRL-3基因启动子Snail结合位点的初步研究

目的 确定转录因子Snail可与PRL-3基因启动子区结合.方法 应用生物信息学方法获得PRL-3基因启动子区域,并对其潜在的Snail结合位点进行预测,进一步应用Snail抗体染色质免疫共沉淀技术结合PCR技术检测PRL-3基因启动子序列,以确定转录因子Snail可与PRL-3基因启动子结合.结果 应用TRED在线分析系统确定PRL-3基因的启动子区域位于PRL-0基因上游-700 bp至299 bp之间,在该启动子区域存在多个转录因子如Snail、n-MYC、ARNT、E74A、NF-kappaB、NRF-2及AML-1等的结合位点;在启动子区域的-500 bp至-451 bp之间存在Snail结合的核心寡核苷酸序列CACCTG,在其他多个区域存在多个类似这一核心序列的DNA序列;应用染色质免疫沉淀技术结合PCR扩增的方法对人大肠癌细胞株SW480细胞进行分析,发现Snail可与人大肠癌细胞株SW480 PRL-3基因的启动子区域的DNA片断结合.结论 转录因子Snail可与人大肠癌细胞SW480 PRL-3基因启动子结合,参与PRL-3基因的调控.     

乙型肝炎患者补体对特异性免疫沉淀的抑制作用

目的　了解乙型肝炎患者补体介导ＨＢｓＡｇ特异性免疫沉淀的抑制作用（ⅡＰＣ）低下在乙型肝炎发病中的作用。方法　采用 ＰＥＧ沉淀法测定患者血清循环免疫复合物（ＣＩＣ）,以 ＨＢｓＡｇ和抗－ＨＢｓ制备特异性免疫复合物（ＩＣ）,加入补体（血清）抑制其沉淀,并定量测定上清中的ＨＢｓＡｇ,确定ＩＩＰＣ功能,同时用单向琼脂扩散法测定Ｃ３、Ｃ４。结果　患者组ＣＩＣ检出阳性率为４５．０％～８２．６％,均显著高于正常组Ｐ＜０．０５～０．００１,正常组ⅡＰＣ后上清中ＨＢｓＡｇ浓度为 ０．４５±０．５８ｎｇ,急性肝炎、慢活肝、重症肝炎均显著降低（Ｐ＜ ０．００１）,肝硬化组亦明显降低（ Ｐ＜ ０ ．０５）,Ｃ３、Ｃ４在患者组亦有不同程度的降低。结论　乙型肝炎患者血清中存在特异性ＩＣ,患者ⅡＰＣ明显降低在乙型肝炎的发病中有一定作用,补体成分的减少与ⅡＰＣ的降低有一定关系。